口蹄疫病毒前导蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

前导蛋白(L~(pro))是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗L~(pro)的抗体以研究L~(pro)的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达,所获得重组His-L~(pro)主要以包涵体形式存在,利用Ni-NTA柱纯化获得了高纯度的His-L~(pro),将His-重组L~(pro)与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备了高效价的L~(pro)兔多克隆抗体血清。通过免疫荧光试验(IFA)、免疫印迹试验(WB)检测L~(pro)兔多克隆抗体血清的反应原性。结果显示,该多抗血清能够特异性识别FMDV感染BHK21细胞后表达的L~(pro),表明本研究制备的L~(pro)多抗血清具有很好的反应原性,为深入研究L~(pro)功能及其拮抗宿主天然免疫的作用机理奠定了基础。