| 猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 常天明,孙元,李宏宇,贺番,李淼,黄俊华,仇华吉. 猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备[J]. 中国兽医科学, 2010, 40(2) |
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| 作者姓名： | 常天明 孙元 李宏宇 贺番 李淼 黄俊华 仇华吉 |
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| 作者单位： | 常天明,孙元,李宏宇,李淼,黄俊华,仇华吉(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001);贺番(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;内蒙古农业大学,动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018) |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)项目 |
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| 摘 要： | 以含有猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA的重组质粒pOKShimen为模板,经PCR扩增获得NS3基因,利用原核表达载体pMAL-c2X、pET32a以及杆状病毒表达载体pFastBacH T B表达CSFV石门株NS3基因,获得3种重组蛋白:MBP-NS3、His-NS3和rNS3。Western-blot分析及间接免疫荧光试验证实,这3种不同载体表达的NS3蛋白均能被猪瘟阳性血清所识别。利用直链淀粉树脂柱对重组蛋白MBP-NS3进行纯化后,用其免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA筛选,获得2株能稳定传代并分泌针对抗CSFVNS3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为1D10和1H10。Western-blot分析及间接免疫荧光试验结果证明,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均可识别CSFVNS3蛋白。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 NS3基因 单克隆抗体 |
Expression of NS3 gene of classical swine fever virus and preparation of monoclonal antibodies against NS3 protein |
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| CHANG Tian-ming,SUN Yuan,LI Hong-yu,HE Fan,,LI Miao,HUANG Jun-hua,QIU Hua-ji. Expression of NS3 gene of classical swine fever virus and preparation of monoclonal antibodies against NS3 protein[J]. Chinese Veterinary Science, 2010, 40(2) |
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| Authors: | CHANG Tian-ming SUN Yuan LI Hong-yu HE Fan LI Miao HUANG Jun-hua QIU Hua-ji |
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| Affiliation: | CHANG Tian-ming1,SUN Yuan1,LI Hong-yu1,HE Fan1,2,LI Miao1,HUANG Jun-hua1,QIU Hua-ji1(1.National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Division of Swine Infectious Diseases,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150001,China,2.College of Animal Science , Medicine,Inner Mongolia Agricultural University,Huhhot 010018,China) |
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| Abstract: | Using the recombinant plasmid pOKShimen as template,the NS3 gene was amplified by PCR.Three different recombinant proteins of MBP-NS3,His-NS3 and rNS3 were expressed from the classical swine fever virus NS3 gene of Shimen strain in vectors of pMAL-c2X,pET32a and pFastBac HTB,respectively.Indirect immunofluorescence assay(IFA) and Western-blot analysis showed that the proteins were successfully expressed.BALB/c mice were immunized with the purified recombinant fusion protein MBP-NS3.The spleen cells of mouse... |
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| Keywords: | classical swine fever virus NS3 gene monoclonal antibody |
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