斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在酶标抗体（ＨＲＰ－Ｆ＿（２３））稀释液中加入４％（ｗ／ｖ）聚乙二醇（ＰＥＧ）６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬ１５Ａ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ＿（４９０）值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法具有实际应用价值。ＰＢＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有普遍意义。     

貂病毒性肠炎牛睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１～５ｍｌ．未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱毒株具有良好的安全性、免疫原性和遗传稳定性。     

鸡传染性支气管炎免疫扩散试验研究

鸡传染性支气管炎免疫扩散试验研究范根成，杜元钊，朱万光，刘佩兰（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）鸡传染性支气管炎（ＩＢ）诊断方法很多，免疫琼脂扩散试验（ＡＧＰ）是其中之一。Ｗｏｅｒｎｌｅ等用感染鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）制备出ＡＧＰ抗原，但由于ＣＡＭ...     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ－ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ、直接萤光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

应用酶联免疫吸附试验检测鸡毒霉形体卵黄抗体

应用酶联免疫吸附试验检测鸡毒霉形体卵黄抗体郭建华陈明勇陈德威（中国农业大学实验动物所北京１０００９４）血清平板凝集试验（ＳＰＡ）、血凝抑制试验（ＨＩ）及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）已用于鸡毒霉形体（ＭＧ）血清抗体的检测，但这些方法都需要采集血清，使...     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

鸡传染性鼻炎血清抗体间接ELISA诊断试剂盒的研究

鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的鸡上呼吸道传染病,有Ａ、Ｂ、Ｃ３种血清型,检测鸡血清中Ｈｐｇ抗体的方法有血清平板凝集试验（ＳＰＡ）、琼脂扩散试验（ＡＧＰ）、红细胞凝集抑制试验（ＨＩ）、间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）和阻断ＥＬＩＳＡ（Ｂ?..     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。     

水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。     

用琼脂扩散试验检测滤纸片血样中小鹅瘟抗体

用琼脂扩散试验检测滤纸片血样中小鹅瘟抗体田晋红（四川畜牧兽医学院荣昌６３２４６０）近年来，国内外运用滤纸吸取血样进行某些疫病的抗体检查，这种方法不需要分离血清，且采血方便、操作简单、易于运送和保存。本试验利用琼脂扩散试验（ＡＧＰ）检测滤纸片血样中的小...     

应用ELISA检测山羊关节炎－脑炎抗体

应用ＥＬＩＳＡ检测山羊关节炎－脑炎抗体王治才，李建军，马文戈，成静，范元良，胡泽渊，林杰，龚成润（新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐８３００００）山羊关节炎－脑炎（ＣＡ－Ｅ）的抗体检测国内主要用琼脂扩散（ＡＧＩＤ）方法。ＡＤＧＩＤ法虽然简单、特异，但抗...     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

将电镜检查犬冠状病毒阳性的病犬粪便，经ＰＥＧ沉淀、蔗糖线性梯度超速离心，用提纯的抗原免疫豚鼠制备抗血清，经饱和硫酸铵粗提、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ５０层析柱纯化提取ＩｇＧ。将提纯的ＩｇＧ与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了诊断犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。对收集的４５份粪便样品进行检测，并以电镜检查作为旁证，证明该法具有特异、敏感的特点，可在４小时内报告结果。     

鸡病毒性关节炎病毒的提纯结构蛋白及其免疫活性分析

采用差速离心和蔗糖递度超速离心法提纯了鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｈ＿（９３０７）株，并用ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳技术分析其结构蛋白，该病毒主要由８条多肽组成（ＶＰ＿１～ＶＰ＿８），它们的分子量分别是１４５、１３０、１１５、７２、７０、６５、４２、３９ＫＤ。用Ｗｅｓｔｅｒｎｈｌｏｔｔｉｎｇ免疫印迹技术分析这些多肽的免疫活性，与同源病毒株抗血清出现５条可见的反应带，分别是ＶＰ＿１、ＶＰ＿２、ＶＰ＿４、ＶＰ＿５和ＶＰ＿７；与异源病毒抗血清反应只出现两条可见的阳性反应带，分别是ＶＰ＿１和ＶＰ＿２。     

用间接ELISA检测鸡血清中传染性鼻炎抗体

用间接ＥＬＩＳＡ检测鸡血清中传染性鼻炎抗体陈小玲，陈葵，张培君，龚玉梅（北京市农林科学院畜牧兽医研究所１０００８１）鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的鸡上呼吸道传染病。国内外用于诊断和检测免疫水平的血清学方法主要有玻板凝集试验（ＡＧ...     

应用对流免疫电泳诊断狐和貉细小病毒性肠炎的研究

建立的诊断狐和貉细小病毒性肠炎的对流免疫电泳（ Ｃ Ｉ Ｅ Ｐ） ，抗原最佳稀释度为１∶１６ ，血清最佳稀释度为１∶８ ，最佳电泳时间为６０ ｍｉｎ 。用该方法检测发病早期的病料，阳性检出率达９８ ％ ，对发病１０ ｄ 以上的病料阳性检出率为３０ ％ 。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无交叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快速诊断盒的敏感性比ＡＧＰ的敏感性高３２倍；检测ＩＢＤ阳性血清及蛋黄抗体液时，前者的敏感性比后者高２～１０倍。快速诊断盒的保存期可达２４个月以上。通过在１２个省（市、区）有关单位试用，证明ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒具有快速、简便、特异、灵敏等优点     

斑点ELISA检测鸡IBD抗体方法的建立及其应用

鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）是幼龄鸡的一种高度接触性传染病,是威胁养鸡业发展的主要传染病之一。ＩＢＤ抗体测定最初采用琼脂扩散试验（ＡＧＤ）,后来用中和试验（ＳＮ）。近年来酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）作为一种敏感、定量的诊断方法用于鸡群ＩＢＤ抗体的检测...     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，表明此三种方法均较ＣＩＥ和ＰＡＧＥ法敏感。用这三种方法对成人、婴儿、绵羊羔、山羊羔、仔猪的１２０份腹泻粪样（包括实验室接种材料）进行检测，三种方法的检出率分别为１６．７％、１８．３％、２５％，而ＣＩＥ和ＰＡＧＥ的检出率分别为１２．５％和８％。     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。