应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击鸡的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在酶标抗体（ＨＲＰ－Ｆ＿（２３））稀释液中加入４％（ｗ／ｖ）聚乙二醇（ＰＥＧ）６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬ１５Ａ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ＿（４９０）值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法具有实际应用价值。ＰＢＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有普遍意义。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（ＤｏｔＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１∶４００,ＳＰＡ胶体金探针的工作浓度为１∶８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点。用ＤｏｔＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（ＤｏｔＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管、肺、肾病料,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％;对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,ＩＢＶ阳性检出率分别为３４．５％和３１．０％,阳性符合率为９３．３％（Ｐ＞０．０５）。     

斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ－ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ、直接萤光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

传染性法氏囊病病毒Ⅰ型变异株的分离鉴定及其多价弱毒苗免疫试验

先后在江苏、浙江、四川等８省（区）从临床患传染性法氏囊病的鸡群中采集法氏囊病料，分离到３２个野毒株，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，其中１７株病毒为传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），应用交叉中和试验，将分离毒株分为５个亚型，用ＩＢＤＶⅠ型标准变异株高免血清作中和试验鉴定，其中５个分离毒株有较高中和价，初步定为ＩＢＤＶⅠ型变异株。将其在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上连续传代致弱，与标准Ⅰ型弱毒株联合制成多价弱毒疫苗，免疫试验表明多价弱毒疫苗具有良好的免疫效果，免疫组攻毒１００％保护，对照组攻毒死亡率为９２％     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵连续沉淀法从绵羊棘球蚴囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原Ａ和抗原Ｂ的阳性检出率分别为８３．３３％、８３．３３％和７５％，阴性符合率分别为７２．２２％、８６．１１％和７５％，表明抗原Ａ的敏感性和特异性均优于ＳＰＰＣＦ和抗原Ｂ。     

麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究

从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针斑点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型鉴定为Ⅰ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感，ｐＨ２．０不能灭活病毒，ｐＨ１２可使病毒失去感染性，５６℃作用３小时病毒仍有活性，７０℃１小时可灭活病毒。以上结果表明从麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ理化性质比较稳定，与目前鸡场流行的ＩＢＤＶ极为相似，可能与鸡ＩＢＤＶ同源，提示麻雀可能在ＩＢＤ流行病学中起主要作用。     

贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸及结构蛋白比较研究

采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成。近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的血清Ⅰ型强毒Ｊ＿１Ｃ＿７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电泳迁移率也基本一致。同时观察到毒株间各蛋白带相对百分含量的变化。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，表明此三种方法均较ＣＩＥ和ＰＡＧＥ法敏感。用这三种方法对成人、婴儿、绵羊羔、山羊羔、仔猪的１２０份腹泻粪样（包括实验室接种材料）进行检测，三种方法的检出率分别为１６．７％、１８．３％、２５％，而ＣＩＥ和ＰＡＧＥ的检出率分别为１２．５％和８％。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ），其抗体感作时间Ⅰ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法     

斑点ELISA检测鸡IBD抗体方法的建立及其应用

鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）是幼龄鸡的一种高度接触性传染病,是威胁养鸡业发展的主要传染病之一。ＩＢＤ抗体测定最初采用琼脂扩散试验（ＡＧＤ）,后来用中和试验（ＳＮ）。近年来酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）作为一种敏感、定量的诊断方法用于鸡群ＩＢＤ抗体的检测...     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

口蹄疫病毒12S抗原免疫学性质的研究

用口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）Ａ型１２Ｓ基础免疫，Ｏ型１２Ｓ加强免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，筛迭，得到了一组群特异性单抗。用ＲＰＨＩ，ＡＧＤ，ＥＬＩＳＡ及阻断式和竞争式ＥＬＩＳＡ分析这组单抗得出以下结论：１２Ｓ抗原至少存在一个１２Ｓ独有的型间交叉的群特异性抗原表位，该表位是非中和性抗原表位，免疫原性较低；这组群特异性单抗可与ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ发生不同程度的反应，表明该表位存在于ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ上，但不同血清型的１２Ｓ表位构成存在细微的差别     

抗新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析

以蔗糖反透析浓缩及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ 200层析纯化Ｆ48Ｅ8和ＬａＳｏｔａ新城疫病毒(ＮＤＶ),取纯化的病毒液免疫接种ＢＡＬＢ ｃ小鼠,将小鼠脾细胞与ＮＳ 1骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(ＨＡＴ)培养基选择,间接ＥＬＩＳＡ检测,有限稀释法克隆,筛选出了3株杂交瘤细胞,依次命名为1Ｄ4、1Ｄ5、16Ｇ12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80～100,并能稳定传代,其产生的单克隆抗体重链属于ＩｇＧ1,轻链属于κ链;ＥＬＩＳＡ检测时仅与ＮＤＶ发生特异性反应,而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应,应用这些单克隆抗体对ＮＤＶ分离株进行了分群研究。     

现地马传贫琼扩阴性酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验

在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性马４匹、ＥＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果均为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为阳性，用马传贫病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５０％以上。     

VISIT TO CHINA BY SECRETARY GENERAL OF GERMAN FRIEDRICH-EBERT FOUNDATION

ＶＩＳＩＴＴＯＣＨＩＮＡＢＹＳＥＣＲＥＴＡＲＹＧＥＮＥＲＡＬＯＦＧＥＲＭＡＮＦＲＩＥＤＲＩＣＨ－ＥＢＥＲＴＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮｂｙＬｉＪｉａｎＡｔｔｈｅｉｎｖｉｔａｔｉｏｎｏｆＣＡＦＩＵ，Ｄｒ．ＪｕｒｇｅｎＢｕｒｃｋｈａｒｄｔ，ＳｅｃｒｅｔａｒｙＧ...