犬瘟热病的电镜诊断

我们采用电镜技术,对兰州市一例病犬的病料进行了观察,确诊了该犬患犬瘟热病。病料的处理 选取病变小肠一段,刮取肠粘膜约1g左右置乳钵中,加少量玻璃砂,充份研磨,在低温冰箱冻融2次,用0.1mol PBS液使其成20％的悬液,充份搅匀,用2000r/min离心20分钟,取上清液,再以3500r/min离心1小时,弃去上清液,将沉淀物用1～2滴双蒸水悬浮起。并将其滴附在有Formvar膜的载网上,吸附1分钟,以1％磷钨酸负染1分钟,再用泸纸条吸干多余的水份,干燥后电镜观察、     

家兔豆状囊尾蚴病的免疫预防

试验结果表明:利用超声波粉碎豆状带绦虫虫卵,将所得虫卵碎片悬浮液离心,取其上清液浓缩后作为抗原,加弗氏佐剂免疫家免,其保护率为79％。将豆状带绦虫虫卵在体外进行孵化,然后再将已激活的六钩蚴以皮下注射法免疫家兔,实验免获得抵抗力,其保护率为97.5％。豆状带绦虫虫卵经人工孵化后,以RPMI 1640培养基体外培养15天,然后将所得培养液离心,取其上清液透析、浓缩后作为抗原,加弗氏佐剂免疫家兔,其保护率为73％。     

锥虫病和肝片吸虫病双联诊断液的研制

我们曾先后研制了锥虫病,肝片吸虫病单能诊断液,并已用于耕牛上述疾病的普查。之后根据在同一红细胞上可以附载多种抗原测定多种抗体的原理,又进行了锥虫和肝片吸虫两病双联诊断液的研制。 (一)材料与方法 1.抗原制备 (1)锥虫抗原制备:取液氮保存的锥虫,用大白鼠增殖,待虫体达高峰时放血、离心,取棕黄层细胞,过DEAE纤维素柱分离虫体。将纯净虫体冻融后超声波处理、离心,取上清液作抗原,低温保存备用。     

牛白血病病毒细胞受体的研究——外周血单个核细胞质膜的提取和SDS-PAGE分析

本研究将分离的外周血单个核细胞悬液加入等体积由TNT缓冲液配 制的2％(W/V)Triton X-100,在冰浴中不断搅拌作用30分钟,1500×g离心后取上清,再以40000×g离心30分钟,再取上清,用质膜SDS-PAGE方法进行分析,结果马、奶牛、绵羊、山羊的外周血单个核细胞质膜的电泳图谱和扫描峰形相似,表明四种质膜的蛋白组成、每种蛋白的分子大小和百分含量相近。将电泳后凝胶上的质膜蛋白转移到NC膜上,用BLV及其抗体作为探针进行检测,找出了BLV的靶细胞受体蛋白,并在NC膜上进行了特异性鉴定。     

口蹄疫标准抗元和血清的制造与检验

选用500克以上的健康海猪10～20只用继代保存的标准海猪毒以灭菌生理盐水连洗三次,再用灭菌滤纸吸干、秤重,放入消毒乳钵加无菌中性玻璃砂磨碎,用PH7.6的磷酸盐缓冲液制成10％悬浮液,置室温内浸出一小时,每隔10分钟搅拌一次;然后以每分钟3000转离心15分钟,取上清液作为感染材料,在海猪后肢两(足庻)面接种,每(足庻)面皮内注射7～8针,用量约0.2毫升;经18～24小时注射部位形成水泡,然后用生理盐水洗净、采取水泡皮,如上述再制成10％悬浮液,浸出离心,取上清液置于58℃水浴箱内灭能40     

弓形虫DNA的提纯及其性质的研究

为建立提取弓形虫DNA的简便方法,我们于1989～1990年进行了本项研究。(一)材料和方法1.虫株:弓形虫(Toxoplasma gondii)ZA株,从浙江病猪体分离所得,由本所传代保存。2.弓形虫滋养体的纯化:取含滋养体的小鼠腹腔液,离心沉淀,经PBS洗涤2～3次后,加30～40倍体积的0.25％胰蛋白酶磷酸盐缓冲液,37℃水浴中消化20分钟;再用PBS离心洗涤4～5次,以除去胰蛋白酶液。最后在沉淀物中加少量PBS稀释,取少许涂片镜检纯化效果。3.弓形虫DNA的提取:将纯化的弓形虫滋养体悬液稀释至一定密度(OD值约为2.0)后,加入SDS使成2％终末浓度,混匀,置40℃水浴中作用1小时,充分裂解虫体。按Myers,W.T.等(1980)     

EDS-JS9201毒株的分离和鉴定

1991年下半年,江苏一些地 区的鸡发生类似EDS_(76)的疾病。 我们在调查EDS_(76)来源时,分 离出一株病毒,定名为EDS-JS_(9201)。本文报告JS_(9201)毒株分离和鉴定的结果。 (一)材料与方法 1.病料:从江苏2个地区的4个鸡群采集发病鸡的输卵管和软壳蛋蛋清。用pH7.2 PBS制成1:2混悬液,冻融3次,加氯仿处理后,以3000r/min离心30分钟,上清液再用8000r/min离心30分钟,最后上清液加双抗作为分离材料。 2.鸭胚接种:将处理好的材料接种10日龄鸭胚,每胚尿囊腔接种0.2ml。接种后每日观察2次 并于96小时收获尿囊液继续育传,每次传代时     

微小型线虫酸卡红改良染色毛细玻璃管封存法

我在研究4毫米以下的轮环线虫过程中,感到甘油透明玻片封存法有两个缺点;一是虫体形态较为模糊,二是只能观察一面。如用酸卡红染色后树胶封片法,标本常易发生干皱,甚至面目全非。这对于珍稀或需要作四面详细观察的标本,颇感难以满足要求。笔者改良了酸卡红染色技术,并试用毛细玻璃管封存法,能弥补这些缺陷,不但虫体形象清晰,且能作四面察看结构。封存标本经保存一年后,颜色和形态与当初无异。现将操作方法介绍如下: (一)酸卡红改良染色 将已经70％酒精固定的微小型线虫连同固定液置于小试管或小瓶中。吸去固定液,加入约20倍容积的酸卡红染色液(酸卡红配制:卡红4克、盐酸2毫升、蒸馏水15毫升,先将盐酸与蒸馏水混合投入卡红,再加85％酒精95毫升,宜加 1～2滴氨水中和之,取上清液或过滤后应用),加橡皮     

内蒙古自治区牛球虫种类的调查

我们于1982～1984年,从内蒙古5盟2市14个点214头不满一周岁的犊牛中,通过粪便检查,对牛球虫的种类做了调查。根据形态学鉴定为11个种,现报告如下。 材料与方法 (一)直肠采粪约20克,分装塑料袋置冰瓶中,带回实验室保存于4℃冰箱中备检。 (二)取1克粪便,饱和盐水漂浮收集卵囊,蘸取上液镜检。对未孢子化卵囊观察其卵形、颜色、膜壁、膜孔、极帽、极粒和原生质团的形状与位置,并测量其大小。     

病理切片制作处理小技巧

除皱折无裂隙法 配制20％～40％的酒精溶液。只需将切好的石蜡膜沾上低浓度酒精,然后将石蜡膜漂浮于42℃左右的温水上,这样切片马上自然展平,避免了传统方法用镊子撑折造成的人为裂隙,制成的片子效果极好。明胶粘片法 具体做法是:称取1g明胶,放入100ml蒸馏水中,加热溶解,配成1％的明胶溶液。取洁净的载玻片在其溶液中蘸一下,取出,倾斜放入玻片盒中,烤干备用。使用时拿这种处理过     

小鹅瘟病毒J-9110株的分离与培养

(一)试验材料 1.供试病料:12～15日龄的病鹅废食、拉稀,经用抗菌类药物治疗无效而死亡,死亡解剖,看到肝脏充血,胰腺布有针尖大灰白色坏死点,肠道呈带状假膜脱落,遂取其新鲜肝脏作为供试病料备用。 2.鹅胚:从农户孵化房挑选未经免疫的12日龄、发育良好的鹅胚多只,用于本试验。 3.抗小鹅瘟阳性高免血清:由江苏农学院提供。 (二)试验方法 1.小鹅瘟病毒的分离:将鹅肝加生理盐水以1:5比例磨碎,取悬液以2500转/分离心30分钟后,加青链霉素每毫升各1500单位,4℃作用2小时后,每胚0.5ml注入尿囊腔,置37℃继续孵化,每天观察2次,翻蛋3次,2天前死亡者弃去,将3天后死亡的胚胎置10℃过夜取液,再以尿囊液进行盲传,并取其典型胚体和同源尿囊液做琼扩用浓缩抗原。     

牛腹腔丝虫微丝蚴体外保存试验

牛腹腔丝虫微丝蚴分布于牛外周血液中,经蚊虫传播能引起马、绵羊和山羊的脑脊髓丝虫病。为了查明牛腹腔丝虫微丝蚴体外存活的条件,我们做了微丝蚴体外保存试验。 (一)材料和方法 1.带微丝蚴牛(简称带虫牛):为从福建省漳州地区购买的小黄牛,耳静脉血微丝蚴密度为131条/60mm~3。 2.微丝蚴的浓集:以3.8％枸橼酸钠抗凝,无菌采取带虫牛颈静脉血,2000rpm离心20分钟,分离血浆备用。沉淀部分加灭菌蒸馏水至原血量,混合均匀,使其溶血,2000rpm离心10分钟,弃上清,如此反复2～3次,最后加生理盐水离心一次,沉淀物和下部液体即为微丝蚴浓集液。浓集液内加青、链霉素,使每     

绵羊正常眼压的测定

1984年毕业实习时,作者在实习小组其他同志协助下,用眼压计对绵羊眼压进行了测定。 (一)材料和方法 1.试验动物:系辽宁省金县某几个自然村农户饲养的健康绵羊,均无眼病。 2.仪器:苏州医疗器械厂生产的压陷式眼压计。 3.药品:1％丁卡因液。 4.操作方法:两助手将羊侧卧保定,其中一助手保定羊头,使被测眼朝上,角膜与地面平行。另一助手用滴管吸1％丁卡因液点眼,每眼滴2～3滴(小羊1～2滴)。1分钟后,操作者手持眼压计(食指与拇指捏住其把手)。左手食指及拇指轻轻分开上下眼睑,然     

家兔T淋巴细胞的ANAE标记及正常值

我们根据Muller,J.提出的一种改良的T淋巴细胞酯酶染色法,使用冰冻切片和涂片来观察家兔淋巴器官内的T淋巴细胞酸性非特异性酯酶(ANAE)的反应特征和数量。 (一)材料和方法 1.试剂配制; (1)血液涂片、淋巴细胞涂片固定液:磷酸氢二钠100毫克、磷酸二氢钾500毫克、双蒸馏水150毫升、丙酮225毫升、40％甲醛125毫升,称取Na_2HPO_4、KH_2PO_4溶于双蒸馏水内,再加丙酮和甲醛充分混匀,溶解,过滤,置4℃冰箱内备用。 (2)Holt树胶蔗糖液:供冰冻切片用。取蔗糖30克、阿拉伯树胶1克,混合研成粉末状,加蒸馏水使到达100毫升,4℃保存备用。     

乳牛醋酮病检测方法的改进

以酮粉法诊断乳牛醋酮病存在着一些不足之处,因此,我们对实验室的检测方法经过5年试验研究,摸索出一种较为理想的检测方法。 试剂 亚硝基铁氰化钠粉剂(保存于棕色瓶中),10％氢氧化钠溶液,20％醋酸。 方法 取中试管1支,先加尿液2～3ml,随即加入亚硝基铁氰化钠粉末少许(约10mg),振摇,使其充分溶解,再加10％氢氧化钠溶液0.2ml(约3～5滴),混合,使成红色,加入20％醋酸1ml(约20滴),充分混合,观察结果。 判定 尿液呈现红色者为阳性反应,加入20％     

冷冻蚀刻技术简介(续)

《中国兽医科技》1985年第4期60～62页,对冷冻蚀刻技术作了概要的介绍。现将有关补充材料概述如下。 (一)在冷冻蚀刻装置中制备样品的复型膜时,如果真空度低于1×10~(-5)托时,则喷射的碳粒就会太大。太大的碳粒附于样品上就会掩盖样品的细微结构,这势必影响观察结果。所以使样品室的真空度维持在1×10~(-5)托～1×10~(-6)托是很重要的。 (二)实践中,要正确地掌握喷涂的方法、电流的大小及蚀刻的温度与时间。复型膜太薄时,说明喷涂不好。电镜下图像的反差不够,导致看不清楚;复型膜太厚时,虽然图像的反差会很好,但电镜下观察又困难(光点不亮—透过的电子束数量少),所以只好改用大孔经光栏并同时提高加速电压,以提高电子束的穿透能力。但加速电压如果太高时(不是常用的加速电压值),又会使复型膜中的铂粒子再结晶而形成再结晶     

呈色反应鉴别牛马骡肉

随着各地农贸市场的开放,可能有极少数肉贩子将马、骡肉混入牛肉中出售,坑骗顾客获取高利。笔者根据马、骡肉中含有动物淀粉的特性,用碘液进行呈色反应,对其进行鉴别。 (一)试剂 5％氢氧化钾溶液;0.5％碘溶液。 (二)操作 1.将新鲜的生马、骡、牛肉3种样品除去肌膜和结缔组织,各称取50克,剪碎后分别放入3只400毫升的烧杯中,各加入50毫升5％氢氧化钾溶液,置于沸水浴上,加热充分煮化,边加热,边用玻璃棒搅拌。     

家畜尿毒症快速诊断

尿毒症是由于排尿不全,尿中的代谢产物进入血液中而出现的一种症候群。此时,血清或眼房水等体液尿素氮60毫克％以上是诊断的一个重要指标。测定尿素氮所用的方法需要光电比色条件,在兽医基层单位目前大部分仍不具备。为此,我们对尿素氮测定法进行了一些改良,并通过人工尿毒症试验猪的眼房水、胸液、心包腔液等体液代替血清进行尿素氮测定。结果较满意。可供兽医基层单位应用。 (一)材料与方法 1.试剂: (1)二乙酰-肟液;将二乙酰-肟1克和硫代氨基脲0.2克用适量蒸馏水溶解并加至500毫升,置于棕色瓶中。此液应是清亮的,存放过久会引起变色(时间依室温而定),需重新配制。     

猪水肿病中大肠杆菌有关毒素的研究

材料与方法 (一)病猪肠内容物 选择临床症状和病理变化比较典型的病猪,死后立即作细菌学检查,肝、脾、心血及胃肠水肿液均无菌生长,肿胀的肠系膜淋巴结组织涂抹培养分离出大肠杆菌者。将5头病猪肠内容物混合,加三倍生理盐水稀释,经3000转分离心30分钟,/放入冰箱保存备用。为观察除菌后的肠内容物的致病能力,用10000转/分离心1小时,取上清液做为接种材料。 (二)琼脂培养菌体冻融液 所用菌株是从病猪肠系膜淋巴结中分离的,鉴定为O_(139):     

猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性分析

猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的制备国内外都曾有过报道,但对用作诊断抗原的猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性的研究较少。我们应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫电泳(IE)对猪囊尾蚴排泄分泌蛋白进行了分析,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)评价了其抗原性。(一)材料与方法1.材料:(1)粗制囊液抗原:从新鲜囊尾蚴中抽取,3500r/min离心30分钟,保留上清液,低温存放。(2)排泄分泌抗原:48、96、105、204小时的囊尾蚴孵育液:48、96、105的头节孵育液,均