衣原体单克隆抗体在牛羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗衣原体单克隆抗体,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对本地区所采集的128份羊血清、90份牛血清进行检测.结果,羊血清阳性检出率为25.8%,牛血清阳性检出率为32.2%.选择50份羊血清、50份牛血清用已建立的检测衣原体抗体ELISA与间接血凝试验(IHA)进行比较,牛血清ELISA阳性检出率为32.0%,IHA为24.0%,ELISA比IHA试验高出8个百分点;羊血清ELISA阳性栓出率为26.0%,IHA为22.0%,ELISA比IHA高出4个百分点.     

间接荧光抗体诊断牛边缘边虫病的研究

间接荧光抗体试验(IFAT)检测边缘边虫(Anaplasma marginale)感染牛血清快速准确,具有实际应用价值。利用冷藏抗原片进行的IFAT结果表明,该法具有特异性强、敏感性高等特点,人工感染牛符合率为100％;就疫区273份血清的检查,阳性率为35.2％,对安全区86份血清的检查,假阳性占3％。抗体消长实验表明,人工感染牛于第5天即可测出IFA抗体,60～70天达到高峰(1:5120),并维特一段时间,在感染后335天,抗体消失。在本试验中边缘边虫抗原与双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫感染牛血清均无交叉反应;与绵羊边虫感染羊血清有很强的交叉反应。     

补体结合试验诊断环形泰勒虫病的研究

用含环形泰勒虫的血液接种除脾牛，将红细胞中的虫体制成抗原，建立了总量为０．６ｍｌ的补体结合试验方法。人工感染牛血清中的抗体在感染后５ｄ即可检出，３０ｄ达到最高峰，持续８个月。检测４３头已知感染牛，４２头呈阳性反应，检出率为９７．５６％；３５份安全区牛血清，均呈阴性，没有假阳性反应。环形泰勒虫抗原与瑟氏泰勒虫血清有轻微的交叉反应，与双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、牛边虫、伊氏锥虫、日本分体吸虫病牛的血清无交叉反应。利用该方法对不同地区的１２７５份牛血清进行了环形泰勒虫病血清学调查，表明其敏感性、特异性良好，可用于口岸检疫、流行病学调查及临床诊断     

青海省畜禽衣原体病的血清学调查

为摸清青海省畜禽衣原体病的流行情况,用正向间接血凝(IHA)试验对采自青海省26个县(市)的畜禽血清进行了衣原体抗体检测。共检测牛血清227份,阳性60份,阳性率26.4%;羊血清328份,阳性67份,阳性率20.4%;猪血清224份,阳性114份,阳性率53.3%;鸡血清153份,阳性6份,阳性率3.9%。结果表明,青海省养殖的牛、绵羊、猪、鸡普遍存在衣原体感染。     

NSP-ELISA鉴别FMDV感染与免疫

利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋白 (NSP) 3ABC多肽作为抗原 ,建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验 (I ELISA)。通过对 336份正常牛血清、50 8份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和 58份豚鼠免疫血清的检测 ,确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明 ,该方法简易、快速 ,灵敏度比VIAA AGID高     

陕甘宁青四省(区)人畜棘球蚴病的血清学调查

1986年4月～1987年2月用甘肃省人民医院的棘球蚴微量间接血凝诊断液,对驻陕甘宁青4省(区)24个团以上单位共1776份人畜血清进行了抗体检测,检出阳性456份,检出率为25.68％。人血清941份,阳性113份,阳性率占12.01％(其中:藏、蒙族人67份,阳性13份,占19.40％;汉族人874份,阳性100份,占11.44％。男性909份,阳性107份,占11.77％,女性32份,阳性6份,占18.75％);牛血清266份,阳性132份,阳性率占49.62％;羊血清569份,阳性211份,阳性率占38.08％。感染棘球蚴阳性抗体最高滴度人血清1:256,牛血清1:8192,羊血清1:4096。     

新疆部分地区牛新孢子虫病的血清学调查

应用间接免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验、斑点酶联免疫吸附试验3种检测方法,对新疆地区部分牛和牦牛的血清样品进行新孢子虫病抗体检测.结果显示,298头份牛血清全部为阴性,4份牦牛血清1份为阳性.     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。     

牛皮癣病抗体和细胞免疫检测方法的研究

将双向免疫扩散试验（ＤＩＤ）和淋巴细胞转化试验（ＬＴ）用于牛皮癣病的抗体检测和细胞免疫检测。３５头无牛皮癣症状的新生犊牛血清抗体全部阴性，淋巴细胞转化率均在１０％以下，１０头具有牛皮癣症状的病牛，５０％为血清抗体阳性，淋巴细胞转化率为２２％～４６％。３０头注射抗牛皮癣疫苗的牛血清抗体全部由阴转阳，淋巴细胞转化率升至１５％以上的有１６头。     

陕甘宁青四省(区)人及畜禽弓形虫病的血清学调查

采用中国农科院兰州兽研所提供的间接血凝诊断液和试验方法,对我区驻陕甘宁青四省区28个单位共4340份人畜(禽)血清进行了弓形虫抗体检测,检出阳性283份,阳性检出率为6.52％。其中检测人血清973份,检出阳性38份占3.91％;检测猪血清916份,检出阳性240份占26.20％,检测马(骡)血清1108份,检出阳性1份占0.09％;检测牛血清570份,检出阳性2份占0.35％,检测羊血清647份,检出阳性1份占0.15％;检测兔血清81份,检出阳性1份占1.23％;检测犬血清11份、鸡血清34份,均未检出阳性。     

对我国水牛、奶牛传染性牛鼻气管炎血清中和抗体的初步检测

我国牛群中是否存在传染性牛鼻气管炎,以前未见报道和证实。农业部兽医药品监察所自1980年以来先后对广东惠阳地区兽医站送检水牛血清1份,洛阳白马寺种公牛站送检奶公 牛血清5份,以及采自北京市北郊农场黑白花犊牛血清15份、成年牛血清8份,东郊农场奶犊牛血清8份,承德地区围场奶犊牛血清14份,以传染性牛鼻气管炎Bartha-Nu/67株弱毒为抗原,采用病毒-血清中和试验方法检测这些血清中的传染性牛鼻气管炎的抗体和滴度。今年又与广西兽医研究所协作,对广西畜牧所送检牛血清22份进行了检测,现将结果报道如下。     

广西奶牛隐孢子虫病的流行病学调查

为了调查广西奶牛隐孢子虫病的流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对广西9个奶牛场和4个奶牛个体养殖户的1 612头份粪样进行隐孢子虫卵囊的检测,并以基于18SrRNA基因的PCR-RFLP技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定。结果显示,7个奶牛场发现存在隐孢子虫感染,隐孢子虫阳性粪样为189头份,总感染率为11.72%(189/1 612)。在感染的年龄段上,1～6月龄犊牛的隐孢子虫感染率为21.3%,显著高于7～12月龄的青年牛(9.6%)和大于1岁龄的成年牛(3.8%)(P<0.01)。感染季节以冬季感染较高,但与夏季感染结果相比差异不显著(P>0.05)。PCR-RFLP分析显示,分离的7个隐孢子虫株均为安氏隐孢子虫。调查表明,广西奶牛隐孢子虫虫株以安氏隐孢子虫为主,感染率与河南、江苏、安徽、吉林等省份相似。     

云南省树鼩隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查研究

为了解树鼩感染隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫情况,评价其潜在的公共卫生风险,本研究采集了461份树鼩粪样,提取粪便基因组DNA;采用巢氏PCR方法,扩增隐孢子虫18S rRNA基因和毕氏肠微孢子虫ITS序列,并测序分析。结果表明,在59份野生树鼩粪样中检出隐孢子虫核酸阳性5份,阳性率为8.47%;经序列比对分析,4份为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)核酸阳性,1份为龟隐孢子虫(C. testudinis)核酸阳性。检出毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)核酸阳性9份,阳性率为15.25%;经基因型鉴定,2份为TB1,1份为TB2,1份为TB3,5份为TB4。402份驯养树鼩粪样中未检测出隐孢子虫,仅检出1份为毕氏肠微孢子虫核酸阳性,为基因型TB4。通过遗传进化分析,本研究所鉴定的微孢子虫基因型(TB1～TB4)和微小隐孢子虫均具有感染人的风险。本研究是国际首次对树鼩隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫进行分子流行病学和遗传进化分析的研究,为树鼩人兽共患原虫病防控提供了基础数据支撑。     

金华市部分乡镇奶牛巴贝斯虫病的流行病学调查

为有效防控金华市奶牛巴贝斯虫病,根据牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2c作为抗原,对2009-2011年金华市7个乡镇的奶牛巴贝斯虫病进行了流行病学调查。结果显示,金华存在奶牛巴贝斯虫病,在2009年采集的296份牛血清样品中,阳性血清11份,感染率为3.72%;在2010年的306份牛血清样品中检出阳性血清14份,感染率为4.58%;在2011年的307份牛血清中检出阳性血清11份,感染率为3.58%。结果提示,金华市奶牛巴贝斯虫感染率以农户散养最高,建立集约化养殖制度和家畜原虫病综合防疫措施迫在眉睫。     

牛隐孢子虫病人工病例与自然病例的比较试验

对来自西安地区不同奶牛场的９头腹泻病牛经临床观察、病理剖检，并从肠道粪便中分离到隐孢子虫。用分离到的虫株接种新生健康犊牛２头。人工感染犊牛均发病并表现出比较典型的隐孢子虫病症状；对人工感染病犊做粪便卵囊再分离和病理学检查，不但重新分离到隐孢子虫，而且可见小肠粘膜上皮细胞坏死脱落，固有层裸露，毛细血管扩张、充血、出血，肠隐窝处含有隐孢子虫，粘膜下层炎性细胞浸润；肠粘膜压片染色镜检亦看到隐孢子虫。试验结果发现人工病例与自然病例所测指标相似，进一步证明西安地区犊牛腹泻是以牛隐孢子虫为主要病原的疫病     

牛分枝杆菌重组MPT83蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的牛分枝杆菌重组MPT83蛋白为包被抗原,建立了检测牛分枝杆菌抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1μg/mL,酶标二抗稀释度为1∶1600,血清稀释度为1∶60,抗原和血清、血清和二抗均在37℃反应30 min,底物在37℃显色15 min,D655 nm阴性、阳性临界值为0.5。经阻断试验、交叉试验、重复性试验,表明该方法特异性强、重复性好。用该方法对18份结核菌素试验阳性牛血清和36份结核菌素试验阴性牛血清进行检测,结果显示,阳性血清的符合率为27.8%,阴性血清的符合率为91.7%。     

团集凝集试验诊断牛边缘无浆体病的研究

应用国内制备的全套试剂建立的团集凝集试验(CAT)检测3份边缘无浆体人工感染牛血清,阳性率为100％;98份流行区牛血清,阳性率为16％;267份非疫区牛血清,全部为阴性。与多种病毒、细菌病及包括血液原虫病在内的一些寄生虫病无交叉反应。一次感染边缘无浆体的牛,用此法检测,其抗体可持续8个月以上。     

南京市初生犊牛病毒性腹泻-黏膜病血清学调查

应用血清中和试验,检测南京市部分奶牛场初生犊牛血清中牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)抗体.共检测血清3 070头份,其中阳性797头份,占25.96%;检测混合血清274批,其中阳性172批,占62.77%;同时随机测定459头份阳性血清的抗体效价,多数为18～164,最高的达到1128.     

贵阳动物园动物隐孢子虫的调查与虫种鉴定

为了解贵阳动物园圈养野生动物隐孢子虫的感染流行情况,以骆驼、黑熊、斑马、袋鼠、猕猴、长臂猿、大象等野生动物的新鲜粪便为样品(n=84),采用饱和蔗糖溶液漂浮法收集隐孢子虫的卵囊并提取D N A,以18S r R NA为目标基因靶点设计特异性引物,并采用巢式PCR扩增目的基因,后经10 g/L琼脂糖凝胶电泳,对检测结果为阳性的PCR产物进行序列分析并建立系统发育树。结果表明,共有13份隐孢子虫阳性样品,其中骆驼7份,感染率为70.00%,感染虫种为安氏隐孢子虫;斑马1份,感染率为10.00%,感染虫种为安氏隐孢子虫;长臂猿5份,感染率为23.81%,感染虫种为微小隐孢子虫、人隐孢子虫及小鼠隐孢子虫。本次调查发现该园野生动物隐孢子虫具有较高的总体感染率(15.50%)和鉴定出4种人兽共患隐孢子虫虫种,具有较重要的公共卫生意义。本研究首次报道了我国斑马感染隐孢子虫。     

云南省家畜弓形虫病的调查

应用间接血凝试验(IHA)对云南省大理、丽江、红河、玉溪、昆明等地区的主要家畜进行了弓形虫抗体检测,共抽查家畜血清1076头份,发现阳性125份,阳性率为11.62％。其中包括,猪血清525份,阳性率为20.19％;马132份,阳性率为1.51％;牛205份,阳性率为1.44％;羊202份,阳性率为6.93％。检测抗体滴度均达到或超过1:64。猪的阳性检出率最高,很可能是云南地区人畜自然感染弓形虫的重要感染源。