5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮通过内质网应激反应对CCl4所致大鼠肝纤维化的保护作用

目的探讨5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮(TTF1)对四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法72只大鼠随机分为6组:正常组、模型组、秋水仙碱(colchicine,Col)组和TTF1给药组(5,10,20μmol/kg),每组12只。观察TTF1对CCl4所致慢性肝损伤病理学变化,免疫印迹法检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子表达。结果病理学检查结果显示,模型组肝细胞有较广泛的点状坏死,伴炎症细胞浸润,肝细胞增生较为明显,汇管区结缔组织增生,肝纤维化分级的Ⅲ级;Col组和TTF1给药组变化类似:肝细胞点状坏死及炎症细胞浸润轻于模型组,肝纤维化分级为Ⅰ级。与模型组比较,Col组和TTF1给药组大鼠肝组织的GRP78,PERK,IRE1α,ATF6和Caspase-12表达明显降低。结论 TTF1对CCl4所致大鼠肝纤维化有一定的保护作用,抑制ERS反应可能是其主要作用机制之一。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠学习记忆及海马超微结构的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆和海马超微结构的影响。方法采用高脂灌胃、链脲佐菌素注射(38mg/kg)和慢性应激联合的方法建立糖尿病并发抑郁症动物模型,并随机分为5组:糖尿病并发抑郁症模型组,阳性药(二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(20.53 g/kg,10.26 g/kg,5.13g/kg)组,以正常组为对照。给药4周后,采用Morris水迷宫进行行为学评价,采用透射电镜观察海马细胞超微结构。结果Morris水迷宫实验,与正常组比较,模型组大鼠逃避潜伏期(EL)明显延长,空间探索时间(SET)明显缩短(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和高剂量组大鼠EL明显缩短,SET明显延长(P<0.05)。电镜下可见,正常组大鼠海马神经元细胞形态规则,染色质分布均匀,线粒体内部嵴清晰可见;模型组大鼠海马神经元胞体肿胀,内质网脱颗粒严重,线粒体内嵴消失;给予左归降糖解郁方高剂量后,海马神经元损伤程度减轻,部分胞内可见线粒体。结论左归降糖解郁方可明显改善模型大鼠的学习记忆功能,其可能通过保护海马神经元结构发挥治疗作用。     

地五养肝胶囊对肝纤维化大鼠肝组织EMT/MET的影响

目的研究地五养肝胶囊(Diwu Yanggan Capsule,DWYG)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)/间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)的影响。方法SPF级Wistar大鼠给予50%CCl4/大豆油腹腔注射建立肝纤维化模型。给予DWYG干预后,采用羟脯氨酸(Hyp)检测试剂盒检测该复方对纤维化大鼠肝脏Hyp含量的影响。进一步,应用Western blot检测该复方对纤维化大鼠肝组织上皮细胞标志分子(E-cadherin)和间质细胞标志分子(Vimentin)蛋白表达水平的影响。应用quantitative real-time RT-PCR检测该复方对纤维化大鼠肝组织促EMT分子(TGF-β1)以及促MET分子(BMP-7)基因表达水平的影响。结果与空白对照组大鼠相比,CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠肝组织Hyp含量显著升高,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平明显下降,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平明显升高。给予DWYG后,干预组大鼠肝组织Hyp含量较模型组大鼠显著降低,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平均显著上调,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平显著下调,且纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值明显下降。结论 EMT/MET失衡参与了CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生与发展,DWYG可通过调控EMT/MET平衡(抑制EMT而促进MET)减轻肝纤维化的病变,其调控机制与降低纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值相关。     

电针内关对心肌缺血大鼠电压门控钾离子通道蛋白的影响

目的研究电针内关穴对心肌缺血大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白表达的影响,比较循经取穴与其他取穴方法的差异。方法健康雄性SD大鼠(SPF级)随机分成对照组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,通过注射盐酸异丙肾上腺素制作动物模型,Western blot检测Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3、KCh IP2、Kir2.1、Kir2.2六个指标,观察电针前后各组大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白表达量的变化情况。结果与模型组比较,内关组和列缺组蛋白表达量均升高(P<0.05),非经非穴组与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05),内关组的蛋白表达量高于列缺组,但低于对照组(P<0.05)。结论电针内关穴和列缺穴均可以提高心肌缺血大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白的表达量,且心包经内关穴的针刺效应优于列缺穴。     

HPLC-MS/MS法同时测定尿液中的常见毒品及其代谢物和常见药物

应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)建立了一种简便、快速、灵敏度高的定量检测尿液中甲基苯丙胺、苯丙胺、吗啡、O6-单乙酰吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮等常见毒品及其代谢物方法,尿液经蛋白沉淀、过滤后,采用BEH HILLIC(2.1*100mm,1.7μm)色谱柱进行分离,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测,6种毒品及代谢物在5~500ng/mL浓度范围内均获得良好的线性(r2=0.998),回收率为91.04%~115.81%,定量检出限为0.1~1ng/mL。此外建立了同时检测尿液中40种常见药物的定性检测方法,定性检出限为1~10ng/mL。     

疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠延髓、脊髓及胃粘膜组织血管活性肠肽表达的影响

目的观察疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠延髓、脊髓及胃粘膜组织血管活性肠肽(VIP)表达的影响,探讨疏肝和胃汤改善抑郁状态及胃肠功能的作用机制。方法 100只大鼠随机分成生理盐水组、模型组、百优解组及疏肝和胃汤大、小剂量组。采用慢性心理应激加孤养法制作抑郁模型,共计造模4周。在第3周,百优解组及疏肝和胃汤大、小剂量组分别予以0.36mg/(kg·d)、20g/(kg·d)、10g/(kg·d)体重给药,生理盐水组及模型组给予等体积生理盐水,每天分2次灌胃。在第4周结束后,使用内固定法取大鼠延髓迷走神经背核部位的脑、胸髓(T6~T8,根据脊神经定位)及胃粘膜组织,应用免疫组织化学技术检测上述部位VIP的表达。结果模型组大鼠延髓、脊髓中VIP阳性表达明显下降,胃粘膜VIP阳性表达明显上升,与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);治疗2周后,疏肝和胃汤大、小剂量组和百优解组大鼠延髓、脊髓组织中VIP阳性表达显著上升,胃粘膜VIP阳性表达明显下降,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);其中,疏肝和胃汤大剂量组与百优解组延髓中VIP含量比较无显著性差异(P>0.05),但脊髓与胃粘膜中VIP含量与百优解组相比,有显著性差异(P<0.05)。结论疏肝和胃汤可能是通过增加延髓、脊髓中VIP的表达,降低胃黏膜中VIP的表达,双向调节"脑(延髓)-脊髓-胃"脑肠轴通路中VIP的含量,达到改善抑郁状态与胃肠功能的作用。     

木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变大鼠钙通道基因表达的影响

目的研究木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变(PDPN)大鼠钙离子通道蛋白mRNA表达的影响,探讨木丹颗粒对PDPN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠90只,随机取30只设为正常组,其余大鼠造模,参照Sally等方法,腹腔注射链脲佐菌素STZ(53mg/kg)制作PDPN模型,4周后,用Vonfrey纤维丝测双后足机械痛阈,痛阈明显下降,与基础值相比下降50%者为PDPN造模成功。再将在成模的54只大鼠随机分为模型组,木丹颗粒组。木丹颗粒组给予10ml/(kg·d)灌胃,分别于药物治疗后第2、4、8周末,各组随机取8只大鼠,用RT-PCR技术法检测大鼠背根神经节N型钙离子通道mRNA表达。结果与正常组比,模型组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈上升趋势(P<0.05);与模型组比,木丹颗粒组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈下降趋势,8周时,本组N型钙离子通道mRNA表达显著减少(P<0.05)。结论木丹颗粒可以下调PDPN大鼠N型钙离子通道蛋白mRNA表达,对PDPN有一定的治疗作用。     

血府逐瘀汤对抑郁症大鼠模型的治疗作用及海马5-羟色胺及5-羟色胺1A受体表达的影响

目的研究血府逐瘀汤对抑郁症模型大鼠的治疗作用及大鼠海马5-HT及5-HT1A受体表达的影响,探讨血府逐瘀汤抗抑郁作用机制。方法选用成年雄性SD大鼠60只分为三组:对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予慢性不可预性温和应激(CUMS)建立抑郁模型,治疗组给予血府逐瘀汤饮片灌胃。采用糖水偏好实验和Morris水迷宫实验进行行为学检测,采用高效液相色谱法测定海马5-HT浓度,Western blotting法检测5-HT1A表达。结果模型组大鼠糖水偏好百分比明显降低(P<0.05),平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05);治疗组能逆转此改变;模型组大鼠海马5-HT含量和5-HT1A受体表达水平明显低于对照组(P<0.05),治疗组5-HT含量和5-HT1A受体表达水平明显升高,但仍低于对照组(P<0.05)。结论血府逐瘀汤有抗抑郁作用,其机制与影响海马5-HT水平及5-HT1A受体表达有关。     

益气化痰活血方药对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达的影响

目的观察芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)痰瘀阻肺证模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达的影响。方法复制COPD痰瘀阻肺证大鼠模型,给予芪白平肺胶囊、法舒地尔干预,免疫组化检测模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白的表达。结果模型组大鼠肺组织Rock-1、Rock-2可见大量阳性表达棕褐色颗粒,各用药组较模型组比较阳性表达都有不同程度的抑制。模型组Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较正常组明显增加(P<0.01);芪白平肺胶囊高剂量组、法舒地尔组大鼠肺组织Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较模型组明显降低(P<0.01);芪白平肺胶囊低剂量组Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较芪白平肺胶囊高剂量组明显升高(P<0.01)。结论芪白平肺胶囊可降低COPD痰瘀阻肺证模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达水平。     

半四左方对乙酸型胃溃疡的愈合作用及IL-8和IL-1β的影响

目的研究半四左方对慢性胃溃疡的愈合作用,以及对与溃疡愈合相关的炎症因子IL-8和IL-1β的影响。方法采用乙酸法建立大鼠乙酸型慢性胃溃疡模型。经半四左方治疗后,测定乙酸型慢性胃溃疡大鼠溃疡面积、评价半四左方对慢性胃溃疡的愈合作用,并取大鼠胃粘膜组织检测IL-8、IL-1β。结果半四左方可显著降低乙酸型胃溃疡模型大鼠溃疡面积(P<0.01)。半四左方高、低两个剂量组大鼠溃疡面积与奥美拉唑组比较均有显著减小(P<0.01)。半四左方可显著降低乙酸型胃溃疡大鼠胃粘膜组织IL-8和IL-1β(P<0.01)。结论半四左方对乙酸型慢性胃溃疡有良好的促进愈合作用。其作用机制可能与其影响炎症因子IL-8和IL-1β,减轻慢性胃溃疡的炎症反应等有关。     

背部推拿疗法对免疫抑制家兔局部皮肤CD80、波形蛋白表达的影响

目的观察在免疫抑制家兔背部足太阳膀胱经循行路线上开展推拿疗法对局部皮肤CD80、波形蛋白表达的影响。方法将18只家兔随机平均分为空白组、模型组和推拿组,采用腹腔注射环磷酰胺的方法造模,观察各组动物局部皮肤CD80、波形蛋白表达的变化。结果模型组CD80、波形蛋白的表达(阳性细胞数、表达强度)均低于空白组(P<0.05,P<0.01);推拿组CD80、波形蛋白的表达(阳性细胞数、表达强度)均高于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论采用腹腔注射环磷酰胺的方法能够制造免疫抑制动物模型;在足太阳膀胱经循行路线上开展背部推拿疗法能够有效促进局部皮肤CD80、波形蛋白的表达,从而调节免疫抑制家兔的局部免疫功能。     

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃动力影响的研究

目的观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃动素、胃排空率及小肠推进比的影响。方法采用综合造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎模型,放射免疫法测定血清中胃动素含量,计算胃排空率及小肠推进比。结果化浊解毒方高、中、低剂量组与模型组相比均能明显提高大鼠胃动素水平(P<0.05);化浊解毒方高、中、低剂量组与对照组相比有明显差异(P<0.05);化浊解毒方高、中剂量组之间无显著性差异(P=0.27)。化浊解毒方高、中、低剂量组与模型组相比均能明显改善大鼠胃排空率(P<0.05);化浊解毒方高、中剂量组与对照组相比有明显差异(P<0.05),但两组之间无显著性差异;化浊解毒方低剂量组与对照组之间无显著性差异。结论化浊解毒方能明显提高慢性萎缩性胃炎大鼠胃动素含量、改善胃排空率及小肠推进比,这可能是治疗慢性萎缩性胃炎的机制之一。     

华佗再造丸对局灶性脑缺血大鼠HIF-1α和VEGF表达的影响

目的观察华佗再造丸对大鼠局灶性脑缺血后低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebra1αrteryocclusion,MCAO)模型。将SD大鼠分为假手术组、模型组、华佗再造丸(0.5,1.0,2.0 g/kg)三个剂量组。采用SYBR green实时荧光定量PCR检测各组大鼠脑内HIF-1α和VEGF mRNA表达。结果与假手术组相比,MCAO造成脑缺血损伤3天后HIF-1α,VEGF基因的mRNA表达水平降低,华佗再造丸各剂量组可明显提高HIF-1α,VEGF mRNA的表达水平,并呈现出一定的剂量关系。结论华佗再造丸能够增强大鼠局灶性脑缺血后HIF-1α和VEGF的表达,通过HIF-1α/VEGF通路促进脑缺血后的血管新生和神经再生,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。     

健脾复方对大肠癌PI3K/AKT信号通路的调控作用

目的探索健脾复方对大肠癌SW620细胞株PI3K/AKT信号通路表达的调控作用。方法采用体外实验,将SW620细胞分别与正常培养基(空白对照组)、正常裸鼠血清培养基(药物空白组)和含药血清培养基(健脾复方组)培养72h后,采用Western Blot和RT-PCR技术检测PI3K/AKT的表达。结果空白对照组、药物空白组和健脾复方组的PI3K和AKT的蛋白表达分别为(0.651±0.278),(0.650±0.269),(0.289±0.127),(0.607±0.320),(0.561±0.284)和(0.219±0.105),经方差检验,差异均有统计学意义(均P<0.05),采用LSD法进行两两比较,显示健脾复方组与空白对照组及药物空白组差异有统计学意义(均P<0.05)。各组PI3K mRNA和AKT mRNA的表达差异未见统计学意义。结论健脾复方可能抑制PI3K/AKT信号通路的表达从而起到抗肿瘤的作用。     

血瘀型动脉硬化闭塞症血清代谢物和炎症反应相关因子的变化及意义

目的探讨血瘀型动脉硬化闭塞症(ASO)血清中代谢物和炎症反应相关因子的变化及意义。方法血瘀型ASO患者15例,健康对照10例,酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测血清中VEGF、TGF-β1和IL-1β水平,基于气相色谱-质谱联用技术(GC/MS)的代谢组学方法分析血清中内源性代谢物的变化。结果与对照组比较,ASO组血清中血清中IL-1β的含量明显升高,差异有极显著性意义(P<0.01);VEGF、TGF-β1含量轻度升高,差异无显著性意义;ASO组血清中的糖类、氨基酸类、脂肪酸类物质的代谢水平均发生了明显的改变。结论炎症反应和血清内源性代谢物的变化与血瘀型ASO的发病密切相关。     

胶体金标记氯胺酮单抗免疫快速检测板

检测原理与结果的判断本检测板利用免疫竞争法的原理,来检测尿液、血液等样本中的氯胺酮及其代谢物。取待测样品120μL加入加样孔中。5分钟内观察结果。当样本中不含有氯胺酮及其代谢物时,由于毛细管作用,胶体金-抗氯     

717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠血清心肌酶谱的影响

目的观察717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠血清心肌酶谱的干预作用。方法实验研究采用24只大白鼠局部注射蝮蛇毒造模后,分为中药组、血清组和中药加血清组3组进行治疗,从大鼠球后静脉取血,采用ELISA法检测大鼠模型在实验不同时段血清心肌酶谱的水平,并对实验数据进行统计分析,得出结论。结果模型组血清CK、CK-MB、LDH、AST的含量高于正常组(P<0.05)。治疗后与模型组比较,各治疗组血清CK、CK-MB、LDH、AST含量降低(P<0.05),且以中药加血清组疗效最好,其次为中药组。结论 717解毒合剂可以降低蛇伤大鼠血清CK、CK-MB、LDH、AST值,其解毒排毒,纠正心肌损伤的效果明显,是治疗蝮蛇咬伤的有效药物。     

疏肝理气法对功能性消化不良大鼠行为学及胃肠动力的影响

目的探讨疏肝理气法对功能性消化不良大鼠行为学及胃肠动力的干预作用。方法 24只大鼠随机分为正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组,每组8只。模型组、柴胡疏肝散组采用夹尾激惹刺激加不规则喂养法进行造模,柴胡疏肝散组组给予柴胡疏肝散水煎剂(1.41 kg/L)灌胃,其余两组给予等量生理盐水灌胃。每周进行敞箱实验(OPen-Field法)、糖水消耗实验的测定,4周后测定胃排空率及小肠推进率。结果 4周后,模型组大鼠出现扎堆、靠边,不喜活动,攻击性减少,易受惊吓,毛发干枯不顺等表现,柴胡疏肝散组上述表现相对不显著。4周后剖腹取胃,正常组胃粘膜无明显潮红、肿胀、糜烂等病变,模型组胃内残留物较多,部分胃粘膜潮红,柴胡疏肝散组上述表现不显著。模型组大鼠敞箱实验水平运动次数、糖水消耗、胃排空率及小肠推进率均较正常组显著减低(均P<0.05),柴胡疏肝散组大鼠糖水消耗、敞箱实验水平运动次数及胃排空率均较模型组增加(均P<0.05),柴胡疏肝散组敞箱实验垂直运动次数较模型组增多,但无显著性差别。结论疏肝理气法能有效改善功能性消化不良大鼠抑郁状态并能促进胃动力。     

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变大鼠模型P65与IkB-a蛋白表达的实验研究

目的研究复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变(PLGC)大鼠转录因子p65及其抑制因子Ik B-a的影响,揭示其治疗PLGC的机制及效果。方法将120只雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E、F(空白对照组、模型对照组、复方蜥蜴散80目治疗组、100目治疗组、80目100目等量混合治疗组、维酶素治疗组)6组,采用MNNG以及情绪刺激等综合因素造模,造模成功后,各组大鼠均作相应处理后,应用免疫组化法检测p65、Ik B-a在胃粘膜组织的表达及影响,并对实验结果进行统计分析。结果各组与A组比较,B、C、D、F组p65、Ik B-a阳性表达AOD值均降低,差异有显著意义(P<0.01),E组AOD值则显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与B组比较,AOD值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组(C、D、E组)与F组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),尤以E组AOD值最低(P<0.01),而复方蜥蜴散各治疗组比较,E组与C组、E组与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),C组与D组比较,则差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方蜥蜴散不同微粒组合剂能抑制凋亡相关蛋白p65、Ik B-a的表达,阻断并逆转了PLGC的病理改变。     

胶体金标记氯胺酮单抗免疫快速检测板（项目编号：2007A004）

检测原理与结果的判断 本检测板利用免疫竞争法的原理,来检测尿液、血液等样本中的氯胺酮及其代谢物。取待测样品120μL加入加样孔中,5分钟内观察结果。当样本中不含有氯胺酮及其代谢物时,由于毛细管作用,胶体金-抗氯胺酮单克隆抗体结合物将沿硝酸纤维薄膜向上移动,与氯胺酮-BSA相结合,在检测线（T线）位置呈现一条紫红色的肉眼可见的条带,即为阴性结果;当样本中含有氯胺酮及其代谢物时,氯胺酮及其代谢物将与硝酸纤维薄膜上的氯胺酮-BSA相互竞争与胶体金标记的抗氯胺酮单克隆抗体结合,