应用离子交换捕捉电镜技术观察动物类冠病毒

(一)材料和方法 1.样品处理:把采自腹泻牛、猪及貉子的粪便,制成10～20％悬液,低速离心,将其上清液直接滴附在碳-福尔马(Formvar)膜或取其上清液1ml,加4滴磷酸氢钙饱和液吸附,低速离心,弃上清,取沉淀,加1μl乙二胺四乙酸二钠(EDTA)饱和液,使磷酸氢钙溶解,将其溶解液滴附在碳-福尔马膜上,用2％磷钨酸(PTA)负染,电镜观察。     

EDS-JS9201毒株的分离和鉴定

1991年下半年,江苏一些地 区的鸡发生类似EDS_(76)的疾病。 我们在调查EDS_(76)来源时,分 离出一株病毒,定名为EDS-JS_(9201)。本文报告JS_(9201)毒株分离和鉴定的结果。 (一)材料与方法 1.病料:从江苏2个地区的4个鸡群采集发病鸡的输卵管和软壳蛋蛋清。用pH7.2 PBS制成1:2混悬液,冻融3次,加氯仿处理后,以3000r/min离心30分钟,上清液再用8000r/min离心30分钟,最后上清液加双抗作为分离材料。 2.鸭胚接种:将处理好的材料接种10日龄鸭胚,每胚尿囊腔接种0.2ml。接种后每日观察2次 并于96小时收获尿囊液继续育传,每次传代时     

犬细小病毒人工感染狗的试验

自从Appel等人在1978年首次报道犬细小病毒(Canine Parvovirus,简称CPV)引起的犬出血性肠炎以来,这方面的研究工作进展较快,但关于细小病毒的发病机制至今仍不清楚。为了进一步研究、探讨CPV致病的发生规律,应建立相应的疾病模型,为此我们进行了本试验。 (一)材料与方法 1. 病料:采用具有典型CPV感染临床症状的病犬粪便及肠内容物。部分标本经密度梯度离心供电镜检查,其余标本置于-30℃冰箱中供人工感染用。 2.病料处理:取适量粪便及肠内容物标本,分别用pH7.4的PBS配成20％悬液。超声波350mA3分钟,然后3000rpm离心15分钟,弃沉淀,再8000rpm离心15分钟,取上清     

口蹄疫野毒适应海猪的方法

一,将口蹄疫病畜水泡上皮组织,置于玻璃双碟中,以灭菌生理盐水连续冲洗3次,滤纸吸干,秤重后置消毒乳缽中剪碎,加入中性玻璃砂,充分研磨,用生理盐水或pH7.6的磷酸盐缓冲液制成1:3悬液,每毫升悬液中应加青、链霉素各1000单位,置室温下两小时,每隔10分钟振荡一次。然后以3000转/分离心10～15分钟。吸取上清液作为感染材料。     

鸡马立克氏病的电镜快速检查

马立克氏病是由属于疱疹病毒的马立克氏病病毒引起的鸡传染病。存在于羽毛囊上皮细胞中的是具有囊膜的完气病毒,是非细胞结合性病毒,能在体外存活较长时间。用电镜可以从病鸡羽髓液中直接观察到马立克氏病病毒。 (一)方法 在病鸡翅膀靠近腋下处,拔数根带有羽髓的羽毛,用0.1M PBS将羽毛根部的皮屑冲洗掉,剪下羽毛根部放入试管内,用玻璃棒挤压出羽髓液,除去羽根。往羽髓液内加0.1M PBS 1 ml,充分搅匀后,用毛细管滴到有支持膜的载网上,吸附1～2分钟,再用滤纸条吸去多余的液体,用2％磷钨酸负染,自然干燥,电镜透射观察。     

禽脑脊髓炎病毒的提纯和电镜观察

将禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株、１１４３株和ＮＨ９３７株分别经卵黄囊接种于６日龄ＳＰＦ鸡胚，接毒１０日后解剖鸡胚，收集尿囊液，采集脑、消化道和胰腺，用玻璃匀浆器制备２０％的组织悬液。组织悬液经３次冻融充分破坏细胞，释放病毒，然后以４００Ｏｒ／ｍｉｎ离心２０分钟，１００００ｒ／ｍｉｎ离心４０分钟。上清液经浓缩后轻轻加入已含２ｍｌＣｓＣｌ不连续密度梯度的５ｍｌ离心管内，再以４５０００ｒ／ｍｉｎｌ２℃离心２小时，在ＣｓＣｌ连续密度梯度内取出含ＡＥＶ的组分后经对蒸馏水透析除去ＣｓＣｌ，对聚乙二醇－６０００透析浓缩。病毒样本经１％磷钨酸负染后用透射电镜观察见到典型的ＡＥＶ粒子。     

犬细小病毒病的诊治

嘉山县县城自1985年以 来,在家养狼犬中流行一种以 呕吐、出血性肠炎和急性心肌 炎、发病率高、致死率高为特征的急性传染病。笔者于1989年开始对病犬从临床症状和病理变化方面进行了观察,并对322只病犬作了微量血凝(HA)试验和血凝抑制(HI)试验。 (一)材料和方法 1.待检抗原:待检犬的粪便,加5倍量的稀释液(0.015mol pH6.4的PBS),3000r/min离心15分钟,取上清液待用。 2.阳性对照血清:在病犬痊愈后1～2星期,从前肢内侧或后肢外侧(分别为正中静脉、副     

母猪乳、仔猪血清抗体与轮状病毒临床感染的关系

轮状病毒是仔猪白痢的重要病原之一。弄清仔猪体内抗轮状病毒抗体的变化与轮状病毒临床感染的关系,对于抗轮状病毒免疫的研究具有重要意义。 (一)材料和方法 1.仔猪血清:对试验仔猪于前腔静脉采血常规分离血清,-40℃保存备用。 2.母猪奶样:人工采集分娩后母猪的奶样按Yabiki等(1974)报道的方法分离乳清,将乳汁于3000r/min 4℃离心1小时,去掉乳脂,用1N醋酸调pH 3～4,再3000r/min 4℃离心20分钟去掉酪蛋白然后再用1N NaOH调回pH至7.2,-40℃保存备用。     

牦牛IBR病毒85-Y株电镜观察及理化特性鉴定

牦牛IBR病毒85-Y株的分离,血清学鉴定及回归本动物试验已相继报道。现将对该毒株的电镜观察及理化特性鉴定的结果报告如下。 (一)材料与方法 1.细胞:供试验用的犊牛肾(BK)继代细胞系按常规方法制备。生长液含健康犊牛血清10％,乳汉液45％,199培养液45％,pH7.0～7.2。维持液为pH7.2—7.4之乳汉液。 2.种毒:85-Y株冻干毒在BK继代细胞上再传3～5代作为以下各项试验的种毒,接种细胞单层前均经3次冻融,3500rpm离心20分钟。     

口蹄疫、猪传染性水泡病的血清保护试验诊断法

(一)被检病毒液的制备:将送检病料洗净、称重、研磨,用生理盐水或磷酸盐缓冲液作1:5～1:10的悬浮液,在4℃浸出一日夜,或在室温浸出1～2小时,振(氵易皿),以3000转/分离心10分钟,其上清液即为被检的病毒液。 (二)乳鼠血清注射:用五窝2～3日龄的乳鼠,每窝10只,以一只母鼠哺乳,分别注射已知的猪水泡病及口蹄疫A、O、C、ZB型五个血清。每窝注射七只,留三只不注     

猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性分析

猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的制备国内外都曾有过报道,但对用作诊断抗原的猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性的研究较少。我们应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫电泳(IE)对猪囊尾蚴排泄分泌蛋白进行了分析,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)评价了其抗原性。(一)材料与方法1.材料:(1)粗制囊液抗原:从新鲜囊尾蚴中抽取,3500r/min离心30分钟,保留上清液,低温存放。(2)排泄分泌抗原:48、96、105、204小时的囊尾蚴孵育液:48、96、105的头节孵育液,均     

实验感染急性兔瘟病例肝功能病理改变的观察

作者对46例实验感染急性兔瘟病例进行了临床病理学动态观察,同时进行了部分脏器的病理组织学对照研究,现先将有关肝功能的病理变化报道于后。 (一)材料和方法 1.试验动物:购自非疫区经常规观察健康的成年或青年短毛兔。 2.感染用病料:用本系传染病教研室提供的Y_(8504)、F_(11)和F_(14)兔瘟病毒纯毒株感染家兔,发病死亡后,立即采其肝组织制成10％肝悬液,作为病料,每只供试兔股部肌肉内注射1毫升。     

姜射栀提取物涂膜剂对家兔人工感染真菌皮癣病的疗效观察

为筛选天然抗皮癣病真菌新药,观察了姜黄射干栀子(姜射栀)中药组方涂膜剂对家兔真菌皮癣病的疗效。用犬小孢子菌标准菌株人工感染健康家兔,采取有皮肤症状家兔的皮屑、被毛,进行真菌学分离培养及鉴定以确定真菌菌悬液造模成功的最低浓度。采用最低浓度的菌悬液造模。分别用22.5、67.5、202.5g/L姜射栀提取物涂膜剂通过皮肤涂擦法治疗家兔真菌皮癣病,比较观察涂膜剂的疗效。结果显示,通过培养特性、菌落性状、菌丝形态、孢子性状特征等鉴定,确定造模成功的犬小孢子菌悬液的最低浓度为1×108 CFU/mL;67.5、202.5g/L剂量组涂膜剂对家兔真菌皮癣病均有较好的疗效,其中202.5g/L涂膜剂对家兔人工感染真菌皮癣病有治愈的作用。结果表明,姜射栀提取物涂膜剂对家兔人工感染真菌皮癣病具有一定的疗效,为进一步筛选抗真菌外用新药提供了重要依据。     

小鹅瘟病毒J-9110株的分离与培养

(一)试验材料 1.供试病料:12～15日龄的病鹅废食、拉稀,经用抗菌类药物治疗无效而死亡,死亡解剖,看到肝脏充血,胰腺布有针尖大灰白色坏死点,肠道呈带状假膜脱落,遂取其新鲜肝脏作为供试病料备用。 2.鹅胚:从农户孵化房挑选未经免疫的12日龄、发育良好的鹅胚多只,用于本试验。 3.抗小鹅瘟阳性高免血清:由江苏农学院提供。 (二)试验方法 1.小鹅瘟病毒的分离:将鹅肝加生理盐水以1:5比例磨碎,取悬液以2500转/分离心30分钟后,加青链霉素每毫升各1500单位,4℃作用2小时后,每胚0.5ml注入尿囊腔,置37℃继续孵化,每天观察2次,翻蛋3次,2天前死亡者弃去,将3天后死亡的胚胎置10℃过夜取液,再以尿囊液进行盲传,并取其典型胚体和同源尿囊液做琼扩用浓缩抗原。     

弓形虫DNA的提纯及其性质的研究

为建立提取弓形虫DNA的简便方法,我们于1989～1990年进行了本项研究。(一)材料和方法1.虫株:弓形虫(Toxoplasma gondii)ZA株,从浙江病猪体分离所得,由本所传代保存。2.弓形虫滋养体的纯化:取含滋养体的小鼠腹腔液,离心沉淀,经PBS洗涤2～3次后,加30～40倍体积的0.25％胰蛋白酶磷酸盐缓冲液,37℃水浴中消化20分钟;再用PBS离心洗涤4～5次,以除去胰蛋白酶液。最后在沉淀物中加少量PBS稀释,取少许涂片镜检纯化效果。3.弓形虫DNA的提取:将纯化的弓形虫滋养体悬液稀释至一定密度(OD值约为2.0)后,加入SDS使成2％终末浓度,混匀,置40℃水浴中作用1小时,充分裂解虫体。按Myers,W.T.等(1980)     

羊口疮的研究——血清学方法的研究

反向间接血凝试验 (一)材料和方法 1.抗原: (1)口疮抗原(OAg):LG8010毒株,经研磨后加入pH7.2PBS(含青、链霉素各2000单位/毫升)制成1:10(W/V)悬液,4℃浸渍16～20小时,以2500rpm离心15～20分钟,取上清即为抗原。     

虹鳟鱼传染性胰腺坏死的初步调查

本文对甘肃省某养殖场虹鳟鱼稚鱼大批死亡的病因进行了调查。通过流行情况分析、发病症状、病理解剖变化、病毒分离培养和电镜观察,初步诊断该病为虹鳟鱼的传染性胰腺坏死(Inf- ections Pancreatic Necrosis)。在病鱼的组织悬液中经电镜观察发现了病毒颗粒。病料除菌滤液能引起CHSE细胞和RTG-2细胞的严重病变。在CHSE细胞接种除菌滤液的培养物中,经电镜观察发现了同样的病毒颗粒。病毒颗粒呈正二十面体,无囊膜,有92个壳粒,直径约为50～60nm。     

牛白血病病毒细胞受体的研究——外周血单个核细胞质膜的提取和SDS-PAGE分析

本研究将分离的外周血单个核细胞悬液加入等体积由TNT缓冲液配 制的2％(W/V)Triton X-100,在冰浴中不断搅拌作用30分钟,1500×g离心后取上清,再以40000×g离心30分钟,再取上清,用质膜SDS-PAGE方法进行分析,结果马、奶牛、绵羊、山羊的外周血单个核细胞质膜的电泳图谱和扫描峰形相似,表明四种质膜的蛋白组成、每种蛋白的分子大小和百分含量相近。将电泳后凝胶上的质膜蛋白转移到NC膜上,用BLV及其抗体作为探针进行检测,找出了BLV的靶细胞受体蛋白,并在NC膜上进行了特异性鉴定。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——牛边缘边虫的超低温保藏

感染有单一种边缘边虫的试验牛,当染虫率达53.11％时,自颈静脉采抗凝血,在无菌条件下离心,弃上清液,将红细胞压积分为三组:①直接加入DMSO,使终浓度为5％;②用0.2％低渗盐水使红细胞裂解,在虫体沉淀物中加入等量含10％DMSO的改良阿氏液;③加入等量上述阿氏液。分别封装于安瓿,悬于液 氮罐气相状态下0.5～1小时,然后缓缓浸入液氮。储藏至90天取出,在自来水下冲淋解冻,分别经颈部皮下各接种1头未除脾易感健康牛。三种悬液的感染均获成功,潜伏期为15～16天,染虫率分别为21.87％、12.7％、9.93％。前两组试验牛痊愈,后者死亡。     

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织 4例和 3月龄绵羊胎肺 2例作为材料 ,对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液 ,进行了绵羊肺腺瘤病毒 (JSRV)的分离 ,同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明 ,自然感染绵羊肺腺瘤病的 4例病肺组织中都有散在的病毒粒子 ,其直径为 10 0～ 12 5nm ,接种病毒悬液的胎肺细胞从第 2代到第 9代均出现细胞病变 ,但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子 ,而超薄切片透射电镜观察发现了病毒样粒子