反向间接血凝(RPHA)法应用在血痕检验中的研究

血痕检验目前采用的方法有肉眼观察、预试验、确证试验、种属鉴别、血型检查及出血部位检验等.用免疫法制备抗人血红蛋白(Hb)的抗血清进行人血液的法医学种属鉴别已沿用很久,但国内还未见到RPHA法应用在血痕检验中的报导.本实验室建立了该法检测人粪便隐血,并对模拟血痕的检测也作了研究.认为本法对微量血痕     

血痕预试验检测的应用现状与研究进展

血迹是凶杀、伤害等案件中最常见和最重要的一种物证。血痕预试验是利用化学检测的方法从现场大量可疑的斑迹中初步筛选出可能是血的痕迹物证。本文对常用血痕预试验试剂的应用现状及其灵敏度、特异性、稳定性等进行分析比较,同时对预试验检测中存在的问题及今后的发展趋势进行综述,旨在为更好地研究、利用血痕预试验试剂提供参考。     

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。     

匹拉米洞与联苯胺在血痕预实验中的灵敏性及DNA损伤检测研究

目的血液痕迹是暴力犯罪现场最易遗留的一类痕迹,是法医学检验中最常见和最重要的一类物证。血痕预实验是利用化学检测的方法从现场大量分布的可疑斑迹中初步筛选可能是血痕的重要方法,是法医学鉴定的重要前提。本文比较匹拉米洞法和联苯胺法的灵敏度、对DNA-STR检验的影响以及对细胞核的损伤情况,以探索匹拉米洞法应用于血痕预实验的可行性。方法对新鲜全血进行梯度稀释,观察比较检测灵敏度;利用Chelex-100提取匹拉米洞、联苯胺等试剂预检后的血痕样本中的DNA,应用PCR-STR技术及荧光检测技术检测样本的STR分型,观察STR分型结果,比较两种方法对后续DNA-STR检验的影响;在细胞培养液中加入联苯胺、匹拉米洞,应用彗星电泳技术评价细胞核DNA的损伤。结果匹拉米洞法可检测的最低血红蛋白浓度为25μg/m L,灵敏度低于联苯胺法(5μg/m L);DNA-STR有效分型率为96.67%,远高于联苯胺法(18.09%);联苯胺组彗星尾长为52.40±9.21、尾距为43.29±4.85、尾部DNA含量为16.25±2.35,显著高于匹拉米洞组。结论匹拉米洞法可用于血痕预实验,对血痕中DNA的损伤、对DNA-STR分型的影响均低于联苯胺法,可替代联苯胺作为新的法医学血痕预实验方法。     

联苯胺预试验处理血痕后样本DNA定量的研究

目的探讨联苯胺血痕预试验处理后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法选取10名无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,保存干燥时间分0．5h、1h、3h、6h、12h、24h六个实验组,并采用磁珠提取法、QIAcubeDNA提取纯化法、chelex-100提取法提取样本DNA,应用RT-PCR定量技术检测样本DNA含量,同时应用PCR-STR技术和Idfiler-plus试剂盒检测相应样本STR分型。结果联苯胺血痕预试验后处理样本,随保存时间的延长,其样本DNA含量显示逐渐降低的趋势。回归线性对数分析显示,磁珠提取法：Y=-0．40871n（x）＋0．7044R0—0．7633;QIAcubeDNA提取纯化法：Y=-0．23931n（x）＋0．4764R0—0．8715;chelex-100提取法：Y=-0．11781n（x）＋0．2302R2=0．9571。不同DNA提取方法对同一保存时间的联苯胺血痕预试验试剂处理样本DNA含量间差异有极显著性,P〈O．01。结论联苯胺血痕预试验后对后续STR分型影响较大,联苯胺血痕预实验后的血痕不能继续进行STR分型检测。     

血痕识凶

"110吗?这里有打斗的痕迹,地上和墙上有血痕。我怀疑这里曾经发生过凶杀案。你们是不是能派人过来查看一下。我现在的位置是……"110报警中心有时会接到这样的报警电话。电话中提到的血痕是法医实践中最常见的生物物证,是法医物证检验的主要对象之一。警方抵达疑似案发现场后,会对血痕进行搜集和检验,首先要确定是否是真的血痕,接着要判断血痕是人留下的还是动物留下的。在确定是人的血痕之后,通过科学的检验方法,可能判断出留下血痕者的真实身份,为侦破刑事案件提供十分有用的线索。     

苯酚4-氨基安替比林法做血痕预试验的改进

笔者根据用苯酚4-氨基安替比林法做血痕预试验的研究报告,进行试验,结果表明此法确实在反应效果上能够与联苯胺试验相近,而所用药品成本相对较低,配制、操作方法简便易行,本法尤其适用于新鲜血痕,由于血红蛋白易溶于所用试剂,故阳性反应红色较易观察,试验效果较好。陈旧性血痕,血红蛋白难以溶于所用试剂中,而其本身颜色与阳性反应颜色相近,因此不易观察,相对而言联苯胺试验阳性反应颜色为翠蓝色,与检材颜色反差明显,但因其具有致癌性,许多国家已     

抗人红细胞凝集素血清的应用研究

本文通过吸收抑制试验证明了抗人血红蛋白沉淀素血清中存在的那种能凝集人类红细胞的凝集素,实际上就是用人的红细胞免疫家兔而产生的抗人红细胞凝集素.为考察抗人红细胞凝集素血清对血痕种属的鉴识能力,本文用此抗血清作解离试验,对不同稀释度的新鲜人血痕、室内存放的久暂不一的人血痕和15种动物血痕进行了检测.得到的结果是,新鲜人血痕稀释至1/1000仍呈阳性;500例室内存放的人血痕中,存放时间在11年以下的448例全部能够准确测出;存放12-16年的52例人血痕中,有33例能够测出,余19例呈阴性;15种动物血痕全部呈阴性.     

尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较

目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。     

补妆法提取血指印

1995年6月,笔者检验了一直径3.6cm,长52cm的一截被黄泥水浸透的木棍.木棍系在一凶杀案嫌疑人家中提取.在距木棍末端5cm有一片7cm×3.14cm×3.6cm的血痕,血痕上有一枚血液加层指印.木棍上血痕和木棍颜色基本一致,因该地区6月份空气较     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1~3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1.0mm纸片,分别用DNATyperTM15Plus试剂盒、GoldeyeTM20A试剂盒和华夏TM试剂盒在标准条件(说明书条件)、优化条件1(标准条件+1μL DMSO)和优化条件2(标准条件+室温浸泡1h)扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均97.00%,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27.22%~31.67%,在优化条件2下,检验成功率相似(97.00%),与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异(P0.01)。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

用酶标抗人IgG单克隆抗体直接ELISA法检测微量血痕种属

<正> 酶联免疫吸附试验(ELISA)在法医物证检验中已有许多研究和报道。国外不仅用于血痕种属鉴别,而且还应用于血型及器官特异性的检测。笔者采用酶标抗人 IgGMcAb 作直接 ELISA 法鉴别血痕种属.获得满意效果。     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1～3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1．0mm纸片,分别用ONATyper^TM15Plus试剂盒、Goldeye^TM20A试剂盒和华夏。”试剂盒在标准条件（说明书条件）、优化条件1（标准条件＋1μLDMSO）和优化条件2（标准条件＋室温浸泡1h）扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均〉97．00％,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27．22％～31．67％,在优化条件2下,检验成功率相似（〉97．00％）,与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异（P〈0．01）。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

血痕Gm(2)因子检验及分布

应用抗 Gm(2)血清和抗 D-Gm(2)血清以及 Gm 标准对照血清,选择新鲜 ORh(D)红细胞,用凝集抑制试验,对北京地区269人血清或新鲜血痕进行检验。结果 Gm(2+)分布为29%,Gm(2-)分布为71%。对已确定 Gm(2)型的230份血痕,在室温放置14个月后再次检验,结果与第一次所测血型完全相同。同时对11起案件中的血痕检验了 Gm(2)因子,起到了排除嫌疑人或增加与案件相关联的作用。     

用Y—染色体特异DNA探针鉴识微量干血痕性别的研究

法医鉴识干血痕性别,通常是用盐酸阿地平染色观察 Y—小体的方法。重组 DNA 技术的发展与应用,为法医物证检验开辟了新的领域。本文用 Y—染色体特异 DNA 探针鉴识干血痕性别的成功,为法医的血痕性别签定,提供了一种新的检验方法。     

无精斑证据性犯罪案件其他物证DNA检验(附6例报告)

在性犯罪中最有效的取得证据的手段之一是对现场遗留的精斑及混合斑进行检验。但由于种种因素的影响 ,在实际检案中有许多性犯罪精斑检验为阴性 ,不能为性犯罪提供有力证据。笔者在性犯罪案件中注意提取与性犯罪有关的其他物证 (如血迹、唾液斑、阴毛等 ) ,通过作ＤＮＡ检验 ,为案件侦破提供了重要证据。现报告如下 :一、材料自我室自 1 997年 1月～ 1 999年 1 2月受理的ＰＣＲ检验强奸案件 6例 ,检材为血痕、唾液斑、阴道斑、组织块、带毛囊阴毛等。二、方法1 .ＤＮＡ提取 :血痕、唾液、阴道斑、组织块、带毛囊阴毛采用ｃｈｅｌｅ - 1 0 0…     

荧光免疫标记抗体法测定血痕ABO血型

目的探讨采用荧光免疫标记抗体法测定血痕血型的可行性和优点。方法根据抗原抗体特异性结合的原理,首先对抗A、抗B单克隆抗体进行荧光标记,然后使荧光标记抗体与相应抗原(血痕)在最佳条件下结合,最后荧光显微镜镜检,判定血痕的血型。结果采用该方法测定血痕的血型结果准确、灵敏度高、操作简单、检验时间短。结论该方法可以作为一种测定血痕血型的检验方法使用。     

应用免疫斑点法检验微量陈旧血痕种属的实验

检验血痕种属的方法很多。从古老的沉淀环到目前所应用的ELISA法、主要适用于比较新鲜的血痕，而对陈旧血痕及其它受物理因素影响的血痕效果不佳。本文提出一种用1／氨水液提取血痕，ELISA法检验种属的较佳方法。经反复试验，以肉眼观察颜色变化判断结果，可以测得长达33年陈旧血痕，而各种动物实验对照无非特异性反应，给种属检验提供一个新的途径。材料和方法l．试剂l％低脂奶粉；兔抗人IgG酶标抗体（北京生物制品所）PHg．6的CBS和PH74的TBS缓冲液；1％氟水溶液；O．85％生理盐水；国产硝酸纤维素膜（NC）。2．检材室温保存11…