藤黄中藤黄酸B的制备分离方法优选及结构确证

目的 建立一种高效且重现性好的藤黄酸B的制备分离方法，并对分离产物进行结构确证。〖JP〗方法 采用乙醇超声提取方式对藤黄药材进行初步提取，用中压制备色谱和高压制备色谱相结合的方式对藤黄乙醇提取物中藤黄酸B进行分离和纯化，并采用正交设计对提取和分离工艺进行优化。采用红外光谱、质谱、1H-核磁共振谱、13C-核磁共振谱对分离得到的样品进行结构鉴定。结果 优选的分离方法较其他方法简便且高效可控，分离得到的样品通过结构鉴定，确定为藤黄酸B且纯度可达到99％以上。结论 所建立的藤黄酸B的提取分离方法具有高效、简便且重现性好的特点。同时，本研究提供了藤黄酸B相对完整的谱图信息，并确证了所分离藤黄酸B的结构。     

藤黄中新藤黄酸提取分离工艺改进

目的 改进从中药藤黄中提取、分离新藤黄酸的工艺。方法 按正交试验法优选提取工艺，以乙醇为提取溶剂，并采用AB-8大孔树脂富集，硅胶柱湿法上样，流动相（石油醚∶乙醇=20∶1）洗脱，分离得到纯化的金黄色化合物。运用熔点测定、紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振技术，通过与文献数据比较来确证化合物结构。结果 金黄色化合物的熔点、紫外光谱、红外光谱、质谱、1H 核磁共振谱（nuclear magnetic resonance, NMR）、13C-NMR数据与文献中新藤黄酸的相应数据一致。结论 运用改进的工艺从藤黄中提取分离新藤黄酸是可行的，更利于工业化生产。     

藤黄超临界二氧化碳流体萃取物中化学成分

目的 研究藤黄药材的超临界二氧化碳流体萃取物中的主要化学成分. 方法 采用硅胶与十八烷基硅烷层析分离,用波谱法鉴定结构. 结果 从中分离出5个已知化学成分,分别为β-谷甾醇、藤黄酸、新藤黄酸、藤黄吉酸和去氧桑藤黄素. 结论 应用与已知物薄层色谱对照的方法及波谱法可鉴定所有被分离出的化学成分.     

新藤黄酸温敏原位凝胶剂的设计与研究

目的 制备注射用新藤黄酸温敏原位凝胶剂。方法 运用星点设计-效应面优化法确定注射用新藤黄酸温敏原位凝胶剂的最佳处方,并采用高效液相法对其体外释放进行含量测定。结果 最佳处方为0.2%新藤黄酸+18.26%泊洛沙姆407（F127）+7.4%泊洛沙姆188（F68）+0.5%苯甲醇,胶凝温度为35.4 ℃。新藤黄酸温敏原位凝胶的体外释放方程为 Y=0.983 5X+4.028, R=0.999 3, 符合零级释药。结论 星点设计-效应面优化法能很好地优化该制剂处方,优化后处方的体外释药稳定,达到预期要求。     

高效液相色谱法测定新藤黄酸纳米粒中新藤黄酸的含量和包封率

目的:建立新藤黄酸纳米粒中新藤黄酸含量和包封率的测定方法.方法:采用C18-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇:1.0 mol/L磷酸(9:1),流速为1.0 ml/min,检测波长为360 nm,进样容积为20 μl,柱温为25℃.结果:新藤黄酸在10～120 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9(n=7);新藤黄酸平均回收率为99.32%,RSD为1.03%(n=3).平均含量为99.52%,包封率为83.81%.结论:高效液相色谱法准确、可靠、重复性好,可用于新藤黄酸纳米粒含量及其包封率的测定.     

新藤黄酸提取工艺的优化研究

目的:探讨回流提取新藤黄酸的最佳工艺。方法:以新藤黄酸含量为考察指标,采用正交试验法优选提取工艺。结果:溶剂的浓度对提取量有显著影响,其次的影响因素为提取时间、提取次数、溶剂的量。结论:提取新藤黄酸的最佳工艺为:12倍量的甲醇,提取3次,每次3 h。     

新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖和凋亡的影响。方法 用不同浓度的新藤黄酸培养细胞24、48 h后，采用MTT法观察新藤黄酸对细胞生长的抑制作用；倒置显微镜下观察HUVECs细胞形态变化；通过DAPI染色后倒置荧光显微镜观察新藤黄酸对细胞形态学的影响；通过Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测新藤黄酸对HUVECs细胞凋亡率的影响；Western blot检测新藤黄酸对HUVECs中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测结果显示新藤黄酸能够明显抑制HUVECs的增殖，并呈时效及量效关系；荧光显微镜观察结果显示，新藤黄酸作用HUVECs后出现大量凋亡细胞；流式细胞术结果显示，与空白对照组相比，随着新藤黄酸浓度的增加，细胞凋亡率明显增加；Western blot检测结果表明Caspase-3蛋白表达水平显著增加。结论 新藤黄酸对HUVECs有明显的抑制作用，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响。〖JP〗方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率。结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强。倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征。流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高。结论 0.75~12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖。     

高效液相色谱法测定新藤黄酸羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉中新藤黄酸含量

目的 建立新藤黄酸羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉中新藤黄酸含量的测定方法.方法 色谱柱:Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(90∶10);流速:1.0 ml/min;检测波长:358 nm;柱温:25 ℃.结果 新藤黄酸线性范围为10~80 μg...     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用。〖JP〗方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素(adriamycin,ADR)及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度。结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50 由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系。结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响，采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响，采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率，采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响，采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明，新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用，且抑制作用具有明显的剂量依赖性；fluo-3AM染色荧光显微镜下观察，可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平，且呈现浓度依赖关系；PI染色流式细胞仪检测结果表明，新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期；Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明，随着新藤黄酸浓度的增加，A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势；Western blot检测结果表明，新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

可见分光光度法测定覆盆子中总三萜含量

目的 建立覆盆子中总三萜的含量测定方法。方法 以齐墩果酸为对照品，香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色体系，采用可见分光光度法在480 nm处测定覆盆子中总三萜的含量。〖JP〗结果 齐墩果酸在0.079 60～0.398 0 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为y＝2.117x＋0.005 380（r＝0.999 7），平均加样回收率为101.92%(RSD＝1.92%，n＝6)。结论 该方法操作简便、快速、灵敏度高、重现性好、测定结果准确，可作为覆盆子中总三萜含量测定的方法。     

潞党参多糖的提取及含量测定

目的：从潞党参中提取多糖并测定多糖含量。方法：用水提醇沉法提取潞党参多糖;用苯酚．硫酸法测定其含量。结果：测得潞党参中多糖含量为20．99％,平均收回率为99．03％,RSD=1．01％(n=3)。结论：潞党参中多糖含量较高,具有开发利用价值。     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial,HUVECs)迁移中的作用.方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕实验观察GNA对HUVECs迁移能力的影响;硝酸还原酶法检测NO水平;Western blot法检测GNA及LY29400预处理对HUVECs内磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT表达水平的影响;HUVECs转染PTEN-siRNA后,RT-PCR实验检测VEGF mRNA的表达水平.结果 GNA能有效抑制HUVECs迁移,其抑制效果与剂量相关(P<0.05).GNA和抑制剂LY294002以及L-NAME均能有效抑制NO的产生,且GNA+LY294002组、GNA+L-NAME组抑制效果更好(P<0.05);Western blot检测结果 显示,GNA上调PTEN蛋白表达水平,下调eNOS、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平(P<0.05).RT-PCR检测结果 表明,PTEN-siRNA转染后,GNA能上调VEGF mR-NA基因的表达水平(P<0.05).结论 GNA通过PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号传导通路,抑制HUVECs迁移,阻止HUVECs血管生成.     

亳州产4种药用菊花栽培品种内在质量的比较研究

目的 通过比较亳州地区4种药用菊花栽培品种的化学成分,为药用菊花的质量评价提供参考。方法以绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、总挥发油含量为检测指标,对同一栽培环境下的4种药用菊花栽培品种的化学成分含量进行测定。结果 4种药用菊花栽培品种的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量以杭白菊最高,亳菊最低;总挥发油含量以杭白菊最高,小白菊最低,亳菊挥发油颜色为蓝色。结论 菊花的主要化学成分含量因栽培品种不同而存在明显差异,亳菊挥发油颜色与其他3种不同,即品种与质量之间存在一定的相关性。     

紫外分光光度法测定糖肾康颗粒中总多糖的含量

目的：建立分光光度法测定糖肾康颗粒中总多糖的含量。方法：紫外分光光度法，苯酚．硫酸法。结果：总多糖在1．0658-8．5262范围内呈良好线性关系，r=0．9997。平均回收率为99．14％，RSD为0．98％(n=5)。结论：方法简便准确，重复性好，可作为糖肾康颗粒的含量测定方法。     

新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。     

新藤黄酸固体脂质纳米粒在大鼠体内药物代谢动力学研究

目的 考察新藤黄酸固体脂质纳米粒（gambogenic acid-solid lipid nanoparticles,GNA-SLN）在大鼠体内的药物代谢动力学特征。方法 对大鼠分别腹腔注射GNA和GNA-SLN,采用高效液相色谱法测定GNA在大鼠体内的血药浓度,DAS 2.1软件拟合计算药物代谢动力学参数。结果 腹腔注射含等量GNA的GNA溶液和GNA-SLN后,GNA-SLN组的峰浓度是GNA溶液组的3.06倍,药时曲线下面积约为GNA溶液组的3倍,体内滞留时间约为GNA溶液组的2倍。GNA-SLN显著增加了GNA的体内吸收,且延长了GNA在体内的作用时间（P<0.05,或P<0.01）。结论 SLN包载可改变GNA的体内行为,提高其血药浓度,延长其体内循环时间,有望改善其治疗效果。     

向天果脂肪酸成分的气相色谱-质谱分析

目的 测定向天果中石油醚浸提物的成分。方法 采用石油醚冷浸法提取向天果的脂肪酸类成分，甲酯化后，运用气相色谱-质谱联用技术测定其化学成分，在wiley7n.L质谱数据库中鉴定质谱图。结果 经鉴定出16种成分，占总成分的99.70%。结论 向天果中脂肪酸的主要化学成分为9,12-十八碳二烯酸、8-十八碳烯酸、9,12,15-十八碳三烯酸、十八烷酸等     

顶空进样-气相色谱-质谱联用法检测3年陈艾条燃烧产物中挥发性成分

目的 运用气相色谱- 质谱联用法对3年陈艾条燃烧产物中的挥发性成分进行比较分析。方法 采用顶空进样- 气相色谱- 质谱联用技术，并通过所用质谱库(NIST 11.L)检索研究其挥发性化学成分组成，用面积归一化法确定各成分的相对百分含量。结果 共分辨出87个色谱峰，鉴定出54个化学成分，约占总挥发性成分含量的88.505%，主要挥发性成分为苯酚(17.448%)、邻- 异丙基苯(5.369%)、乙酰胺(4.957%)、对二甲苯(3.527%)、3- 甲基丁酸(3.001%)等。结论 所建立的方法分离效果较好，所鉴定组分较准确，能够较全面反映出艾烟中主要挥发性成分。