新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞凋亡的作用

目的 探讨新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的GNA培养B16细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定GNA对B16细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色后细胞凋亡;采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染,流式细胞仪检测B16细胞凋亡。结果 GNA作用B16细胞后,细胞的抑制率随着药物浓度的增加而升高;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA处理的B16细胞出现了典型的凋亡特征;流式细胞仪检测显示GNA处理的B16细胞随着药物浓度的增大凋亡率随之上升。结论 GNA在一定的范围内,能够浓度和时间依赖性地通过诱导细胞凋亡抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖。     

新藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制 和诱导凋亡作用的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 倒置光学显微镜下观察不同浓度GNA处理SGC-7901细胞24 h后细胞形态的变化;采用MTT法检测不同浓度（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 μmol/L）GNA处理24 h后人胃癌SGC-7901细胞活力的变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白p53和Caspase-9的表达水平。结果 MTT检测结果表明,GNA对人胃癌SGC-7901细胞的生长和增殖有抑制作用,并随着GNA浓度的增加细胞活力明显下降。流式细胞仪检测结果提示,GNA诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,随着GNA浓度增加,凋亡率逐渐增加。Western blot表明p53和Caspase-9蛋白表达水平呈浓度依赖性升高。结论 GNA能诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡。     

新藤黄酸与细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响

［摘要］目的 研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)特异性抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法 新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059处理肺腺癌A549细胞，倒置显微镜观察细胞形态变化；甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测细胞存活率；流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化；蛋白印迹法（Western blot）检测ERK、p ERK蛋白的表达。结果 MTT法结果表明GNA在2.5 μmol/L对肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用；与PD98059合用24 h，GNA的抑制作用更加明显。倒置显微镜观察显示GNA作用肺腺癌A549细胞24 h后，细胞固缩变圆，体积变小，部分细胞呈半贴壁状态；GNA和抑制剂PD98059合用后，多数细胞固缩变圆，脱落，并悬浮于培养液中；少数细胞体积增大、肿胀、破裂呈坏死状。流式细胞仪检测结果表明，20 μmol/L PD98059 + 2.5 μmol/L GNA共同作用于A549细胞24 h后，与GNA 2.5 μmol/L组比较细胞内活性氧生成增加。Western blot法检测表明，PD98059和GNA联合作用A549细胞24 h后，p-ERK 蛋白表达与GNA组比较显著降低。结论 GNA能诱导肺腺癌A549细胞凋亡，联合应用ERK抑制剂PD98059后可减少ERK蛋白的活化，增加肺腺癌A549细胞的凋亡；结果初步表明GNA诱导肺腺癌A549细胞的凋亡可能与调节ERK信号通路有关。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境下黄芩苷对肾小球系膜细胞株HBZY- 1增殖和凋亡的影响。方法 采用MTT法观察高糖环境下3种接种浓度的肾小球系膜细胞株HBZY- 1的生长情况，确定该细胞的最佳接种浓度和用药时间点，继而采用MTT法检测黄芩苷对肾小球系膜细胞增殖的影响；运用倒置荧光显微镜观察黄芩苷对肾小球系膜细胞形态的影响；采用流式细胞仪检测不同浓度黄芩苷对肾小球系膜细胞凋亡的影响。结果 高糖环境下，肾小球系膜细胞的最佳接种浓度是2×103/mL，最佳用药时间是细胞培养48 h后。随着浓度升高，黄芩苷抑制HBZY- 1细胞增殖的作用增强。流式细胞仪检测结果显示，高糖环境下，肾小球系膜细胞总凋亡率随着黄芩苷作用剂量的增大而升高，黄芩苷浓度为6.25 μmol/L时，HBZY- 1细胞的总凋亡率与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；当黄芩苷浓度增至12.5 μmol/L时，HBZY- 1细胞的总凋亡率开始显著大于模型对照组（P<0.05）。结论 黄芩苷能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株HBZY- 1的增殖，在一定浓度范围内呈现明显的量效关系。     

新藤黄酸联合阿霉素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色实验观察GNA与ADM单独与联合作用对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响;膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染流式细胞仪检测给药后乳腺癌细胞MCF-7凋亡率。结果 MTT检测结果显示,在GNA浓度为0.125~4μmol/L和ADM浓度在0.5~16μmol/L范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随GNA和ADM剂量增加而降低,且联合用药组细胞存活率低于单独用药组。倒置显微镜和荧光显微镜下,与对照组比较,细胞明显缩圆变小,染色细胞核破碎,呈现凋亡状态,而联合用药组凋亡细胞数量明显高于单独用药组。AV-FITC/PI双染经流式细胞仪检测发现,GNA与ADM单独和联合作用均诱导MCF-7细胞凋亡,与单独用药组比较,联合用药组细胞凋亡率显著增加(P0.01)。结论 GNA与ADM单独和联合作用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合作用可产生协同效应,其作用机制可能与诱导细胞凋亡相关。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响，采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响，采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率，采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响，采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明，新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用，且抑制作用具有明显的剂量依赖性；fluo-3AM染色荧光显微镜下观察，可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平，且呈现浓度依赖关系；PI染色流式细胞仪检测结果表明，新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期；Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明，随着新藤黄酸浓度的增加，A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势；Western blot检测结果表明，新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 研究新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法 采用不同浓度的GNA作用细胞24 h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）共同作用HCT116细胞24 h。采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙（acridine orange,AO）和溴化乙锭（ethidium bromide,EB）染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ, AV）-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）/碘化丙碇（propidium iodide, PI）双重染色检测细胞凋亡率。结果 内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。     

新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid，GNA）对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法 倒置显微镜下观察细胞形态变化，采用噻唑蓝法检测细胞的存活率，单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine，MDC）染色法检测自噬泡的形成，吖啶橙（acridine orange，AO）染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化，Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3，LC3）- Ⅱ/LC3- Ⅰ以及Beclin- 1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖；MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成；AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量；Western blot结果显示，GNA作用U87细胞后，LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ比值增大，Beclin- 1的表达增加，提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。     

新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。     

新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖和凋亡的影响。方法 用不同浓度的新藤黄酸培养细胞24、48 h后，采用MTT法观察新藤黄酸对细胞生长的抑制作用；倒置显微镜下观察HUVECs细胞形态变化；通过DAPI染色后倒置荧光显微镜观察新藤黄酸对细胞形态学的影响；通过Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测新藤黄酸对HUVECs细胞凋亡率的影响；Western blot检测新藤黄酸对HUVECs中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测结果显示新藤黄酸能够明显抑制HUVECs的增殖，并呈时效及量效关系；荧光显微镜观察结果显示，新藤黄酸作用HUVECs后出现大量凋亡细胞；流式细胞术结果显示，与空白对照组相比，随着新藤黄酸浓度的增加，细胞凋亡率明显增加；Western blot检测结果表明Caspase-3蛋白表达水平显著增加。结论 新藤黄酸对HUVECs有明显的抑制作用，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

重楼总皂苷对人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖的影响

目的 观察重楼总皂苷(Rhizoma paridis total saponins，RPTS)对人胃癌MNK 45和MGC80 3细胞增殖的影响。方法 设定5个不同浓度（5、10、20、40、80 μg/ml）RPTS处理两种细胞24、48、72 h后，采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法测定MNK 45细胞和MGC80 3细胞增殖抑制率；设定浓度为10 μg/ml处理两种细胞24 h，采用吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）双染观察细胞形态学变化；设定浓度为10、20 μg/ml处理两种细胞6 h，用流式细胞仪测定细胞周期。结果 5～80 μg/ml RPTS对MNK 45和MGC80 3细胞增殖均具有显著的抑制作用(P<0.05，或P<0.01)，且药物剂量越大、作用时间越长，其抑制作用越强（P<0.01）；在相同药物浓度及相同作用时间下，RPTS对MNN 45细胞增殖的抑制作用较对MGC80 3作用显著增强（P<0.01）；RPTS作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征；RPTS使MNK 45细胞增殖被阻滞于G0/G1期，使MGC80 3细胞增殖被阻滞于S期。结论 RPTS能抑制人胃癌MNK 45和MGC80 3细胞增殖，诱导两种肿瘤细胞凋亡，影响两种肿瘤细胞周期时相的分布，但对两种肿瘤细胞株的抑制作用和对细胞周期时相的影响存在差异。     

石菖蒲水提物对PC12细胞增殖及细胞突起的作用

目的 研究石菖蒲水提物对PC12细胞增殖及细胞突起的作用，观察药物是否具有神经营养功能或促进细胞分化的功能。方法 采用细胞计数试剂盒检测不同浓度的石菖蒲水提物对细胞活力的影响；采用Image J软件统计PC12细胞的梭型细胞率、细胞分化率、细胞突起长度及阳性细胞分化率，以评价石菖蒲水提物对细胞分化的影响。结果 石菖蒲水提物在完全培养条件和低血清培养条件下对PC12细胞增殖有显著的促进作用，对细胞突起的长出、分支、延伸有明显的抑制作用。结论 石菖蒲水提物具有一定的神经营养功能。     

原花青素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制研究

目的:探讨原花青素在体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制.方法:体外培养人前列腺癌PC-3细胞株,用100,200,300μg/ml原花青素作用24 h.荧光素标记的连接素V(An-nexin V-fluoresein isothiocyanate,Annexin V-FITC)和碘化吡啶(propidium iodide,P1)双染检测原花青素对PC-3细胞凋亡的影响,采用流式细胞术检测以不同浓度原花青素作用后PC-3细胞线粒体膜电位(△ψm)的变化.结果:100μg/ml原花青素作用细胞24 h,5.64%的细胞出现早期凋亡,84.7%的PC-3细胞呈现线粒体膜电位降低;300μg/ml原花青素组PC-3细胞凋亡率和坏死率分别为44.86%、50.81%.结论:原花青素可在体外诱导PC-3细胞凋亡,其机制与降低线粒体膜电位有关.     

人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的 观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法 采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组，人参皂苷Rg1低、中、高剂量组，同时设置正常对照组，每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射，连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓，观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化，采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群，采用ELISA法检测外周血白细胞介素（interleukin，IL）-17A、干扰素γ（interferon gamma, IFN-γ）、IL-6、IL-10水平。结果 与模型组比较，人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降（P＜0.05），脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低（P＜0.05），脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低（P＜0.05），Treg（CD4+CD25+FoxP3+）比例显著升高（P＜0.05），外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低（P＜0.05），IL-10水平显著升高（P＜0.05），人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论 人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状，减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润，其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡，抑制炎症细胞因子表达相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌细胞HCCLM6凋亡的研究

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)对人高转移肝癌细胞HCCLM6凋亡的作用及探讨其作用机制。方法 甲基噻唑基四唑染色法检测EGCG对人肝癌细胞HCCLM6细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测细胞凋亡率和EGCG对HCCLM6细胞周期的影响，免疫荧光技术检测EGCG处理的HCCLM6细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)表达的变化。结果 EGCG可显著抑制肝癌细胞HCCLM6的增殖，且呈浓度依赖性；EGCG使细胞周期明显阻滞于G0/G1期；EGCG可明显导致HCCLM6细胞凋亡，使VEGF、OPN表达水平显著下降。结论 EGCG可以诱导肝癌HCCLM6细胞凋亡，其作用机制可能与阻滞细胞周期和调控VEGF、OPN表达有关。     

千金藤碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长和转移以及对血红素加氧酶-1和表皮生长因子受体基因表达的影响

目的 探讨千金藤碱抑制肺癌细胞A549生长、迁移和侵袭的作用以及对血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因表达的影响。方法 甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测千金藤碱对肺癌细胞的细胞毒性,观察其对A549细胞生长的抑制作用,并用倒置显微镜观察千金藤碱处理不同时间内A549细胞的形态变化;Transwell和侵袭实验检测A549细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot法分别检测A549细胞内HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 千金藤碱能够抑制肺癌细胞A549细胞的生长,细胞活力随着作用浓度的增加和时间的延长明显降低;10 g/ml千金藤碱处理24 h后,A549细胞发生体积变小、皱缩变圆和染色体固缩等现象;与对照组相比,千金藤碱（>5.0 g/ml）可使穿过隔膜和穿过基质胶的A549细胞数明显减少（P<0.05）。10.0 g/ml千金藤碱明显降低A549细胞中HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 千金藤碱可抑制肺癌细胞的增殖,降低A549细胞的迁移和侵袭能力,下调A549细胞的HO-1和EGFR基因的表达水平,且作用效果具有一定的时间和浓度依赖性。     

虫草菌丝药物血清对传代大鼠系膜细胞胶原代谢的影响

目的：研究含药血清对体外培养大鼠系膜细胞的胶原合成及分泌的影响。方法：运用血清药理学及胶原酶消化的[3H]-Proline掺入法研究系膜细胞的胶原代谢。结果：正常大鼠血清对系膜细胞的胶原代谢无异常作用，而肾衰竭大鼠血清对系膜细胞的胶原合成与分泌有促进作用，含药血清则有抑制作用。结论：含虫草菌丝的血清对大鼠系膜细胞胶原合成与分泌有抑制作用。