一次性牙刷上脱落细胞的DNA提取及STR分型

目的研究一次性使用牙刷上脱落细胞的DNA提取和STR分型。方法对一次性使用牙刷的采集方法、采集部位、DNA提取方法、存放时间对STR分型的影响进行比对研究。结果割取法可获得较高浓度的DNA,30例中检出9个以上基因座达27例,与擦拭法存在统计学差异（P〈0.05）。Chelex-100法、DNA IQTM法检出9个以上基因座分别为26例、24例,STR分型结果无统计学意义（P〉0.05）。提取牙刷的前、后部三束刷毛检出9个以上基因座分别达27例、28例,STR分型结果无统计学意义（P〉0.05）;放置1天、1周、1个月、3个月、6个月的时间后检出9个以上基因座分别为28例、27例、22例、12例、7例。结论割取法提取一次性牙刷上的脱落细胞进行STR分型效果良好;放置时间越长的牙刷,检出率越低。     

全血中DNA6种提取方法的比较

目的 比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异.方法 收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析.结果 常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义.改良有机法得率最低,IQ法得率最高.统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义.结论 与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提.     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

高度腐败组织不同DNA提取方法的比较

在法医实践中,一般采用Chelex-100法提取DNA可得到理想的STR分型,但对一些高度腐败组织,由于细胞自溶速度快,DNA降解严重,单纯依靠此法往往得不到理想的分型结果。为提高腐败检材检验成功率,本文运用Chelex-100联合DNA—IQ磁珠法和有机法联合QIAquick PCR纯化试剂盒法对高度腐败组织进行DNA提取,并比较其DNA提取的检测成功率。     

两种DNA提取法对签字笔上脱落细胞STR分型比较

目的比较Chelex-100法和硅珠法两种DNA提取法,在签字笔上附着微量脱落上皮细胞分型中的应用效果。方法 17名志愿者每人使用14支签字笔,每支笔每天使用20min,为期1个月,平均分为两组,分别保存1、3、5、7、14、21和28d,同时运用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取签字笔上遗留微量脱落细胞中的DNA,用Identifiler复合扩增系统在AB I 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型,同时采集上述17名志愿者口腔拭子作为对照。结果以基因座检出个数为指标,使用后签字笔保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均有统计学意义(P0.01);口腔拭子保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论对于微量检材,应用硅珠法提取的DNA分型效果明显优于Chelex-100法,具有较高的应用价值,而在检材量比较多时区别不明显。     

一种收集衣服上脱落细胞的新方法

目的建立一种生物脱落细胞的微量提取新方法。方法利用一套自制的“生物细胞提取仪”无损提取衣物等载体上的人体脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,用不同的试剂盒进行STR复合扩增检验。结果10例检材都得到16个基因座成功分型。结论用该方法提取微量细胞DNA,可获得满意的DNA分型。     

微量口腔脱落细胞检材的DNA检验

目的寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法。方法对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5ng,31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng。100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%。除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响。结论采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型。     

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法（M48）和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。     

Chelex法和两种磁珠法提取接触DNA效果的比较

目的比较Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对接触DNA的提取效果。方法将稀释为10ng、100ng的标准品DNA,分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法处理;对30例烟蒂和30例牙刷分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法和EQ国产磁珠法提取DNA,然后进行PCR定量和STR检测。结果Chelex法对DNA的提取无损失,DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对DNA的提取均有不同程度的损失;烟蒂、牙刷等检材采用Chelex法提取的接触DNA量和IPC CT值显著高于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法,但STR检验成功率却低于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法。2种磁珠法提取的DNA量、IPC CT值和STR检验成功率无显著性差异。结论污染轻、杂质少的接触DNA检材,用Chelex法提取最为方便快捷;IQ磁珠法、EQ国产磁珠法更适合污染接触DNA检材的提取及自动化操作。     

福尔马林固定石蜡包埋组织3种DNA提取方法比较

目的探讨经福尔马林固定1d石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA的简易有效方法。方法比较水浴加热、微波加热和二甲苯脱蜡的效果。组织脱蜡后分别采用Chelex-100+层析柱纯化法、DNA IQTM试剂盒磁珠提取法和Chelex-100+磁珠纯化法提取DNA;实时荧光定量PCR技术定量DNA;荧光标记毛细管电泳技术进行STR分型。结果二甲苯脱蜡的效果好于其他两种加热的脱蜡方法(P<0.05)。Chelex-100+层析柱纯化所获得的DNA量显著高于其他两种方法(P<0.05)。结论二甲苯脱蜡、Chelex-100+层析柱纯化法是一种简单、有效的FFPET处理方法。