小鹅瘟病毒荧光抗体的制备与应用

将小鹅瘟病毒 (GPV )分离毒xw株接种健康兔获得兔抗GPV超免疫血清 ,由此制备兔抗GPV荧光抗体。采用直接荧光抗体试验对人工感染雏鹅、鹅胚及自然病例进行了检测。结果表明 ,该方法可检出患病组织中的病毒抗原 ,且肠和肝的含毒量高于尿囊细胞。     

免疫荧光技术诊断鸡病毒性关节炎的研究

以从吉林采集的鸡病毒性关节炎病毒株(简称吉毒株)为免疫源,制备抗该病毒的高免血清。用硫酸铵提取免疫球蛋白G(IgG)。标记异硫氰酸荧光黄(FITC),制备成鸡病毒性关节炎荧光抗体(FA)。用此FA检查26例人工感染鸡病毒性关节炎病毒发病鸡,自然发病鸡和20例健康鸡的主要脏器。脾脏和肝脏检出率最高,达100％。心、肾、肺等脏器检出率较低,为40％左右。健康鸡的检出率为零。脾脏和肝脏的特异性荧光细胞最明显,容易判定,是本法首选器官。采用该法检测病料,2小时即获病原学诊断结果。     

间接酶标抗体染色法检测石蜡切片中鸡肾型传染性支气管炎病毒的研究

以抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＮＩＢＶ）Ｔ株的鼠源超免疫血清为一级抗体,辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的羊抗鼠ＩｇＧ为二级抗体,建立了检测石蜡切片中ＮＩＢＶ抗原的间接酶标抗体染色技术。经过特异性试验和阻断性试验,表明该方法具有高度的敏感性和特异性。应用该法对人工感染ＮＩＢＶＣ９００１株的鸡气管和肾石蜡切片中的病毒抗原进行了检测,结果：气管从感染后０．５～１１ｄ,肾从感染后１～２０ｄ,均检测到病毒抗原,阳性染色主要集中于气管粘膜上皮细胞和肾小管上皮细胞浆内。     

ELISA双抗夹心法检测鸡IBV的研究

用差速离心结合不连续蔗糖密度梯度纯化的鸡传染性支气管炎病毒抗原免疫兔和鸡,获得高效价的多克隆免疫血情。经鸡胚胚体乳剂吸收和过DEAE-52纤维素柱提纯其IgG,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的ELISA双抗体夹心法。应用本ELISA对人工感染鸡和传染性支气管炎病鸡群的气管样本的检测,其病毒抗原阳性检出率分别为10O％(20/20)和78％(39/50)。实验结果表明,ELISA双抗体夹心法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简单、快速、敏感性高、特异性强和重复性好等优点。     

鸡减蛋综合征诊断抗原与超免疫血清的研制

将鸡减蛋综合征(EDS)种毒AV-127、AV-HS-1接种鸭胚,孵育120 h后,收取尿囊液测定其血凝(HA)效价,加体积分数0.2%甲醛灭活作为诊断抗原;将病毒对鸡、兔进行3次免疫,当抗体效价达到29以上时分离血清,制备成超免疫血清.试验证明,该EDS诊断抗原和超免疫血清具有特异性强、敏感性高等特点,可用于感染鸡群的疫情调查、免疫鸡群的抗体水平监测、EDS的预防、治疗和对减蛋综合征病毒(EDSV)进行深入研究.     

猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原体(Mhp)外,该方法与几种猪病毒阳性血清及副猪嗜血杆菌Ⅳ型阳性参考血清均无交叉反应。对Mhr DL菌株感染的巴马猪血清抗体的检测结果显示,Mhr感染后第3天血清抗体阳转,第35天抗体水平达到高峰,抗体效价为1∶6 400。用该方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒平行检测138份现地血清样品,Mhr和Mhp的阳性检出率分别为71.0%和44.9%。用该方法对黑龙江、吉林、山东等地临床送检的457份血清的检测结果显示,Mhr阳性率为70.3%,表明我国猪群Mhr感染十分普遍。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA具有良好的特异性和敏感性,为Mhr抗体检测提供了技术手段。     

北京市及周边省份家禽鹦鹉热嗜性衣原体流行状况的调查

对北京市周边6省份怀疑感染鹦鹉热嗜性衣原体的鸡鸭血清样品374份、病料81份,分别使用IHA诊断试剂盒、ELISA试剂盒以及抗酸染色试剂和荧光抗体诊断试剂进行了检查,以评价北京市及其周边地区家禽鹦鹉热嗜性衣原体的流行性。结果,上述4种试剂检测出的阳性率依次为24.9%、77.9%、18.5%和38.2%;北京市10份SPF鸡血清的抗体全部为阳性;患病肉鸡、肉鸭气囊样品,蛋鸡输卵管样品的检出率较高。表明,北京市及其周边地区家禽已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,酶联免疫吸附法和荧光抗体染色法能分别提高抗体和抗原的检出率。     

禽流感病毒NS1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立

以禽流感病毒(AIV)重组NS1蛋白作为检测抗原,兔抗NS1血清为阻断抗体,建立了检测AIVNS1抗体的间接阻断ELISA方法.经筛选确定,抗原的最佳包被浓度为0.6 tμg/mL,阻断抗体的最佳稀释度为1:10 000,待检血清最佳稀释度为1:10.用该方法对42份AIV感染禽类血清样本和50份用AIV灭活疫苗免疫的禽类血清样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为95.2%,特异性为90.0%.交叉反应试验证明,该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应.临床检测结果显示,185份AIV灭活疫苗免疫禽血清样本的阴性率为89.2%,20份基因工程疫苗免疫禽血清样本的阴性率为95.0%,42份健康非免疫禽血清样本的阴性率为100%.表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于区分AIV自然感染禽和疫苗免疫禽.     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法 ,用该法检测 2 0份人工感染鸡血清样品 ,抗体阳性率为 10 0 % ,康复期鸡群血清抗体阳性率为 4 3% ,人工接种弱毒疫苗 6 5d和 170d鸡群血清抗体的阳性率分别为 6 0 %、70 %。经反复试验 ,确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件 ,即抗原包被浓度 10 .8μg/孔 ,待测血清最佳稀释度为 1∶10 0。     

用牛驴羊制备鸡新城疫和传染性腔上囊病二联超免疫血清的方法比较及临床应用效果

对牛、驴、羊用不同的新城疫( ND) 、传染性腔上囊病(IBD) 疫苗多次免疫,在ND HI 抗体和IBD AGB 抗体达到要求后采血,制备ND、IBD 二联超免疫血清。该抗血清对人工感染NDV 和IBDV 强毒的2 周龄雏鸡有较强的保护力。在现场对2 万多只鸡应用,有效率在95 % 以上。