大鼠早期心肌缺血CX43免疫组化研究

目的探讨早期心肌缺血的法医病理学诊断依据。方法通过建立大鼠心肌缺血模型,用免疫组化染色方法检测大鼠心肌缺血15、30、60、120、180min以及正常对照组心肌CX43的表达情况。结果在各组早期心肌缺血区内,见CX43阳性着色的分布与正常组相比,表现为部位的不同及数量上的差异。结论CX43的免疫组化染色对诊断早期心肌缺血有一定的价值,但尚需进一步研究证实。     

原位细胞凋亡检测在心肌缺血早期诊断中的应用

心肌缺血是心血管疾病研究中的重大课题之一,也是法医学摔死案例中最常见的死〔原因。肉眼检查具有诊断意义的心肌缺血性改变,其心肌缺血需经历10一12hHE染色检查心肌出血性病变也需要6～sh的缺血时限。在法医工作中所1的心脏性摔死案例很多是发生在发病6h以内。对其早期心肌缺血的诊断,虽有心肌特殊染色、电镜。酶组织化学、免疫荧光技术等检查方法,但它们都受设备条件限制和标本易受死后自港等影响,难以运用到法医检案工作中。目前对早期心肌缺血的病理组织学诊断,主要是通过排除其它死因后结合冠状动脉病变再作出推理性的结论。近…     

大鼠早期心肌缺血纤维蛋白原与肌红蛋白的免疫组织化学对比性研究

按Selye法结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支，复制早期心肌缺血（EMI）模型。根据心肌缺血不同时间（15min、30min、1h、2h、3h）分5个实验组，另设1个对照组；每组取心尖部及其邻近的心肌组织制成石蜡切片，进行HE、链霉系合素生物素过氧化物酶（SAB）染色。结果表明：早期心肌缺血30min组，缺血区心肌即出现肌红蛋白（Mb）缺失和纤维蛋白原（Fg）染色增强。随着缺血时间延长，Mb缺失或Fg染色增强范围扩大，程度加重，从心内膜下向外层心肌发展呈“波浪式推进现象”，二者在心肌缺血过程中的变化规律相同，灵敏度相似，但Fg易受血液污染而致其可靠性较Mb差。在注意血液污染的前提下，SABC－Fg技术为诊断EMI提供了新的途径。     

心肌缺血再灌流损伤HSP70 mRNA原位杂交研究

目的观察家兔早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白70 mRNA的表达变化,为心性猝死的法医病理学诊断寻找新的方法.方法建立家兔心肌缺血再灌流损伤模型,通过原位杂交技术观察研究.结果心肌缺血15min再灌流30min后,缺血区HSP70 mRNA阳性反应增强,阳性颗粒均匀散布于心肌全层,随着缺血时间的延长,阳性反应细胞数目逐渐增多,染色加深.结论HSP70 mRNA原位杂交检测可望为早期心肌缺血再灌流损伤的死后诊断提供新方法.     

早期心肌缺血心肌肌红蛋白变化的免疫组织化学研究

本实验应用免疫组织化学方法对12只犬急性冠脉阻断60及90分钟后心肌肌红蛋白变化情况进行了研究.结果表明心肌缺血60分钟已有明显的肌红蛋白脱失,比相应H、E 染色切片更易辨认缺血灶,在H、E 染色改变不明显的区域,免疫组织化学染色已显示出肌红蛋白的缺失.冠脉阻断90分钟时,缺血区肌红蛋白缺失更加清晰,因此该方法可用于诊断早期心肌缺血,结果可靠.     

实验性早期心肌缺血补体C5的免疫组织化学研究

建立大鼠急性心肌缺血模型。应用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对急性心肌缺血早期不同缺血时间心肌细胞内补体C5的变化进行研究。结果发现 :C5在心肌缺血 15min即可出现阳性反应 ,并随缺血时间的延长 ,其反应面积逐步增大。心肌细胞内C5阳性是早期心肌缺血的敏感指标 ,免疫组织化学染色法检测心肌细胞内C5的变化可望成为早期心肌缺血死后诊断的一种有意义的手段     

苏木素—碱性复红—苦味酸染色法对诊断早期心肌缺血的意义

本文应用苏木素-碱性复红-苦味酸染色法(HBFP)对家兔实验性心肌缺血的早期改变及急死案例的尸检材料进行了研究,实验性心肌缺血材料均作电镜观察。结果表明,冠状动脉结扎后15min,缺血心肌显复红色,呈散在分布,与正常心肌对比明显。随缺血时间延长,显复红色之心肌纤维数目增多,缺血区扩大。HBFP 染色法不受常规组织处理及死后自溶的影响,可用于临床病理及法医病理诊断。     

实验性早期心肌缺血结蛋白的免疫组织化学研究

目的　探讨急性心肌缺血早期不同缺血时间心肌细胞内结蛋白的变化 ,为早期心肌梗死死后诊断提供新的方法。方法　建立大鼠急性心肌缺血模型 ,用免疫组织化学S -P法研究心肌细胞内结蛋白的缺失情况。结果　正常心肌细胞结蛋白呈棕褐色阳性反应 ,急性心肌缺血 15min ,结蛋白即可在缺血区心肌呈小灶性缺染 ,随缺血时间延长 ,其缺染范围逐步扩大。结论　心肌细胞结蛋白的缺失是早期心肌缺血的极为敏感的指标 ,免疫组织化学染色法检测心肌细胞结蛋白的变化可望成为早期心肌缺血死后诊断的一种有意义的手段。     

大鼠急性心肌缺血再灌流损伤c-fos mRNA原位杂交实验研究

目的 探讨急性心肌缺血和/或再灌流早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因c-fos mRNA表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供依据。方法 复制心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血及缺血再灌流组。采用原位杂交方法结合图像分析与统计学处理方法研究心肌细胞内c-fos mRNA表达情况。结果 缺血10min再灌流30min,部分大鼠再灌流区心肌细胞胞浆内c-fos mRNA弱阳性反应,散在分布。缺血60min再灌流30min时达高峰,120min开始减弱。正常和单纯缺血组中缺血少于60min组未见有阳性表达。HE染色无明显病理改变。结论 原位杂交法检测c-fos mRNA方法灵敏特异,有望成为一项急性心肌缺血/再灌流早期损伤的诊断指标。     

抗人心肌肌凝蛋白重链单克隆抗体在心肌缺血尸检例中的应用

为了更有效地检测早期及超早期心肌缺血性病变，对5例心肌组织材料进行了肌凝蛋白重链（MyosinH链）及肌红蛋白的免疫组织学染色，探讨了肌凝蛋白的染色情况、抗原分布、死后变化对染色的影响及心肌早期、超早期缺血的有无、程度及与死亡的关系。应用石蜡组织切片进行的抗人心肌肌凝蛋白重链免疫组织学染色，在病理学方面尚属首次，这种单克隆抗体对人的特异性高，无共集现象，在心肌缺血数分钟乃至十几分钟后即可发现缺血心肌细胞中肌凝蛋白重键的脱失像，是分析早期、超早期心肌缺血所致急死及其它原因死亡案例心肌缺血病变的有力方法。     

Connexin43与心肌缺血相关性研究

目的探讨Cx43在急性心肌缺血时缺血时间与表达量的相关性。方法结扎兔左冠状动脉造成急性心肌缺血模型,于结扎后不同时间取左心室前壁心肌。用HBFP染色定位心肌缺血区域,以SP法显示Cx43的表达,通过图像分析系统分析采集IOD值,分析不同时间急性心肌缺血与Cx43的IOD值。结果急性心肌缺血时间与Cx43的表达呈负相关。即随着缺血时间延长,缺血面积增加,Cx43的表达呈下降趋势,两者相关性有统计学意义。结论兔心肌Cx43的表达,与缺血时间呈负相关。     

大鼠急性心肌缺血后心肌NF-kB的检测及其法医学意义

目的检测大鼠急性心肌缺血后核因子-kB(NF-kB)在心肌组织内的变化,探讨其在心肌早期缺血死后诊断中的法医学意义。方法30只大鼠随机分为正常对照,缺血0.5h,1h,2h,4h,8h共6组,每组5只建立大鼠急性心肌缺血模型,用免疫组化染色技术(S-P法),观察不同时间缺血心肌中NF-kB阳性着色,并应用图像分析系统进行定量分析。结果大鼠心肌缺血30m in,心肌细胞核出现散在NF-kB阳性染色;缺血60m in,心肌阳性染色细胞核增多;4h达高峰;8h组开始下降;免疫组化染色定量检则的阳性单位:缺血2h、4h、8h分别为20.042±1.084、22.028±3.452和20.524±1.595;正常对照组未见核阳性反应。结论大鼠心肌缺血8h内,心肌细胞核NF-kB阳性染色呈现一定规律性变化,对早期急性心肌缺血的死后诊断具有法医学意义。     

Effects of anoxia on the isolated perfused rat heart: histological, histochemical and electron-microscopic observations

A study to evaluate hematoxylin-basic fuchsin-picric acid (HBFP) and some other conventional stains in the demonstration of early anoxic lesions of the perfused rat heart has been undertaken. The extent of the anoxic injury was readily demonstrable electron-microscopically and in semithin sections by light microscopy, and at 1.5--2 hours practically all myocardial cells showed irreversible changes. The HBFP method was unreliable, giving false positive and false negative results both in the control and anoxic specimens. No clear changes were seen in the four histochemical dehydrogenase reactions applied, whereas damaged myocytes lost some of their affinity to eosin. Contraction bands were frequently seen in the anoxic hearts stained by the phosphotungstic acid-hematoxylin method. However, their presence was not in a linear accordance with the extent of the lesion. The perfusion model is not directly comparable to the myocardial infarct caused, for example, by ligating the coronary artery but, however, the present results suggest the difficulty of demonstrating the very early anoxic myocardial lesion by means other than electron microscopy.     

Is immunohistochemistry a useful tool in the postmortem recognition of myocardial hypoxia in human tissue with no morphological evidence of necrosis?

Myocytes in the border zone of myocardial infarction are under severe hypoxia without characteristic morphology of necrosis, and show ultrastructural features similar to those seen within the first hours after coronary occlusion. This study was carried out to evaluate the possibility that immunohistochemical methods could be used for the early diagnosis of myocardial infarction by detecting areas of hypoxia. Nineteen human sections of formalin-fixed paraffin-embedded myocardial samples showing a necrotic area and its border were submitted to immunohistochemical staining with the markers antimuscle actin, antimyoglobin, antitroponin T, antifibronectin, and anticomplement component C9. Sections were also subjected to azan trichrome and hematoxylin-basic fuchsin-picric (HBFP) staining techniques. Immunohistochemistry and azan trichrome showed that in the border zone there was a pattern of reaction intermediate between the infarcted area and the normal myocardium. The HBFP failed to distinguish these two areas. In conclusion, immunohistochemistry and azan trichrome can recognize myocardial hypoxia. Because hypoxia is an invariable condition in infarction, these techniques can be used to confirm suspected cases of myocardial infarction in which necrosis is not yet evident. However, considering that agonal states may be associated with generalized hypoxia, further studies are needed to confirm the reliability of this procedure in the earlier phases of myocardial infarction.     

Primary study of vascular endothelial growth factor immunohistochemical staining in the diagnosis of early acute myocardial ischemia

The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the model of rat early acute myocardial ischemia was studied by Strept-Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (SABC) immunohistochemical staining. After ligating the anterior descending branch of the left coronary artery, an initial rapid (30min) positive expression of VEGF in myocardial ischemic areas was observed, the intensity of positive expression of VEGF increased with the continuation of myocardial ischemia. After 5h infarction, the strongly positive myocytes of SABC-VEGF staining were predominantly limited to perimyocardial infarction areas. No positive expression of VEGF was found in the control group. These findings suggested that SABC-VEGF method could give a sensitive, specific, simple and objective morphologic evidence to the diagnosis of sudden cardiac death caused by acute early myocardial ischemia.     

急性心肌缺血早期血管内皮生长因子的免疫组织化学实验

对大鼠急性心肌缺血早期的不同时间、心脏不同部位的血管内皮生长因子（VEGF）的表达，运用免疫组织化学方法进行了研究。结果发现：缺血30min后在缺血心肌局部开始出现VEGF阳性表达，而缺血边缘区域和正常区域心肌在缺血1h后也开始出现VEGF阳性表达，并随着缺血时间的延长，VEGF的表达强度也越来越强。对照组未发现有阳性表达结果.表明运用免疫组化方法检测心肌缺血后心肌局部VEGF的表达，可望作为因心肌缺血导致心脏性猝死案例的诊断标准之一。     

实验性大鼠急性心肌缺血的组织化学和扫描电镜观察

本文报告40只大鼠结扎左冠状动脉所致实验性心肌梗死早期（缺血1～8h）的病理形态学变化。结果发现苏木素-碱性复红-苦味酸（HBFP）和吖啶橙荧光染色诊断早期心肌缺血较敏感，氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（TTc）大体染色法显示缺血境界鲜明可靠。此三种方法不受室温（15～20℃）死后自溶12～48h的影响。酸性复红染色（AF）对早期缺血组织较敏感，但受死后自溶影响，妨碍认定缺血区。扫描电镜（SEM）观察心肌缺血改变基本与透射电镜（TEM）相同，与早期自溶改变难以区别。     

大鼠急性心肌缺血zif/268蛋白表达及其意义

目的 探讨急性心肌缺血早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因蛋白zif/268的表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供新指标。方法 建立心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血组。采用免疫组化SABC法研究心肌细胞核蛋白zif/268的累积情况。结果 缺血 60min后,缺血区大鼠心肌细胞有部分心肌细胞核呈弱阳性着色,以后随缺血时间延长核阳性增强。正常和缺血30min组及未缺血区心肌细胞核未见有阳性反应。HE染色无明显病理改变。结论 免疫组化染色法检测心肌细胞核zif/268的表达对急性心肌缺血的死后诊断是一种有价值有意义的手段。     

大鼠心肌缺血再灌流损伤的免疫组化研究

用16只 SD 大白鼠建立缺血再灌流心肌损伤模型,其中8只预先静脉注射吗啡以抗心律失常。此外,再用8只大鼠开胸作正常对照。其心脏标本进行 HE 染色及抗肌动蛋白单克隆抗体(HHF_(35))免疫组化观察:对照组心肌呈均匀一致的棕褐色染色;注射吗啡后再灌流组心肌呈小灶性分布的 HHF_(35)染色缺染区;未注射吗啡组心肌缺染呈广泛大面积分布。结果表明,HHF_(35)免疫组化法对显示实验性心肌缺血再灌流损伤有重要价值,且心肌缺血再灌流损伤程度与心律失常有关。     

Further evaluation of immunocytochemical staining in the diagnosis of early myocardial ischaemic/hypoxic damage

The pattern of immunocytochemical staining with antibodies to caeruloplasmin, myosin, myoglobin and C-reactive protein seen in myocardium taken from deaths with macroscopic evidence of myocardial infarction and/or significant coronary artery atherosclerosis and from deaths with neither of these lesions has been correlated with H&E, PTAH and HBFP staining of myocardium and circumstances of each death indicative of antemortem hypoxia and/or ischaemia. Loss of staining with these antibodies correlated well with fuchsinorrhagia and both techniques are more sensitive than H&E and PTAH staining in the detection of early ischaemic/hypoxic damage to myocardium. However, their sensitivity is such that they appear to detect agonal changes and, therefore, cannot be used for specific diagnosis of early myocardial infarction.