应用λgt11载体系统克隆与表达禽源巴氏杆菌的抗原蛋白基因

本研究应用λgt11载体系统构建了禽源巴氏杆菌P1059菌株DNA的表达型基因文库。P1059DNA被机械剪切刀随机剪切成2～8kb大小的片段,其内部EcoRⅠ位点被甲基化后再在片段的两端连接上EcoRⅠ“接头”。然后将用EcoRⅠ酶消化的上述片段连接到λgt11载体臂上,在体外包装成重组噬菌体。将重组噬菌体感染大肠杆菌Y1090,用抗P1059高免家兔血清作为第一抗体,酶标羊抗兔IgG作为第二抗体对噬菌斑进行原位筛选。用筛选出来的7个抗原基因阳性克隆株分别溶原化于大肠杆菌Y1089,在IPTG诱导下使溶原菌表达出β半乳糖苷酶——外源性多肽链融合蛋白质。用惠斯顿免疫吸附试验检测从上述7株溶原菌所获得的融合蛋白质,均显示出特异性的抗原抗体反应。用小鼠作进一步的免疫保护试验证明,有一株溶原菌(PaC_1株)的粗制裂解物能使小鼠对P1059强毒菌的攻击具有较强的抵抗力。     

印度民事诉讼法探析——重溯印度民事诉讼法法典化历程

印度民事诉讼法法典化的历程是伴随着英国人的入侵而起步的.直至今天,在印度一共实施了五部民事诉讼法典.现行民事诉讼法典是在1908年民事诉讼法典基础上修订而成的,其可行性已由十几年法典的施行予以了很好的证明,而内容的详尽具体,体例的独特除了体现出一个现代程序性法律的所应具备的因素之外,也反映出其本身的特色,其中有许多还有可借鉴之处.     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索

应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C48 1成熟外膜蛋白H基因(ompmH),将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX ompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),当转化菌的D600nm值达到0.6～0.8时,对异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST ompmH表达的最适条件。结果,当细菌的D600nm值为0.6～0.8时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测,结果显示表达的融合蛋白GST ompmH能与C48 1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明pGEX 6p 1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。     

应用大黄石灰散试治猪坏死杆菌病

坏死杆菌病是坏死梭杆菌所引起的一种侵害家畜、家禽和野生动物的传染病,多发生于雨季和低湿的牧场地带。特征表现是受损伤的皮肤、皮下组织、口腔粘膜或胃肠粘膜发生凝固性坏死,其病变深达肌肉、腱、韧带和骨骼,致成透创(口、腹或胸腔)或肢端腐脱,或腭骨腐烂。如治疗不及时,常由于恶病质而导致病畜死亡。1973～1978年作者在某猪场应用大黄石灰散治疗猪坏死杆菌病83例,取得了较好的效果。 (一)材料及方法 1.材料:市售大黄末(每包500克),干净又未经水化的熟石灰。     

蓝舌病媒介库蠓的研究概况

蓝舌病(Bluetongue)的记载已有近百年的历史,最初认为可能是血寄生原虫所致;在1906年由Theiler证明其病原为滤过性病毒;而到1934年则被认为可能是由伊蚊(Aedes)传播的虫媒病毒,直到1944年才证明是由嗜吸牛、羊血的库蠓Culicoides Latreille,1809)为媒介的虫媒病毒。以后又发现兽虱[Melophagus ovinus(L.)]以及螫蝇和虻等均可能机械传播。     

博古通今大学者——吴小如

正在物欲横流、学风浮躁、追求升官发财几成时尚的时代,甘坐冷板凳数十年,始终以认真读书、作学问、求真知为终生取向的学者显然比较少;而自幼苦读,学养深厚,能对文史类多门学科融会贯通,并以一系列学术著作与大量文章证明其独到见解的学者则更如凤毛麟角。经过我这个不甚合格的老学生的数十年观察,结论是年逾米寿的吴小如老师就是当代比较少见的兼通国学诸多领域,在古代经典文     

梭状芽胞杆菌所致猪的恶性水肿

梭状芽胞杆菌所致猪的恶性水肿黄正才（四川省养猪研究所荣昌６３２４６０）家畜的恶性水肿，主要是因剪毛、断尾、去势和产仔时的创伤等感染病菌所致。本病常见于牛、马、绵羊，而猪发生此病的较少。１９９５年６月，作者在一养猪农家遇到１例，并从病理学、细菌学等方面...     

世界经济区域化基本数字

(1)本统计表系日本樱花银行环太平洋研究中心根据世界银行、国际货币基金组织等公布的材料,于1992年11月加工制作而成。这儿仅作了个别调整。 (2)国民生产总值、人口、面积是1990年数字,对外贸易是1991年数字。     

奶犊牛李氏杆菌病的诊断与防治

最近在南京市某奶牛场的犊牛群中发生一种以体温升高并伴发有神经症状为特征的散在性急性疾病,经流行病学调查、临床和解剖检查,以及微生物学检验证明是一起李氏杆菌病。经采取相应的防治措施,较快地控制了疫情,减少了损失,获得了较好的效果。     

威尼斯的面具

当中国人还沉浸在春节喜庆氛围中而没有消退之时,远在欧洲意大利亚得利亚海中的威尼斯已开始了一年一度的狂欢节!威尼斯狂欢节是当今世界上历史最久、规模最大的狂欢节之一。欧洲的狂欢节据说都起源于古代的神农节。每年的冬去春来之际,人们自动聚集在一起,载歌载舞,欢庆新的一年的农事活动开始。威尼斯狂欢节威尼斯狂欢节最大的特点是它的面具,其次是它的华丽服饰。这一传统可追溯到1700年前。权贵和穷人可以通过面具融合在一起。在面具的后面,社会差异暂时被消除。富人变成了穷人,而穷人成     

从“孤独小子”到“快乐剑客”

他从小孤独怪癖:为做“隐士”而绝食6天挑战“身体极限”;为练“胆量”而爬上80米高的电视塔战胜“懦弱”;为“凸现”孤独而流浪京城当乞丐体验“生存状态”。他最后仅用4年时间成了微软等5种认证的中国最年轻的网络专家,成了当今IT界炙手可热的风云人物,成了都市创业者崇拜的“快乐剑客”。“快乐的源泉在哪里?”2003年4月下旬,中央人民广播电台、北京电视台等媒体聚焦这位年仅22岁的“CEO”。     

中药复方禽瘟王对小鼠脾NKC活性的影响

中药复方禽瘟王对小鼠脾ＮＫＣ活性的影响郑继方瞿自明胡庭俊（中国农业科学院中兽医研究所兰州７３００５０）禽瘟王（ｑｉｎｗｅｎｗａｎｇ）是一种以传统辨证论治与现代免疫药理结合而成的中药复方。既通过多次攻击强毒证实保护率高，又经几十万只鸡的临床应用证明疗效...     

羊种布氏杆菌M5-90 DnaK的原核表达及免疫保护性研究

为对布氏杆菌DnaK基因的原核表达情况及免疫保护性进行分析,根据Gen Bank中公布的羊种布氏杆菌M5-90的DnaK基因序列,设计引物,合成DnaK基因片段,将其连接到p UC57载体测序;将DnaK基因克隆至原核表达载体pET-28a,转化入大肠杆菌DE3感受态细胞中诱导表达;用SDS-PAGE凝胶电泳对DnaK融合蛋白进行分析;利用AKTAxpress智能多维纯化系统进行纯化;用Western-blot分析其反应原性。将DnaK融合蛋白免疫小鼠,利用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgG和IFN-γ水平。结果显示,获得pET-28a-DnaK重组表达质粒,大约在69.8 ku处出现DnaK融合蛋白条带;纯化后条带单一;DnaK具有较好的反应原性;DnaK融合蛋白可诱导小鼠血清产生抗体IgG和细胞因子IFN-γ。结果表明,DnaK融合蛋白可作为候选亚单位疫苗。     

浅析印尼巴厘岛印度教的传承与发展

印度教又称“新婆罗门教”。它是4世纪前后,由婆罗门教吸收佛教、耆那教等教义和民间信仰演化而成。经8世纪印度著名哲学家商羯罗改革,逐步形成现代的雏形,主要经典有《吠陀》、《奥义书》、《摩诃婆罗多》等,基本教义与婆罗门教类同。后逐步形成毗湿奴教、湿婆教和性力派三大派列①。巴厘印度教(Agama Hindu-Bali)②是印度教与印尼巴厘岛本土文化相融合而形成的别具特色的宗教。以往许多介绍巴厘印度教的文章,大多以描写巴厘岛宗教风俗现象为主。但是,倘若要更加客观深入地认识巴厘印度教的实质,还必须顺延印度教在印尼,特别是巴厘岛传播…     

文化全球化发展的价值与伦理思考

文化全球化趋势是由经济全球化推动的.文化全球化即世界性文化不是由不同的民族文化简单拼凑而成,而是文化民族性和世界性的有机统一.文化世界性是以尊重多元文化和谐共存为前提的,是由不同民族文化基于共同利益和规范不断交往、融合和创新而形成的.中国特色社会主义文化就其本质和核心价值而言,符合全球化健康发展的要求,会对人类文明进步和文化全球化发展产生积极影响.     

兔巴氏杆菌病免疫的研究

兔巴氏杆菌病(即兔出血性败血病,简称兔出败)目前流行严重,对养兔业危害较大。为防制其流行,国内外有关学者就本病免疫问题开展了研究。但国外报道的甲醛灭能苗和油佐剂菌苗,效力都欠佳,美国CU弱毒株对兔不安全;国内试制的甲醛灭能苗虽有一定效力但也不理想。为此,我们开展了兔巴氏杆菌弱毒冻干菌苗的研究,利用禽霍乱弱毒Pc株,试制成冻干菌苗,对兔进行了安全、效力等项试验,初获满意结果。     

禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析

为探讨禽多杀性巴氏杆菌omph和ompa基因单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果,利用PCR技术扩增了禽多杀性巴氏杆菌omph和ompa基因片段,并克隆入pcDNA3.1(+),构建了DNA疫苗pcDNA-OMPH(pOMPH)、pcDNA-OMPA(pOMPA)和pcDNA-OMPH/OMPA(pOMPHA),将其体外转染SP2/0细胞,用间接免疫荧光试验检测其表达情况。同时以弱毒活疫苗作为阳性对照,pcDNA3.1(+)和PBS作为阴性对照,分别免疫4周龄鸡,检测血清特异性抗体水平、外周血淋巴细胞增殖情况和IFN-γ分泌情况,经强毒攻击后计算各疫苗的保护率。结果显示,融合DNA疫苗组血清抗体水平与弱毒活疫苗相当,明显高于单价DNA疫苗(P<0.05);pOMPHA组的刺激值(SI值)和IFN-γ分泌水平显著高于其他各组(P<0.05),单价DNA疫苗组略高于弱毒活疫苗组;强毒攻击后各DNA疫苗均可为动物提供一定的保护力,其中融合DNA疫苗的保护率最高,可达86.7%,其次为弱毒活疫苗,为73.3%,而单价DNA疫苗则低于弱毒活疫苗,仅为60%和66.7%。结果表明,DNA疫苗尤其是融合DNA疫苗在预防禽多杀性巴氏杆菌病(禽霍乱)方面具有较好的应用前景。     

禽大肠埃希氏菌融合菌株疫苗的研制及应用

对从陕西省主要养鸡地区病死鸡分离的禽致病性大肠埃希氏菌进行Omp分型 ,用不同Omp型的菌株构建成融合菌株。用融合菌株制作铝胶灭活疫苗 ,与单价疫苗和两亲本菌株双价疫苗的免疫保护效果进行比较。结果表明 ,融合菌株疫苗可对多种O血清型致病性大肠埃希氏菌的攻毒试验产生坚强的保护 ,保护率高达 93%～ 10 0 % ,而O血清型单价疫苗的保护率仅 6 7%～80 % ,双价疫苗的保护率仅 80 %。在生产中对蛋用鸡的应用结果表明 ,融合菌株疫苗可明显降低鸡的死淘率。     

猴年说猴

正乙未吉羊款款而去,丙申灵猴粉墨登场。我们眼前浮现出一张生动的面容,一个灵巧的身影,是那样的熟悉亲切。俗话说:"猴是人祖宗。"意即人乃猴子衍变而成。在达尔文进化论问世之前,已有此说久矣。其根据就是它们和我们实在是如出一辙,大同小异,无论是五官、身材,还是表情、动作、均与调皮捣蛋的孩子相差无几。近代生物学的发展,更证明和支持了古人的灵感直觉。猴属人类近亲,种类极多,狭义指猕猴。而广义的猴当包括     

鸭源大肠杆菌ZYD_2与多杀性巴氏杆菌YB_2原生质体融合菌株的鉴定分析

以新霉素标记的ZYD2(NEOs)和YB2(NEOr)作为亲本菌株,培育具有双亲本菌株免疫原性的融合菌株。在溶菌酶作用下,制备两亲本菌株原生质体,聚乙二醇4000诱导原生质体发生融合,利用NEO标记及亲本菌株培养条件不同筛选阳性融合子。ZYD2和YB2可分别得到95.32%和95.25%的原生质体制备率以及32.19%和33.52%的再生率。在含新霉素的麦康凯平板上传代培养获得5株稳定遗传的融合菌株。5株融合菌株可同时凝集双亲本菌株的鸭抗阳性血清。染色镜检观察融合菌株为革兰氏阴性中等大小杆菌。利用双重PCR检测,2株检测到双亲本菌株部分外膜蛋白A(OmpA)基因和部分外膜蛋白H(OmpH)基因,2株只检测到部分OmpA基因,另1株检测不到任何条带。测序结果表明检测到的部分基因片段与亲本菌株的相关基因片段同源性为100%。微量凝集反应显示,外周血可以检测到双亲本菌株抗体,抗体效价在二次免疫后可以维持较稳定水平。结果表明获得5株具有双亲本菌株免疫原性且可稳定遗传的融合菌株。