中华鳖TLR2部分序列的克隆及其组织表达差异分析

为探究中华鳖天然免疫的分子机制,针对TLR2(Toll-like receptor 2)保守区设计兼并引物,从中华鳖脾cDNA中扩增出了740bp的目标序列。测序和序列分析结果表明,该序列包含富含半胱氨酸型C端结构域、跨膜结构域和TIR结构域;与斑马鱼、鸡等脊椎动物相应的TLR2序列相似性为60.5%～74.4%。采用荧光定量PCR检测中华鳖感染嗜水气单胞菌后各组织TLR2mRNA表达的变化,结果显示,感染后第24小时,中华鳖脾和外周血TLR2mRNA相对表达水平升高,其中外周血中的增幅最显著,是对照组的8.57倍;中华鳖外周血经4μg/mL酵母聚糖刺激后,第2小时TLR2mRNA相对表达水平较高。首次获得了中华鳖TLR2部分cDNA序列,并分析了不同刺激物对中华鳖TLR2mRNA转录的影响。     

2008～2009年浙江省猪圆环病毒2型全基因组序列的比较和分析

应用PCR方法对2008～2009年采集的99份疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的脾、肺、淋巴结混合组织样本进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测,并以组织DNA为模板进行了PCV2的全基因组扩增,克隆后进行了测序。结果显示,2008年与2009年浙江省PCV2的平均阳性率为47.5%,与2004～2006年相比基本持平。随机选取18份阳性病料进行PCV2全基因组测序分析,结果,18个毒株均属于Group1,其中5个毒株(27.8%)属于1A分支,3个毒株(16.7%)属于1B分支,9个毒株(50%)属于1C分支。表明,Group1依然是浙江省PCV2的主导基因型,且1C分支从无到有,并逐渐占据主导地位。     

猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒三重PCR检测方法的建立

针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪伪狂犬病病毒(PRV)gD和猪细小病毒(PPV)VP2基因保守区域,设计了特异性引物,在分别建立单一病毒基因PCR检测方法的基础上,通过对3组引物的比例和浓度、dNTPs和Mg2 浓度、退火温度等条件的优化,建立了针对上述3种病毒的三重PCR检测方法。敏感性试验表明,应用该方法最低可检测到4×10-4ng/μL的PRV双链DNA模板和2×10-5ng/μL的PCV2和PPV单链DNA模板。对21份自然感染病猪样品的检测结果表明,该三重PCR检测结果与单一PCR检测的结果完全符合。试验结果显示,建立的三重PCR方法可用于3种DNA病毒的同时检测,具有快速、准确的特点,有临床应用前景。     

中西医结合防治奶牛隐性乳房炎

奶牛乳房炎研究在西方已有百余年历史，虽然取得了很大成绩，但尚未能彻底解决。在乳房炎中又以隐性乳房炎危害最大。据我们1982～1989年不完全调查，北京、上海、杭州、郑州、开封、洛阳等地区奶牛乳房炎的头数阳性率〔经用杭州乳房炎试剂（HMT）检定〕分别达62.7％、63.0％、60％～80％、68.9％、69.7％和69.2％；乳区阳性率分别为31.0％、35.8％～51.2％、40.0％、44.7％、36.6％和48.2％。解决隐性乳房炎难度最大的问题是病因、病原复杂、感染率高及人为因素不易控制。防治隐性乳房炎的基础是加强饲养管理和挤奶卫生，在此基础上实行…     

猪瘟病毒石门株E2蛋白的单抗制备及抗原表位鉴定

用猪瘟病毒石门株E2(SM-E2)的BC区原核表达蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备单抗,测定其效价并鉴定抗原表位。结果表明,制备了1株持续、稳定分泌抗SM-E2的单克隆抗体2B10,效价在1∶600～1∶1 000之间。单抗2B10能与常规SDS-PAGE转膜的SM-E2蛋白发生反应,表明其识别的是线性表位,并且该单抗只能识别石门毒株,而不能与C株疫苗及2型流行毒株发生反应。点突变E2蛋白ELISA分析结果表明,该单抗不与707、709、711、713和714位突变蛋白发生反应,表明单抗2B10识别的线性表位为707I-X-P-X-G-X-G-G714。该单抗对猪瘟病毒抗原多样性分析和致病机制研究有一定的应用价值。     

羊种布氏杆菌M5-90 DnaK的原核表达及免疫保护性研究

为对布氏杆菌DnaK基因的原核表达情况及免疫保护性进行分析,根据Gen Bank中公布的羊种布氏杆菌M5-90的DnaK基因序列,设计引物,合成DnaK基因片段,将其连接到p UC57载体测序;将DnaK基因克隆至原核表达载体pET-28a,转化入大肠杆菌DE3感受态细胞中诱导表达;用SDS-PAGE凝胶电泳对DnaK融合蛋白进行分析;利用AKTAxpress智能多维纯化系统进行纯化;用Western-blot分析其反应原性。将DnaK融合蛋白免疫小鼠,利用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgG和IFN-γ水平。结果显示,获得pET-28a-DnaK重组表达质粒,大约在69.8 ku处出现DnaK融合蛋白条带;纯化后条带单一;DnaK具有较好的反应原性;DnaK融合蛋白可诱导小鼠血清产生抗体IgG和细胞因子IFN-γ。结果表明,DnaK融合蛋白可作为候选亚单位疫苗。     

猪生殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展

猪生殖与呼吸综合征 (Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＰＲＲＳ)是由猪生殖与呼吸综合征病毒 (ＰＲＲＳＶ)引起的一种新ＲＮＡ病毒病。它以母猪发热、厌食和流产、死产、干尸化胎、产弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。该病自 1987年首次在美国发现以来 ,先后流行于加拿大、德国、荷兰、西班牙、比利时、英国、法国、意大利、波兰、丹麦、马耳他等国家[1] ,现已遍及北美洲及欧洲 ,亚洲的日本、韩国、菲律宾及我国的台湾省也有疫情报道。近几年来 ,随着优良种猪的…     

乳头药浴结合干奶期药物治疗控制奶牛乳房炎

西方国家研究奶牛乳房炎已经100多年了,迄今为止,普遍认为控制此病的最有效措施仍然是挤奶后乳头药浴和干奶期乳房内注入药物。我们采用自己研制的乳头消毒剂——碘消灵和干奶期治疗药物——长效抗菌素油剂(TA—125)在现场进行乳头药浴和干奶牛治疗防治奶牛乳房炎的试验。报告如下。 (一)材料和方法 试验于1987年3月在合肥市保健奶牛场进行。共选黑白花奶牛109头,分试验组和对照组。试验组53头奶牛,对照组56头奶牛。两组奶牛饲养管理、年龄、胎次等基本一致,均系手工挤奶。在近两年内困其他原因两组奶牛分别被淘汰15头和10头。     

长效抗生素油剂防治乳牛干奶期乳房炎效用试验(初报)

早在1948年,国外资料就已宣告,应用不同的抗生素能治疗干奶期及泌乳期乳房炎。三十多年来,此种疗法有了很大的发展,累见报道。我国有关防治干奶期乳房炎的试验报道甚少,近年内仅见到重庆市井口农场育牧分场和上海奶牛研究所的报告。作者等曾于1981年在一个经常使用青、链霉素治疗且慢性乳房炎较严重的奶牛场,使用青、链霉     

猪瘟病毒浙江分离株体外生长特性及其囊膜糖蛋白E2分子的变异分析

为了研究分离于浙江省衢州和杭州的2株猪瘟病毒基因2型流行毒株QZ-07、HZ1-08在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)中的生长特性及其囊膜糖蛋白E2的分子进化特征,采用间接免疫荧光、效价测定和进化分析等分子生物学方法将基因2型流行毒株与基因1型石门株进行了比较。结果表明,石门株在PK-15细胞中的增殖效率明显高于ST细胞;感染PK-15细胞后第48小时,细胞内的效价可达107TCID50/mL,而在ST细胞中的效价只有105.25 TCID50/mL。基因2型毒株在PK-15细胞中的增殖水平明显低于ST细胞,尤其以HZ1-08株更为明显;感染ST细胞后第48小时,细胞内的效价为105 TCID50/mL,而PK-15细胞中的效价只有102.75 TCID50/mL。两基因型毒株E2的核苷酸同源性低于90%,氨基酸同源性约为90%。表明,基因2型毒株的体外生长特性及其E2的分子特性均与基因1型毒株存在差异。