钩藤碱在Caco-2细胞模型中吸收规律研究

目的 建立体外模拟体内肠道细胞——人结肠癌上皮细胞（the human colon adenocarcinoma cell line，Caco-2）的Transwell模型，以此研究钩藤碱在Caco-2细胞模型上的跨膜转运特征。方法 采用聚酯碳酸酯膜连续培养Caco-2细胞21 d，形成致密的单层细胞模型。然后对影响钩藤碱在Caco-2细胞模型上转运特征的因素(包括浓度、时间及跨膜转运蛋白P-糖蛋白)进行考察；同时采用液相色谱-质谱法对溶液中钩藤碱的含量进行测定。结果 钩藤碱在Millicell系统上的转运量具有一定的浓度-时间依赖性，主要以主动转运的方式进行吸收，且随着时间和药物浓度的增加，转运量明显增加。不同浓度钩藤碱从细胞基底侧（basolateral, BL）到细胞刷状缘侧（apical，AP）的表观渗透系数（apparent permeability coefficient, Papp）与AP侧到BL侧的Papp比值均在1.5以上，且钩藤碱从BL侧到AP侧的外排速率明显高于从AP侧到BL侧的吸收速率。当加入P-糖蛋白抑制剂后，药物由BL侧向AP侧的转运量显著减少，而由AP侧到BL侧的转运量显著增加。结论 钩藤碱在Caco-2细胞上转运存在一定的浓度及时间依赖性，且P-糖蛋白介导钩藤碱在Caco-2细胞上转运。     

沙苑子化学成分研究

目的 研究沙苑子总黄酮提取部位的化学成分。方法 采用色谱方法分离化学成分，根据波谱数据及理化常数进行结构鉴定。结果 共分离鉴定了11个化合物，分别是大麻苷（Ⅰ）、杨梅素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅱ）、异槲皮苷（Ⅲ）、槲皮素3-O-α-L-阿拉伯糖苷（Ⅳ）、毛蕊异黄酮7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅴ）、芒柄花苷（Ⅵ）、西伯利亚落叶松黄酮3-O-β-吡喃葡萄糖苷（Ⅶ）、山奈酚3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅷ）、毛蕊异黄酮（Ⅸ）、沙苑子苷A（Ⅹ）、鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅺ）。结论 西伯利亚落叶松黄酮3-O-β-吡喃葡萄糖苷为首次从该植物中分离的成分。     

红车轴草异黄酮药理作用研究进展

红车轴草(Trifolium pretense L.)为豆科车轴草属植物,又叫草原幸运草、紫花苜蓿、三叶草等[1],主要作为家畜和家禽的优良牧草,广泛分布于世界各地[2].红车轴草含有异黄酮、黄酮、香豆素、皂苷、微量维生素及矿物质等多种成分,其中异黄酮主要包括鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BCA)、大豆苷元、芒柄花素、染料木素等[1],因与雌激素结构相似而具有雌激素样作用[3].     

桃红四物汤中6种指标性成分的含量测定

目的 建立超高效液相色谱法同时测定桃红四物汤中6种指标性成分（羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯）的含量。方法 采用Agilent Technologies 1290 Infinity超高效液相色谱系统、DAD检测器。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相A为0.05%乙酸水（含7.84 mmol/L乙酸铵），B为甲醇溶液，采用梯度洗脱程序和多波长融合检测方法，流速0.2 μL/min，进样量2 μL，柱温25 ℃。结果 6种指标性成分的线性、分离度、稳定性、重复性与精密度良好；该方法能够快速、稳定地定量羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯。结论 该方法稳定、可靠、重复性高，可适用于桃红四物汤的质量控制。     

新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”探针药物法考察新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450，CYP450)亚型酶活性的影响。 方法 将新藤黄酸与6种亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4)对应的特异性混合探针药茶碱、双氯芬酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑与大鼠肝微粒体孵育，采用高效液相色谱法同时检测肝微粒体中6种探针底物的相对酶活性并计算其半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration, IC50）。 结果 不同浓度新藤黄酸作用后大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶活性相比较，差异均具有统计学意义，且随着新藤黄酸的浓度增高，各种酶的活性呈现明显的降低趋势。通过抑制曲线计算得到新藤黄酸对CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4的IC50值分别为4.18、45.61、10.02 μmol/L，对CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1的IC50值均大于100 μmol/L。 结论 新藤黄酸对CYP2C19酶活性有中等抑制作用，对CYP3A4酶活性有弱抑制作用，但对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1酶活性没有抑制作用。     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco-2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的 从细胞因子、人β- 防御素（human beta defensin，HBD）及Toll样受体（toll- like receptors，TLRs）途径探究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction，BAEB）抗白念珠菌的机制。方法 以Caco- 2细胞为实验模型，先以BAEB作用Caco- 2细胞24 h，再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans，C.A)共培养24 h，以MTT法测定Caco- 2细胞存活率；采用酶联免疫吸附试验检测Caco- 2细胞上清液白细胞介素- 6（interleukin- 6, IL- 6）、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3水平；采用普通PCR法检测Caco- 2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA的表达水平。结果 与对照组比较，C.A单独作用的Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3表达水平显著升高（P<0.05），TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平显著上调（P<0.05）；与C.A单独作用相比，BAEB预保护Caco- 2细胞后，Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β及HBD- 2、HBD- 3表达水平明显降低（P<0.05），TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平也显著下调（P<0.05），BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。     

基于网络药理和细胞实验探索芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的机制

目的 采用网络药理学和细胞实验探究芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的潜在作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台和中医药整合数据库检索芪玉三龙方成分筛选靶点，通过美国肿瘤基因组图谱数据库获得肺癌靶点基因。构建蛋白相互作用网络，并采用基因本体数据库和京都基因和基因组百科全书数据库进行富集分析。对核心靶蛋白与化合物进行分子对接分析，并以A549细胞进行实验验证。结果 芪玉三龙方对于非小细胞肺癌的潜在有效靶点162个，蛋白相互作用网络分析得到核心靶点基因20个，主要的生物学过程为对缺氧的反应、MAPK级联、炎症反应，主要的功能通路为钙信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、细胞周期。分子对接结果表明，MMP9-槲皮素、PPARG-异鼠李素、PTGS2-刺芒柄花素、JUN-刺芒柄花素之间存在有效的结合亲和力。在A549细胞实验中，PCR和Western blot分析结果表明，芪玉三龙方含药血清能够促进PPAR-γ mRNA和蛋白表达（P＜0.05），抑制c-JUN、COX-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）。结论 芪玉三龙方通过影响A549肺癌细胞的凋亡、侵袭和肿瘤血管生成及炎症进程达到干预肺癌的作用。     

新藤黄酸增强仑伐替尼在肝细胞癌中的敏感性及其机制研究

目的 探究新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）协同仑伐替尼对肝细胞癌的抑制、促进肝细胞癌的凋亡作用及其机制。方法 采用H22肝癌细胞建立H22移植瘤小鼠模型,将模型复制成功的小鼠随机分为模型组（生理盐水）,GNA组（20 mg/kg）,仑伐替尼组（10 mg/kg）,GNA（20 mg/kg）+仑伐替尼（10 mg/kg）组,每组10只,各组小鼠给予相应药物连续灌胃2周,每日1次;比较各组小鼠的肿瘤质量和体质量,观察GNA联合仑伐替尼对肿瘤生长的作用;苏木精-伊红染色观察GNA联合仑伐替尼对移植瘤模型小鼠各脏器的影响;TUNEL染色检测移植瘤模型小鼠肿瘤组织中细胞凋亡情况;Western blot检测移植瘤模型小鼠肿瘤组织中孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）、P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistant protein,BCRP）、细胞色素P450 3A4酶（cytochrome P450 3A4,CYP3A4）、P53、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X,Bax）、cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,GNA+仑伐替尼组肿瘤生长得到明显抑制（P＜0.05）,并且优于GNA组和仑伐替尼组（P＜0.05）;给药后小鼠的主要器官（心、肝、脾、肺、肾）均未出现明显病变;与模型组比较,各给药组均发生明显的细胞凋亡,GNA+仑伐替尼组细胞凋亡较仑伐替尼组更加明显;GNA+仑伐替尼组肿瘤组织中PXR、P-gp、BCRP、CYP3A4、Bcl-2的蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,P53、Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著上升（P＜0.05）。结论 GNA与仑伐替尼联用可以发挥协同作用,GNA增强仑伐替尼对肝细胞癌的敏感性,其分子机制可能与下调核受体PXR的表达水平,从而影响代谢酶CYP3A4,转运体P-gp,BCRP和凋亡蛋白P53、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3的表达有关。     

桃红四物汤中5种主要成分在脑缺血再灌注模型大鼠体内组织分布的研究

目的 研究脑缺血再灌注模型大鼠在灌胃桃红四物汤 （Taohong Siwu Decoction，THSWD）后，5种主要活性成分（藁本内酯、苦杏仁苷、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸）在体内组织分布的差异和规律。方法 采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，然后再灌注24 h建立脑缺血再灌注大鼠模型；将模型复制成功的大鼠灌胃THSWD（50 g/kg）后，于不同时间点采集组织（心、肝、脾、肺、肾、脑），样品处理后采用UPLC-MS技术检测各组织中待测成分的含量。结果 各成分在模型大鼠各组织中分布广泛，在肝、肾组织中浓度较高，其中藁本内酯在脑组织中有较高浓度；苦杏仁苷在肺部具有组织分布特异性；芍药苷、羟基红花黄色素A在大鼠肝、脾、肺组织具有较高分布比例，阿魏酸在脑组织中未检出。结论 THSWD中5种主要活性成分在各组织中分布广泛，各组织不同时间点的分布趋势也存在较大差异。     

桑叶提取物对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”混合探针药物法，探究桑叶水提物（aqueous extract of mulberry leaves，AML）、桑叶醇提物（ethanol extract of mulberry leaves，EML）对大鼠体内细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）酶活性的影响，从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用，为临床合理用药提供参考。方法 选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9）的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d，第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物，根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱- 串联质谱测定各组血药浓度，用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果 连续灌胃桑叶提取物14 d后，与9.0 g/L氯化钠注射液相比，AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢，安非他酮则不明显；与羧甲基纤维素钠组相比，EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢，非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用，对CYP2B6可能无显著性影响；EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用，对CYP1A2可能无显著性影响。     

正交设计优选亳菊叶总黄酮提取工艺

目的 探讨亳菊叶总黄酮提取工艺.方法 采用正交试验,考察乙醇浓度、料液比、提取时间及提取次数4个因素对亳菊叶总黄酮提取率及浸膏得率的影响.结果 优选出总黄酮最佳提取工艺为8倍量70%乙醇,回流提取2次,每次1 h.结论该工艺可提高亳菊叶总黄酮的提取率.     

响应面分析法优化马兰总黄酮提取工艺研究

目的 应用响应面分析法优化马兰总黄酮的提取工艺。方法 以单因素研究为基础,以总黄酮提取量为响应值,以4因素3水平的响应面分析法优化马兰总黄酮的提取工艺。结果 马兰总黄酮的最优提取工艺条件为：乙醇浓度为40%,液料比为〖DK(〗16.5∶1,〖DK)〗提取时间为2 h,提取次数3次,在该条件下,马兰总黄酮提取量预测值为162.538 mg,实际验证值为156.867 mg,并得出各因素对马兰总黄酮提取量的影响大小依次为乙醇浓度、液料比、提取次数、提取时间。结论 响应面分析法可用于优化马兰总黄酮的提取工艺,实验验证值与模型预测值基本相符。     

异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响

目的 观察异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响，从代谢酶方面探讨异甘草酸镁保肝作用的机制。方法 将大鼠分为正常对照组、模型组和给药组，每组6只。尾静脉注射给药，给药组给予20 mg/kg异甘草酸镁，正常组及模型组给予同容积生理盐水，连续14 d。模型组及给药组于给药第13天20：00点灌胃25% CCl4，剂量为1.6 mL/kg，制备大鼠急性肝损伤模型。各组大鼠于末次给药2 h后，从髂动脉放血处死，取肝组织进行苏木精-伊红染色，观察肝组织病理形态变化；采用RT-PCR及Western-blot检测各组大鼠肝组织中CYP1A2、CYP2E1 蛋白及mRNA表达水平。结果 肝组织病理学检查显示异甘草酸镁能改善肝组织损伤；模型组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平显著高于正常对照组（P<0.05），给药组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平较模型组显著降低（P<0.05）。结论 异甘草酸镁能够治疗肝损伤，其减毒机制可能与抑制CYP1A2、CYP2E1的表达有关。     

黄秋葵总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）氧化应激损伤的影响。方法 采用MTT法检测黄秋葵总黄酮对HUVECs的保护作用，采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）及一氧化氮（nitric oxide，NO）含量，酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素-1（endothelin-1，ET-1）含量，采用二氯荧光乙酰乙酸盐法检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）的表达水平。结果 黄秋葵总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率，增加SOD活性，升高NO水平，降低MDA、ET-1水平，降低细胞ROS水平，升高eNOS的表达水平。结论 黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用，其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO氧化应激相关因子，调控内皮细胞功能相关蛋白eNOS的表达有关。     

亳菊总黄酮对大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的 研究亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心脏的保护作用，为其进一步开发提供实验依据。方法 将SD大鼠随机分成假手术组，模型组，复方丹参滴丸组（140 mg/kg），亳菊总黄酮小、中、大剂量组（分别为75、150、300 mg/kg）。采用冠状动脉结扎法复制大鼠急性心肌缺血模型。分别于手术前，手术后0、0.5、1.0、2.0 h测定各组大鼠心电图ST段变化；冠状动脉结扎后24 h测定血清天冬氨酸转移酶（aspartate aminotransferase, AST）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）、肌酸激酶（creatine kinase, CK）含量；观察各组大鼠心肌梗死率及心肌组织形态学变化。结果 亳菊总黄酮可降低急性心肌缺血大鼠各时点心电图ST段抬高值，降低血清AST、LDH、CK含量，降低心肌梗死率，改善心肌组织形态学变化，呈现出一定的剂量效应。结论 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心脏有一定的保护作用。     

经皮冠状动脉介入治疗的急性冠状动脉综合征患者CYP2C19基因多态性分布及新加丹参饮对CYP2C19基因缺陷患者的干预作用

目的 研究新加丹参饮对气滞血瘀型急性冠状动脉综合征经皮冠状动脉介入（acute coronary syndrome with percutaneous coronary intervention，ACS-PCI）患者的干预作用，并对CYP2C19基因缺陷患者进行亚组分析。方法 将92例气滞血瘀型ACS-PCI患者随机分为对照组和治疗组，对照组予常规西医治疗，治疗组在此基础上加用新加丹参饮进行治疗，2周后观察患者的肝肾功能、心肌酶谱、心绞痛疗效、中医临床症状及血小板聚集率等指标，来评价新加丹参饮的疗效。亚组研究：探讨CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抵抗（clopidogrel resistance，CR）的相关性及新加丹参饮对CR患者的干预疗效。结果 治疗后治疗组心绞痛症状、中医症状改善情况明显优于对照组（P<0.05）；治疗组纤维蛋白原、血小板聚集率改善作用优于对照组（P<0.05）；CYP2C19*2基因型、CYP2C19*3基因型均与CR具有显著相关性（P<0.05）；CYP2C19*2突变纯合子合并CYP2C19*3突变杂合子发生CR概率（4/4）最高，随着突变链增多，CR发生率有一定上升趋势；治疗组在降低CR患者血清纤维蛋白原方面优于对照组（P<0.05），在降低CR患者血小板聚集率方面与对照组相当（P>0.05）。结论 新加丹参饮干预治疗能有效改善患者心绞痛症状、中医临床症状；CYP2C19基因多态性与CR的发生密切相关；新加丹参饮对CR患者的纤维蛋白原、血小板聚集率具有改善作用。     

不同制备工艺对桃红四物汤中5种成分含量的影响

目的 研究不同制备工艺对桃红四物汤中成分的影响。方法 采用高效液相色谱法测定桃红四物汤中没食子酸、5-羟甲基糠醛、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸含量。结果 桃红四物汤A液中5种成分含量均值分别为82.9、11.1、235.7、917.3、49.3 mg/L；桃红四物汤B液中5种成分含量均值分别为126.6、13.2、187.3、1 040.4、28.6 mg/L，说明不同制备工艺使桃红四物汤中5种成分含量产生显著性差异。结论 不同制备工艺得到的桃红四物汤中化学成分种类和含量会产生变化。