HPLC-MS/MS法检测生物样品中的手性苯丙胺类药物和司来吉兰

目的建立全血、尿液中手性甲基苯丙胺、手性苯丙胺和司来吉兰同时分析检测的方法。方法全血、尿液经Oasis PRiME MCX固相萃取柱前处理,采用Phenomenex Lux AMP(150×3.0mm,3μm)手性液相色谱柱,以甲醇-5mmol/L碳酸氢铵水溶液(p H=11)为流动相,梯度洗脱,流速为0.35m L/min,以正离子多反应监测(MRM)模式检测,扫描时间21min。结果甲基苯丙胺两种对映异构体、苯丙胺两种对映异构体和司来吉兰在1-500ng/m L的范围内线性关系良好(各物质r~2 0.99);甲基苯丙胺两种对映异构体的检出限为0.05ng/m L,定量限为0.1ng/m L,苯丙胺两种对映异构体和司来吉兰的检出限为0.1ng/m L,定量限为0.5ng/m L;在低(5ng/m L)、中(50ng/m L)、高(200ng/m L)三个添加浓度下,各目标物的绝对回收率和基质效应均在可接受的范围内,日内精密度和日间精密度均小于12.61%。应用该方法对口服司来吉兰的比格犬的血液和尿液进行检测,结果表明仅存在司来吉兰原体、代谢物R-甲基苯丙胺和R-苯丙胺。结论本研究建立了全血、尿液中手性甲基苯丙胺、手性苯丙胺和司来吉兰的HPLCMS/MS定性、定量分析检测方法,该方法操作方便,灵敏度高,可为司法实践中法医毒物鉴定提供一定参考。     

基于上转换发光技术的尿液中吗啡及甲基苯丙胺快速定量检测方法研究

目的利用上转换发光免疫层析技术(UPT-LF)建立一种尿液中吗啡(MOP)及甲基苯丙胺(MET)快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒(UCP-NPs)作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP及MET进行定量检测的UPT-LF,即MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF。以MOP-UPT-LF为代表,评价UPT-LF对痕量毒品检测极限,通过系列浓度标准品测定,评价定量检测能力。根据常规检测阈值,调整MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF检测敏感性及线性范围,并评价其定量检测能力。以LC-MS、GC-MS分别作为MOP、MET检测的金标准,以胶体金免疫层析作为对照,对执法现场收集尿样进行检测,确定UPT-LF定性检测性能。对系列浓度MOP模拟阳性样本同时进行LC-MS及MOP-UPT-LF定量检测,对系列浓度MET模拟阳性样本同时进行GC-MS及MET-UPT-LF定量检测,评价UPT-LF定量检测性能。结果在痕量检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性可达1ng/m L,线性范围为1~5000ng/m L(r=-0.98172,P<0.0005)。在常规检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性为50ng/m L,线性范围调整为50~3000ng/m L(r=-0.98464,P<0.0005);MET-UPT-LF敏感性为100ng/m L,线性范围为100~5000ng/m L(r=-0.99964,P<0.0005)。就定性检测而言,MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF均较优,灵敏度及特异度均为100%,与胶体金结果一致。就定量检测而言MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF与定量确证方法LC-MS及GC-MS无显著差异。结论本研究建立MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF方法,在满足快筛试剂快速简便的基础上,进一步实现了现场快速定量检测,为尿液中毒品的现场快速定量检测提供了技术保障。     

抗体芯片竞争抑制法检测尿液中吗啡含量

目的建立抗体芯片竞争抑制法检测尿液中吗啡含量的方法。方法将吗啡单克隆抗体固定在用琼脂糖包被的芯片上,与含有吗啡的尿液检材和Cy3荧光标记-吗啡-BSA复合物进行竞争抑制反应,共聚焦扫描仪采集反应图像并进行分析。结果吗啡单克隆抗体及Cy3-吗啡-BSA的最佳浓度是31.25μg/m l、12.50μg/m l,检测线性范围0.01~10ng/m。回收率在91.2%~109.2%之间,尿液检测限为0.02ng/m l。甲基苯丙胺、安非他明与吗啡抗体之间无交叉反应,与可待因有一定的交叉反应。结论抗体芯片竞争抑制法检测尿液中的吗啡含量具有灵敏度高,特异性好、操作简单、高通量等优点,可用于法医毒物检测、戒毒效果监测。     

LC-MS/MS快速筛分样本中的甲基苯丙胺、甲氧那明

目的建立准确可靠的甲氧那明、甲基苯丙胺初筛阳性样本的确证分析方法,排除由于服用甲氧那明而产生的假阳性结果。方法采用Kinetex~?C18 (100×2.1mm,2.6μm)色谱柱,乙腈和0.1%的甲酸梯度洗脱,流速0.4 mL/min。质谱条件:选用电喷雾离子源,在正离子电离模式下,采用多反应监测(MRM)的质谱扫描方式,甲氧那明、甲基苯丙胺的母/子离子对分别为:m/z 180.2→120.8和m/z 150.1→91.1。结果甲氧那明线性范围0.2～500ng/mL,线性相关系数0.9913,最低检测浓度(LOQ, S/N=3)为0.2ng/ml,空白添加回收率85.6%～98.3%。甲基苯丙胺线性范围0.05～500ng/mL,线性相关系数0.9968,最低检测浓度(LOQ, S/N=3)为0.05ng/ml,空白添加回收率91.4%～103.1%。结论本研究建立的LC-MS/MS分析方法准确、快速、有效,可用于因甲氧那明干扰初筛为阳性的样本进一步的确证是否含有甲基苯丙胺成分。     

UPLC-MS/MS测定唾液中的3种毒品成分

目的建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时检测唾液中的甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡成分。方法唾液样品经沉淀蛋白后,通过ACQUITY UPLC BEH Phenyl(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱分离,以0.3%甲酸水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式进行质谱分析。结果甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡在4μg/L^20μg/L质量浓度范围内线性关系良好;在4μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L五组添加样本下,添加回收率范围在87%~128%;甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡的检出限(LOD)和定量限(LOQ)均分别为0.2μg/L和4μg/L。结论本方法采用乙腈沉淀蛋白提取,快速、简单、回收率高,适用于同时检测唾液中甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡。     

基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析生物样品中甲基苯丙胺

目的建立尿样和头发中甲基苯丙胺的基质辅助激光解吸飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析方法。方法尿样采用液液提取,头发经0.1mol/L盐酸水解后采用液液提取,以碳纳米管为基质应用MALDI-TOF-MS法检测。结果尿样中甲基苯丙胺的最低检测限（LOD）为0.5μg/mL,线线范围为线性范围为0.5～100μg/mL（R2=0.9970）;毛发中甲基苯丙胺的最低检测限（LOD）为0.4ng/mg,线性范围为0.4～60ng/mg（R2=0.9976）,对送检案例中尿样和头发检材进行检测,效果良好。结论本方法适用于尿样和头发中甲基苯丙胺的分析,与传统气相色谱质谱联用和液相色谱-质谱联用相比,分析速度更快,适合大批量样品同时分析。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定生物检材中乌头碱

目的建立一种简单、快速测定生物检材(血液、尿液、胃内容物)乌头碱的超高效液相色谱-质谱联用法。方法样品采用乙腈沉淀处理。色谱柱为UPLC C18(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.4m L/min,柱温40℃。采用ESI离子源,MRM模式检测。结果乌头碱在血液0.5~500ng/m L,尿液1~1000ng/m L浓度范围内线性良好(r>0.995)。乌头碱方法回收率在91.3%~110.2%之间;提取回收率在72.8%~83.5%之间;日内、日间RSD均小于14%。结论本方法简单、快速检测生物检材中乌头碱。     

生物检材中吗啡类生物碱的LC-MS／MS分析

目的针对滥用药物分析鉴定实践中亟待解决的问题,开展LC-MS/MS分析生物检材中吗啡类生物碱的应用研究。方法满足不同的鉴定需要,分别建立血液、尿液、唾液和头发等生物检材的样品前处理方法,确定同时分析海洛因、单乙酰吗啡、吗啡、可待因、乙酰可待因、二氢可待因酮和氢吗啡酮等吗啡类生物碱的LC-MS/MS方法。将方法应用于实际案例。结果所建立的方法对吗啡类生物碱分离良好。尿液稀释法、尿液提取法和头发中吗啡的最低检测限(LOD)分别为10ng/mL、0.01ng/mL和0.01ng/mg。结论所建立的方法简便、快速、特异性强、灵敏度高。目标物中加入二氢可待因酮和氢吗啡酮扩大了方法的实用范围。     

LC-MS/MS法同时检测生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己CSCD

目的建立准确、灵敏的生物检材中钩吻素子、钩吻素甲及钩吻素己的液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)检测方法,并进行方法学验证。方法以士的宁为内标,血液、尿液及肝组织样品经1%氢氧化钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取,采用ZORBAX SB-C_(18)柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含0.1%甲酸和5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱。定性定量分析采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测模式。结果血液、尿液及肝组织中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己在相应的线性范围内线性良好,相关系数(r)>0.995 0,检出限分别为0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)、0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)及0.01 ng/m L(或0.01 ng/g),各生物碱提取回收率为61.9%~114.6%,准确度为92.4%~114.3%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过11.0%。结论本方法选择性好、灵敏度高,适用于同时检测生物体液和组织中的钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己,可为钩吻中毒的临床诊治和法医学鉴定提供有效的技术支撑。     

LC-MS/MS检测生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲

目的建立生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,并进行方法学验证。方法 0.4 m L血液、尿液或0.4 g肝组织加入内标混匀后用乙酸乙酯进行提取,提取物经Allure PFP Propyl柱(100 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测检测雷公藤甲素和雷公藤酯甲。结果各生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲在相应的线性范围内线性良好(r0.995 0),检出限均为2 ng/m L或2 ng/g,回收率为61.08%~102.98%,日内精密度和日间精密度均小于12.58%,准确度为90.61%~105.80%。结论所建方法简便、选择性好,适用于同时分析各种生物检材中的雷公藤甲素和雷公藤酯甲,为雷公藤中毒的法医学鉴定和临床诊治提供技术保障。     

谈现代科技的发展与宪法(学)的关系

现代科技发展十分迅猛,对宪法和宪法学都带来了深刻的影响。文章两位作者就现代科技发展对宪法(学)发展的贡献,现代科技发展对宪法(学)的冲击和挑战,特别是器官移植与生命权、克隆人与宪法价值、基因检测与公民的平等权、信息传播与公民的隐私权、因特网技术与宪政体制和基本权利等问题展开了讨论。宪法(学)也不是消极地应对科技的发展,而是积极地回应,一方面给现代科技的发展提供支持,另一方面也为限制现代科技发展的负面效应提出有效的对策。现代科技的发展应该回归到宪法的价值体制之内。     

庭审方式改革与控辩审之角色定位

刑事审判的效率与公正虽取决于多种因素,但是与刑事庭审的方式确有着密切的关系。在庭审过程中法官调查证据、适用法律的形式、途径以及控、辩、审三方的地位及相互关系对事实的认定、证据的取舍、法律的适用的都会产生直接的影响。我国原有法官唱主角的庭审方式已经不再适应现代刑事司法的要求,庭审方式的改革和完善已成为刑事司法改革的重点内容之一。改革的目标就是厘清控、辩、审三方职能和关系,正确界定法官的地位和作用,确保刑事审判中的控诉、辩护和审判职能应分别由三方各自独立而互不依附的诉讼主体承担,三方的诉讼行为也不得与其诉讼职能相违背,与他们进行或参与审判活动的具体目标应该保持一致。     

未成年学生的人身伤害与学校的法律责任

未成年学生发生人身伤害的情况时有发生。有的发生在校内,有的发生有上学或放学的路上;有的发生在课上,也有的发生在课间;有的是由于嬉戏所致,有的是学校管理疏漏引发。总之致伤的原因和情况多种多样。由此所引发的未成年学生诉学校损害赔偿的案件也逐年增加。对学校应否承担损害赔偿责任,人们争议颇多。...     

侦诉协作机制的价值分析与制度构建

建立侦诉协作机制,增强侦诉合力,形成"大控方"的追诉格局,对于保证刑事诉讼活动的顺利进行,具有重大的价值和意义。目前,司法实务部门对侦诉协作机制所进行的积极探索,为该机制的立法构建提供了有益的实践经验。在《刑事诉讼法》再修改时应当通过程序设计对侦诉协作机制作出明确规定,并完善相应的配套制度,推动该机制良好地运行。     

债权人与继承人利益的协调与平衡

我国《继承法》偏重于保护继承人的利益,忽视了对于遗产债权人利益的保护。建议在编纂民法典时,坚持继承人利益与债权人利益并重和同等保护的理念,明确规定先清偿债务后分割遗产原则,建立相应的遗产管理制度、遗产清册制度和遗产债权公告制度,采取有条件的限定继承制度,规定共同继承人对于遗产债务的连带责任。     

“一带一路”建设与公司准据法的确定

公司准据法确定的根本思路在于,将公司内部事务主义作为其基本规范立场以实现公司自治和投资自由化,通过非结论式正面清单合理界定内部事务主义的规范范围,同时在特定的条件下保留对内部事务主义的规范例外,形成对公司自治的限制和维护投资安全和利益。《中华人民共和国涉外民事关系法律适用法》相关规定的设计和表达未能完整体现这一思路,当文本表现出规范立场的摇摆不定和规范范围的模糊不清时,司法实践呈现出的就是裁判的乱象丛生。这也难以为"一带一路"建设提供公正高效权威的法律保障。解决上述问题的具体路径是,提炼公司准据法规范范围中所列举事项的内在关联性和分类标准,将现有的客观标准主观化,合理设定公司准据法的规范范围;在坚持将内部事务主义作为公司准据法确定的基本规范立场的同时,为防止法律的滥用和应对虚假外国公司,应明确针对内部事务主义的适用作出旨在保护第三方利益或者社会公共利益的限制性规定。     

论提单持有人及其权利、义务和责任

本文针对我国《海商法》现有规定 ,比较借鉴了外国立法 ,提出了我国《海商法》应分别规定提单持有人和收货人 ,以明确提单持有人的含义 ,并在此基础上 ,划分了提单持有人的权利、义务和责任。论文最后对我国《海商法》的修改提出了立法建议。     

论死刑核准权的收回与死刑复核程序的完善

少杀、慎杀是严格限制死刑适用的重要刑事政策。因特定时期的需要而将部分死刑案件的核准权长期、大范围下放,带来诸如死刑适用的标准不统一,二审程序与死刑复核程序“合二为一”,违反法律适用和法制统一原则,不符合尊重和保障人权原则等严重弊端,应当采取果断措施,将死刑核准权收回。设立最高人民法院分院是将死刑核准权收回最高人民法院的最佳方案。并结合司法实践,就应否坚持全面复核、全案复核、规定死刑复核案件审理期限、实行开庭审理、死刑案件实行三审终审制等如何完善死刑复核程序问题进行了探讨。     

食品安全非监管保障措施的引入与规制

针对我国食品安全事故频发,食品安全环境日益恶化等突出问题,绝大多数专家学者研究的结论是"监管缺失",然而,沿此思路提出的对策和政府部门为加强监管付出的努力并没有取得明显的成效。"三聚氰胺"、"毒大米"、"地沟油"等仍然畅通无阻地越过道道监管关卡,通过各种渠道流向公众的餐桌。因此,有必要反思"主流研究"的偏差,改变"监管依赖"思维模式,加强非监管机制研究,构建企业自律、公众参与、信用建设和信息传递等非监管制度,弥补监管制度的不足,走出食品安全监管劳而无功的困境,塑造放心、健康、和谐的食品安全环境。