HE染色切片组织的STR检测及法医学应用

目的建立并优化HE染色切片组织STR分型方法,评估HE染色切片组织的STR分型有效性。方法用QIAgen法提取2例尸检人体的心、肝、肺、肠等8种组织的HE染色切片DNA,用TaqMan荧光探针法通过荧光域值循环数(Ct值)测定获得各提取液中的DNA质量浓度,以阳性内对照(internal posi-tive control,IPC)监测PCR过程中的抑制水平。再用Identifiler试剂盒扩增,在3100-Avant上进行STR片段分析。结果在本研究建立优化的STR分型技术条件下,8种人体组织的HE染色切片DNA提取液质量浓度均可达到1ng/μL以上,其IPC的Ct值提示无PCR抑制剂。HE染色切片组织的STR分型有效性与石蜡包埋组织相当,其DNA随时间延续而缓慢降解。结论在一定保存时限内,HE染色切片的DNA质和量可以满足STR分型检测需要,但受残余甲醛固定剂的影响,HE染色切片的分型成功率随保存时间延长而降低。     

不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较

目的探讨选择不同固定液处理冷冻病理组织HE切片质量的效果。方法选择我中心冷冻后尸体法医病理解剖100例,冷冻温度为-22±3℃,针对心、肝、脑以及肺选择6种不同固定液处理组织块并制作HE切片,对切片质量进行对比分析。结果不同固定液针对不同冷冻脏器处理效果有显著差异,各组HE切片观察结果显示:甲醇固定液处理脑组织处理更优,EAF固定液处理心肌组织更优,10%中性甲醛处理肝脏组织更优,丙酮固定液处理肺组织更优。结论不同脏器因其组织结构及细胞所含成分不同,选择相应固定液能有效改善或缓解因冷冻后对组织及细胞带来的不良效应。     

石蜡包埋人体组织DNA分型的研究

目的研究石蜡包埋人体组织的DNA提取方法对其STR分型的影响,并建立石蜡包埋组织的DNA提取方法。方法经不同预处理条件后采用Chelex-100法提取石蜡包埋人体组织中的DNA,用不同的反应体系进行STR复合扩增检验。结果经福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织直接采用Celex-100法提取DNA与65℃水浴除蜡后采用Celex-100法提取DNA均可获得满意的DNA分型。结论该方法简便易行,实验效果好,适合检案。     

人体组织在非缓冲福尔马林固定剂中的STR检测时限

目的评估经非缓冲福尔马林固定不同时间后的人体组织STR分型有效性,了解各种人体组织在非缓冲福尔马林固定剂中可获得完全STR分型位点的时限。方法市售40%福尔马林溶液经1∶9稀释后在室温(15～20℃)下固定人体组织,不同时间后取样。以QIAamp DNA法和IQTMDNA System法提取DNA,用quantifiler humanTaqman探针法进行DNA定量,用常规16 STR位点的AmpFSTR identifiler kit和短小片段9 STR位点的AmpFSTR Min-iFiler kit进行PCR扩增,在3100遗传分析仪进行扩增DNA片段长度检测,用GeneMapper ID v3.2对STR位点检出率进行分析。结果福尔马林固定时间、组织类型以及DNA提取方法、PCR的DNA模板终浓度均影响非缓冲福尔马林固定后人体组织STR分型效能。DNA提取用QIAgen法为优,DNA模板终浓度的最佳范围在1～3ng/μL。各类型组织在非缓冲福尔马林固定剂中的降解速率有差异,肺组织的降解速率最慢,肝、肠组织最快。固定时间在4d内的组织可以获得常规STR的完整位点数;固定时间在15d内的组织可以获得miniSTR的完整位点数。结论非缓冲福尔马林固定人体组织时间是影响STR分型的最主要因素,其次组织类型、提取方法、DNA模板浓度及STR基因座的选择也是此类降解样品成功检测的关键因素。     

组织切片DNA提取的探讨

在医患关系纠纷中,病理组织切片经常被作为至关重要的证据,但对它的检验是目前法医DNA检验的难点。因样本制作固定的时间、保存环境等不同因素的影响,病理组织切片DNA检出率并不高。本文从实际检案角度出发,详细介绍了病理组织切片DNA提取的过程,并分析了其可能影响因素。     

福尔马林固定组织SNP与STR检测的比较

目的检测经长期福尔马林固定的组织降解情况,并比较组织中SNP与STR的检出率。方法本文对24例经福尔马林固定、-20℃保存5年的组织样本,采用Quantifiler?Trio DNA定量试剂盒检测样本DNA的降解系数及浓度,运用55-SNPs SNa Pshot复合分型体系和Power Plex?21试剂盒分别进行SNP与STR检测。结果大部分样本降解系数在1~8,发生不同程度的降解。与未降解样本相比,SNP分型完全一致,检出率为100%;其中8例样本STR分型存在33个等位基因丢失,降解系数均大于2.6,且75.8%的等位基因片段长度大于300bp。当样本检测出16个STR基因座时,似然率与54个SNP相当。当样本检出大于17个STR时,似然率大于54个SNP。STR基因座片段长度与等位基因检出率之间呈负相关。除2例样本降解系数较小却发生等位基因丢失外,其余样本降解系数与等位基因检出率之间呈负相关。结论经福尔马林长期固定的组织DNA易降解,检测SNP明显优于STR,但需要更多的SNP以提高个体识别能力。     

石蜡包埋人体组织STR检验的探讨

目的 探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法 取少量石蜡包埋组织。65℃水浴脱蜡。Chelex-100法提取DNA，PCR扩增，循环次数分别为28次和28＋6次，扩增产物经310型测序检测。结果 普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座，固定时间延长，检出率下降；PCR循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。结论 普通甲醛固定时间长短直接影响PCR—STR的检验，减少模板量有利于PCR反应成功，PCR次数为28＋6时，灵敏度增加。但应谨慎判读结果，以免错误分型。     

常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法

石蜡切片及HE染色一直是组织学、病理组织学和法医病理学等生物医学的最基本和最普遍形态学检验技术,人们早已习惯地称之为常规组织切片染色。其制作质量的优劣，直接影响组织学观察、检验和诊断结果。特别是对于临床病理学诊断和法医病理学鉴定至关重要。     

人体组织两种简易保存法DNA抽提效果的比较研究

比较研究人体不同组织在不同保存条件下DNA抽提效果。取冷冻保存和50％乙醇固定保存的各种组织，用有机溶剂抽提法提取DNA。用50％乙醇固定保存的人体不同组织在校长时期内仍可获得与新鲜冷冻组织相近的DNA抽提效果，经卡方检验二者无明显差异（X2≤0．21，P≥0．995）。乙醇保存法简便易行，DNA产量高，效果好，适用于各种特殊情况下的组织保存。     

石蜡包埋人体组织STR检验的探讨

目的探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法取少量石蜡包埋组织,65℃水浴脱蜡,Chelex-100法提取DNA,PCR扩增,循环次数分别为28次和28 6次,扩增产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座,固定时间延长,检出率下降;PCR循环次数增加,灵敏度增加,但有错误分型的情况。结论普通甲醛固定时间长短直接影响PCR-STR的检验,减少模板量有利于PCR反应成功,PCR次数为28 6时,灵敏度增加,但应谨慎判读结果,以免错误分型。     

福尔马林固定石蜡包埋组织3种DNA提取方法比较

目的探讨经福尔马林固定1d石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA的简易有效方法。方法比较水浴加热、微波加热和二甲苯脱蜡的效果。组织脱蜡后分别采用Chelex-100+层析柱纯化法、DNA IQTM试剂盒磁珠提取法和Chelex-100+磁珠纯化法提取DNA;实时荧光定量PCR技术定量DNA;荧光标记毛细管电泳技术进行STR分型。结果二甲苯脱蜡的效果好于其他两种加热的脱蜡方法(P<0.05)。Chelex-100+层析柱纯化所获得的DNA量显著高于其他两种方法(P<0.05)。结论二甲苯脱蜡、Chelex-100+层析柱纯化法是一种简单、有效的FFPET处理方法。     

福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA提取

由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物等,可以有效提高FFPET中提取的DNA质量,为FFPET的DNA分析奠定了基础。     

一例因福尔马林治疗肝包虫病引发的医疗纠纷——以医学与法学为视角

因福尔马林治疗肝包虫病引发的医疗纠纷案例比较罕见。从医学视角看,该案例中造成不良损害后果的机理是因福尔马林对胆道系统的损伤和/或包虫头节阻塞造成梗阻性黄疸,同时在患者本身肝功能受损的共同作用下最终导致了施行肝移植手术。从法学视角看,该案例中选择鉴定机构的方法、损伤参与度的应用及对伤残评定适用标准的探讨对医疗纠纷案件的处理有借鉴意义。     

论折旧基金对扩大再生产的贡献

折旧基金属于维持简单再生产的补偿基金，但折旧基金又具有扩大再生产的作用。对此问题，马克思和恩格斯进行过论述，并用数学方法作了具体分析。本文在马克思恩格斯论述的基础上，运用数学手段对折旧基金对扩大再生产贡献的数量规律作了进一步的阐述     

Variation in Methods of Cardiac Dissection—A Potential Confounder in Measuring Cardiac Weight at Autopsy

To evaluate whether the weight of the heart measured at autopsy may be affected by the type of dissection, a prospective study was undertaken of the weights of sequential cases of nonpediatric hearts. Four hundred fifty‐eight hearts were examined (age range 17–96 years; mean 55.9 years; M:F = 3:1). The hearts were each weighed fresh, once the apex had been sliced, the auricles of the atria opened and blood drained, and again once the cardiac chambers had been opened completely. The difference in the partially and fully opened heart weights (range 146–1028 g; mean 434.8 g; range 134–1011 g; mean 420.8 g, respectively) (p < 0.05) ranged from 0 to 100 g (mean 14 g). In the most extreme example, the weight of the partially opened heart was 30.3% higher than that of the fully opened specimen. Failure to fully open the heart prior to weighing may result in significant error.     

Genotyping of DNA samples under adverse conditions of Low Copy Number—LCN (formolisados tissue samples and embedded in paraffin)

This paper aims to describe and evaluate a protocol for extraction of DNA (deoxyribonucleic acid) in formalinized tissues and embedded in paraffin for forensics genetic analysis. In outline the method is the removal of paraffin with an organic solvent in 0.3–0.5 mg of the sample of the tissue under study, followed by removal of formaldehyde, rehydration and soon after the extraction of genomic DNA. The extraction is achieved through the stages of cellular lysis, enzymatic digestion of proteins and DNA precipitation in ethanol medium. With the research we can conclude that even when the DNA is present in small quantities in conditions of extreme difficulties in its extraction, as formalinized tissues and embedded in paraffin, the technique of optimizing the extraction of DNA used both to organic extraction as Chelex, for use in the polymerase chain reaction (PCR), and possible the investigation of different samples of human tissue, biological samples, or was obtained under the conditions tested, a DNA with good quality and concentration. The samples were amplified for the mini-STRs loci using the product marketed in multilocus, using a methodology recommended by the supplier and validated for analysis of forensic DNA. Commercial kit was used MiniFiler from Applied Biosystems. The DNA fragments amplified by PCR showed that the extracted DNA had good amplification.     

死后眼组织变化与死亡时间推断

眼组织推断死亡时间一直是国内外法医学界的研究热点之一,从肉眼观到镜下观,从细胞水平到分子水平,不断有新的研究成果和报告出现。大量研究资料表明,随着死亡时间的延长,眼角膜、视网膜、玻璃体液及房水等均出现规律性的变化,并与死亡时间高度相关,可用于死亡时间推断。本文对其在法医学领域的研究进展作以综述。     

从高度腐败生物脏器中检验7种碱性药物的研究

介绍了从开棺高度腐败尸体脏器中检验常见碱性药物的方法.在高度腐败及脂肪较多的脏器中加入碱性药物利多卡因、安坦、氯丙嗪、安定、氯氮平及内标物SKF_525A各5.0μg,舒乐安定、佳静安定各10.0μg,在碱性条件下用乙酸乙酯与乙醚混合液提取,经GC/NPD分析.回收率因各药的性质不同有较大差异,从20%～77.2%不等.腐败尸体脏器是明显碱性,产生的生物基质对利多卡因和安定的检验有一定干扰.