利用COI序列序列鉴定常见嗜尸性蝇种

目的 检测嗜尸性蝇类线粒体DNA(mtDNA)细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COI)中278bp序列,鉴定蝇科3属5种嗜尸性蝇,解决其形态学种类鉴定的难题,为死亡时间推断提供技术支持.方法 从15省、市(地区)室外草地家兔尸体上采集蝇科3属5种共计18个蝇类成蝇样本,提取mtDNA进行PCR扩增,序列测定且上传GENBANK,...     

DNA条形码技术在法医昆虫学中的研究进展

嗜尸性昆虫的准确鉴定是应用昆虫判断死亡时间的先决条件,但是昆虫的鉴定只有相关类群的昆虫专家能够鉴定。DNA条形码（DNA Barcoding）技术是利用一个或少数几个DNA片段对地球上现有物种进行识别和鉴定的一项新技术。这一技术给生物分类研究带来了空前的繁荣,同时也给法医昆虫学中各昆虫种类的鉴别研究带来新的动力。     

嗜尸性蝇类线粒体DNA分子标记检测的研究进展

嗜尸性蝇类种属鉴定是利用昆虫进行检案的重要一步,常常对案件的侦破起到关键作用。传统上,仅依据其形态学特征来判断嗜尸性蝇类的种属。由于其形态结构复杂和种间形态差异微小等特点,尤其在其幼期很难鉴别其种属。利用线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ和Ⅱ(COⅠ和COⅡ)的序列对嗜尸性蝇类进行种属鉴定,是近几年来发展起来的新技术,该检测方法能有效地将嗜尸性蝇类鉴定到属种的水平,目前国内尚无这方面的报道,本文对国外这方面工作的进展作一综述。     

一种嗜尸性蝇类干样本DNA提取方法的改良

高度腐败尸体的死后间隔时间一直是法医实践中的难题。通过在现场腐败尸体上提取的嗜尸性昆虫,判断其生活习性,可以较准确地进行死亡时间推断,因此对嗜尸性昆虫种类的准确鉴定十分重要。由于案发现场环境复杂多变、人为破坏等情况,往往现场仅能发现一些干的嗜尸性昆虫样本、昆虫破残的肢体以及于蛹壳等,用形态学方法对其进行分类受到一定限制,取而代之用分子生物学方法可对嗜尸性昆虫进行种类鉴别。     

提取CO Ⅰ基因片段鉴定嗜尸性蝇类

目的通过扩增蝇类COⅠ基因片段,结合形态学特征鉴定嗜尸性蝇类的种类。方法运用改良平衡酚—tris饱和酚法提取蝇类DNA,进行COⅠ序列扩增和测序,与数据库序列进行比对和分析。结果改良平衡酚—tris饱和酚提取DNA方法可获得有效的蝇类DNA,并可应用于COⅠ基因片段扩增,进而进行蝇类种类的鉴定。结论平衡酚—Tris饱和酚法提取的噬尸性蝇类虫体DNA作为模板,用于COⅠ序列扩增,测序后与数据库目的序列分析比对,可准确鉴定嗜尸性蝇类的种类;和传统的昆虫形态学特征鉴定方法比较,该体系更准确,应用范围更广。     

呼和浩特等地区嗜尸性苍蝇mtDNA中CO Ⅰ基因序列检测及法医学应用

目的通过对嗜尸性苍蝇线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COⅠ)中278bp基因序列的分析,对其成虫及其幼虫、蛹、卵的种属进行鉴定,解决依据形态学方法难以鉴定的难题。方法随机分别采集呼和浩特和甘肃敦煌地区兔和猪尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、蛹及其腹中的卵,提取其mtDNA,经PCR扩增、产物检测与纯化、测序等,进行序列分析和构建系统发育树。结果双翅目嗜尸性苍蝇的种内基因差异均数小于1%,种间差异均数大于3%,成虫与幼虫、蛹、卵之间无显著性差异。结论mtDNA上COⅠ序列分析均可以有效地对嗜尸性苍蝇及其幼虫、蛹、卵进行种属鉴定,方法快速、简便和精确,可作为法医学嗜尸性苍蝇种属鉴别的可靠方法。     

16SrDNA序列分析在嗜尸性蝇类鉴定中的应用

目的通过mtDNA上16SrDNA中551bp基因序列分析,解决依据COI和COII上278bp和635bp基因序列难以鉴别丝光绿蝇、铜绿蝇种类的难题,为法医学嗜尸性苍蝇种类的鉴别提供依据。方法随机采集放置在呼和浩特及成都地区室外草地家兔尸体上的铜绿蝇和丝光绿蝇,对其mtDNA上16SrDNA中551bp基因序列进行分析、比对,构建系统发育树。结果通过对嗜尸性蝇类mtDNA上16SrDNA的551bp基因序列分析可以对丝光绿蝇和铜绿蝇进行鉴别。结论16SrDNA上551bp基因序列分析是对嗜尸性蝇类(尤其是铜绿蝇和丝光绿蝇)进行种类鉴定的有效方法,是对依据COⅠ和COⅡ序列分析方法鉴别嗜尸性苍蝇种类的重要补充。     

郑州地区食尸性苍蝇及幼虫mtDNA中COⅡ基因序列分析

目的 用mtDNA中细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ(COⅡ)基因序列鉴定法医学中常见食尸性苍蝇及其幼虫的种类. 方法 收集郑州地区大白鼠尸体上的苍蝇及其幼虫,提取DNA,PCR扩增CO Ⅱ序列,测序,用Clustalx和MEGA 4.0软件对基因序列进行比对分析及构建系统进化树.结果 成虫与幼虫基因差异不明显,CO Ⅱ基因序列可以对棕尾别麻蝇、巨尾阿丽蝇和亮绿蝇进行鉴定,铜绿蝇与丝光绿蝇进化距离较近,CO Ⅱ序列不能将他们区分开,同时还发现巨尾阿丽蝇和亮绿蝇存在种群单核苷酸多态性. 结论 mtDNA中COⅡ序列能有效鉴定郑州地区部分常见食尸性苍蝇的种类,方法 简便、准确.     

嗜尸性苍蝇mtDNA中COⅡ基因序列检测

目的利用线粒体DNA(m tDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ(COⅡ)中635bp基因序列,解决嗜尸性苍蝇及其卵和幼虫种类鉴定的难题。方法随机采集放置在呼和浩特地区室外草地家兔尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、苍蝇腹中的卵。利用Chelex方法提取上述苍蝇m tDNA;通过Perk in-E lm er 9600扩增仪进行PCR扩增;琼脂糖水平电泳和银染显色技术进行扩增结果检测;PCR胶回收试剂盒纯化;AB I 377测序仪测序;DNAMAN 4.0序列分析软件,进行序列比对,截取等长度片段;MEGA2.1软件包进行序列分析和构建系统发育树。结果上述嗜尸性苍蝇m tDNA上COⅡ基因序列在双翅目嗜尸性苍蝇的种内差异均数小于1%,种间差异均数大于3%,成虫与幼虫、卵无明显差异。以此能够根据COⅡ序列差异判断两个个体是否同种。然而,对于亲缘关系非常接近的铜绿蝇和丝光绿蝇来说,由于二者的种内、种间进化分歧均数非常接近,运用上述两个片段则很难区别。结论m tDNA上COⅡ序列分析能有效地对绝大多数嗜尸性苍蝇进行种类鉴定。该检测方法快速、简便和精确,能作为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类的依据。     

应用mtDNA COI基因序列鉴别常见嗜尸性蝇类种属

目的探讨mtDNA基因序列对常见嗜尸性蝇类的种属鉴别应用价值。方法收集不同区域2科4属6个种30个蝇类样本,提取样本线粒体DNA后扩增COI基因序列,以琼脂糖电泳检测扩增产物并测序,以DNAMAN6.0分析软件分别截取498bp序列,用MEGA5.2软件分别进行序列分析,然后构建系统发育树,比较各地区不同种属样本的序列差异。结果 6个种属的嗜尸性蝇类30个样本mtDNA的COI基因具有一定的序列差异,种内进化分歧均数在0.1%~1.6%之间,种间进化分歧均数在2.2%~11.2%之间,6个种属通过系统发育树均可明确区分。结论 COI基因序列分析和系统发育树对嗜尸性蝇类的种属检验具有重要帮助作用,可用于现场样本的准确、快速种属鉴定。     

尸源性昆虫的法医学研究进展

尸源性昆虫学是应用昆虫学知识解决有关法律问题的法医学分支学科,对死亡时间的推断。特别是腐败尸体的死后间隔时间的推断等方面具有无可比拟的优越性。本文根据国内外近期法医昆虫学方面的研究进展,阐述了尸源性昆虫的研究历史、种类和侵蚀过程,并总结了尸源性昆虫形态学及分子生物学的种属鉴定方法。及近几年来在推断死亡时间方面的具体应用。就尸源性昆虫在法医学领域内的应用及进展进行综述。     

常见嗜尸性昆虫mtDNA提取方法的比较

目的 比较十六烷基三甲基溴化铵(cetyl triethyl ammonium bromide,CTAB)法、十二烷基硫酸钠-醋酸钾(sodium dodecyl sulfate-potassium acetate,SDS-KAc)法和十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(sodium dodecyl sulfate-protei...     

根据绿蝇属昆虫推断死亡时间的法医学研究进展

尸源性昆虫在某些刑事案件的侦破中占有重要地位,对于推断死者的死亡时间和推断尸体是否有转移有重要的作用。双翅目中的丽蝇科绿蝇属昆虫是尸体上常见的昆虫之一,通常最先到达尸体,而且最喜阳光,该特点以及在尸体上发现的绿蝇属昆虫幼虫的生长发育阶段,可以为刑事案件的侦破提供十分有力的证据。本文主要从生物形态学和分子生物学对绿蝇的种属鉴定以及绿蝇日龄的推断等方面,综述了根据绿蝇属昆虫推断死亡时间的法医学应用研究进展。     

潍坊地区六种常见嗜尸性蝇类mtDNA COI区序列研究

目的解决蝇类成虫、蛹和蛆快速、准确鉴定的难题。方法随机采集潍坊地区人尸周围环境中的蝇类成虫、蛹和蛆,提取其mtDNA,经PCR扩增、产物检测与纯化、测序等,比较其序列差异。结果六种常见嗜尸性蝇类相互之间序列差异明显,同一种蝇的成虫、幼虫、蛹之间未见差异。结论mtDNACOI区序列分析可作为法医学嗜尸性蝇类种属鉴别的可靠方法。     

常见嗜尸性甲虫及蝇类虫体不同部位mtDNA的提取效果

目的探讨改良后十六烷基三甲基溴化铵(cetyltriethylammnonium bromide,CTAB)法对常见嗜尸性昆虫虫体不同部位mtDNA的提取效果。方法随机采集放置在呼和浩特地区室外草地家兔尸体上丽蝇科的丝光绿蝇[Lucilia sericata(Meigen)]、埋葬甲科的Nicrophorus fossor(Erichson)各13例,采用改良CTAB法分别提取每只昆虫头部、胸肌、腿部、翅膀4个部位的mtDNA,核酸蛋白测定仪检测DNA纯度及质量浓度,琼脂糖凝胶电泳检测其PCR产物,测定PCR产物序列,上传GenBank。结果 13例丝光绿蝇[Lu-cilia sericata(Meigen)]的胸肌均提取到了DNA,10例头部样本、6例腿部样本、4例翅膀样本得到DNA;13例Nicrophorus fossor(Erichson)胸肌DNA均提取成功,5例头部样本、8例腿部样本及3例翅膀样本提取出DNA。结论改良CTAB法可用于对嗜尸性昆虫胸肌及其他部位进行DNA的提取。     

NCBI数据库在常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用

目的探讨NCBI数据库比对分析对常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用价值。方法收集2009年1月至2012年12月重庆市常见嗜尸性蝇类不同发育历期2科5属7种样本52份,采用Chelexl00法提取mtDNA,利用2对引物扩增细胞色素C氧化酶辅酶I基因,分别截取498bp和841bp相同长度的序列,采用MEGA软件计算种内及种间进化分歧情况,并分别在NCBI数据库进行序列BLAST搜索种属同源性比对分析。结果所得序列种内进化分歧均数在0％～0．7％之间,种问进化分歧均数在7．5％～16．1％之间;7个种属的样本序列Ⅰ和序列Ⅱ分别有5个和6个种属完全比对正确,样本总体的正确率分别达到96．15％和98．08％,Maxident值均在97％以上。结论采用序列同源性比对分析,并借助NCBI数据库强大的检索分析功能,可准确进行常见嗜尸性蝇类的种属鉴定,为法医学死亡时间推断提供重要参考依据。     

新乡地区夏季常见嗜尸性昆虫群落演替规律初步研究

目的研究新乡地区夏季嗜尸性昆虫的种类及其群落演替规律。方法观察法研究新乡医学院动物房后偏僻草地上6只大白鼠和5只家兔尸体腐败过程中嗜尸性蝇类的主要物种及其群落演替规律。结果该地区主要出现嗜尸性蝇类为双翅目3科7种,包括家蝇、大头金蝇、丝光绿蝇、棕尾别麻蝇、黑尾黑麻蝇、厩腐蝇、元厕蝇,且呈现出演替规律性。结论研究结果可作为新乡地区对尸体死亡时间的推断依据。