寄生牛环形泰勒焦虫裂殖体的淋巴细胞冻存液的研究

牛环形泰勒焦虫裂殖体胶冻细胞苗,是我国血孢子虫免疫方面的第一个活虫苗,并已大面积应用于牛环形泰勒焦虫病流行区。我们于1977年试验成功了用液氮(-196℃)冻存含裂殖体牛淋巴细胞,为工厂化大量制苗提供了种子细胞,但种子细胞在液氮内冻存的过程中,也有程度不同的死亡,所以研究如何延长含裂殖体细胞苗的存活时间和提高种子细胞在掖氮中(-196℃)冻存后的存活率,是目前急待解决的问题。1985年我们曾用鱼鳞明胶和     

动物细胞的超低温长期保存效果观察

几年来我们应用-196℃的液氮超低温冻存技术,对牛睾丸、牛肾原代细胞,牛肾、猪睾丸、猪肾、狗肾、猫肾、地鼠肾、兔肾、非洲缘猴肾、小鼠纤维传代细胞等17种不同类型的细胞进行了长期冻存试验,并对其中8种细胞,进行了复苏培养观察,取得了满意的效果,细胞存活率达87％以上。     

液氮冻存弓形虫的试验观察

我们参照有关资料,探讨观察了长期保存弓形虫的方法,从1983～1986年将弓形虫速殖子用液氮(-196℃)冻存27个月(824天)之久,复苏后其活力和致病性均未改变。收到长期冻存的效果,改变了过去长期通过小鼠继代的繁琐程序,为科研工作提供了方便。 (一)材料和方法 1.虫种:为我们从甘肃省猪体分离出的弓形虫株(GJP株)。 2.冷冻保护剂:RPMI 1640溶液70％,小牛血清20％,3％谷氨酰胺溶液1％,二甲基亚砜(DMSO)10％。前三种溶液分别无菌过滤,临用前按比例混合,并加入二甲基亚砜溶液,用碳酸氢钠溶液调pH7.2。     

液氮冻疗肿瘤一例

我们于1984年应用液氮冻疗肿瘤1例,效果显著。 病例 1984年7月上旬,临夏县井沟乡一头黑骡,在其阴茎前部长一瘤体。肿瘤麦面光滑,顶部略红,直径约2厘米,高3厘米,基部1厘米,生长迅速。 冻疗方法 将患畜保定于六柱栏内,肌注静松灵5毫升,15分钟后开始冷冻瘤体。将长柄钳浸入盛有     

东方田鼠不同组织来源成纤维细胞的分离培养及比较

利用细胞体外培养技术,分别对东方田鼠胚胎、皮肤、肺、腹腔、肾及睾丸组织进行成纤维细胞的分离和传代培养,再与前期建立的两种东方田鼠永生化细胞系在传代次数、冻存复苏以及体外杀伤日本血吸虫童虫等相关生物学特性方面进行比较。结果显示,采用组织块贴壁法或胰蛋白酶消化法,可在体外进行东方田鼠不同组织来源成纤维细胞的培养、传代和冻存,光镜下细胞均贴壁生长,呈长梭形,为典型的成纤维样细胞;不同组织来源的成纤维细胞在最佳分离培养日龄、原代细胞贴壁时间、细胞纯度、传代次数及冻存后细胞活率等方面存在明显差异;与对照组相比,所有东方田鼠成纤维细胞培养上清均没有显著的体外杀伤日本血吸虫童虫的活性。结果表明,东方田鼠不同组织成纤维细胞的体外培养方法及生物学特性不同。     

卡氏住白细胞虫子孢子冻存方法及感染力试验

用匀浆和离心的方法从阳性荒川库蠓体内分离出卡氏住白细胞虫子孢子 ,以直接冻存和间接冻存 2种方法分别对该子孢子进行保存 ;再分别以 3种剂量将不同方法冻存的子孢子和新鲜的子孢子分别给 3 2日龄的健康鸡接种。结果表明 ,经间接冻存的子孢子和新鲜的子孢子对鸡均具有感染力 ,而直接冻存的子孢子无感染力。     

日本血吸虫童虫冷冻保藏方法的改进

研究日本血吸虫童虫保藏技术的目的是为了使经冷冻的童虫直接应用于免疫预防、免疫诊断、药物治疗的感染动物模型及虫种保存。自从James(1981)首先提出冷冻保存曼氏血吸虫以来,Stirewalt等(1984)、许绶泰等(1989,1990)相继进行冷冻保存血吸虫方法的研究。本文是在上述工作的基础上,对许绶泰等的冷冻保存童虫技术进行改进,以找出可以实际应用的方法。 (一)材料和方法 冷冻用日本血吸虫尾蚴由本所钉螺室提供,所用钉螺系湖北钉螺,血吸虫为日本血吸虫中国大陆株安徽贵池品系。冻存剂采用     

双峰驼精液的冷冻及输精效果

有关双峰驼精液的冷冻技术及输精试验,宁夏于1986年曾有报道,受胎率为76.1％,产羔率为61.96％。我们于1981年所进行的鲜精授精结果不佳,受胎率仅为31％。单峰驼及南美驼精液的冻精及人工授精在主要的繁殖杂志中尚未见报道。精液冷冻技术在国际上已广泛用于牛。冻精不但能长途运输,扩大优良公畜精液的利用率,而且还能延长优良公畜的利用年限。这一技术将成为各地甚至国     

抗弓形虫单克隆抗体试剂的研究——分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究选用了弓形虫QHO株活虫抗原免疫BALB/C小鼠,摘取脾细胞与SP_2/O骨髓瘤细胞融合,获得了分泌抗弓形虫McAb杂交瘤细胞株(2A_(11),3C_2)。其细胞分泌抗体效价为1:64(IHA),诱生腹水效价为1:1024和1:16384,经3个月连续培养和2次液氮冻存复苏培养,细胞生长良好,持续稳定分泌抗体效价不变,用诱生腹水经(NH_4)_2SO_4盐析、DEAE-Sephadex-A50层析和PEG浓缩,所得McAb致敏5％鞣酸化绵羊红细胞,与弓形虫可溶性抗原显示良好凝集效果,证明McAb与弓形虫可溶性抗原反应特异、敏感,并在血凝诊断试剂上具有应用价值。     

用肝卵冰冻切片酶染色法诊断耕牛日本血吸虫病

肝卵冰冻切片酶染色法诊断血吸虫病,在人医方面已见报道,在诊断耕牛日本血吸虫病方面尚未见报道。我们在石蜡切片酶染色法的基础上,改用冰冻切片技术,并摸索出较为理想的底物溶液,使整个实验时间大为缩短,现简介如下。(一)材料与方法1.抗原制备:给健康家兔感染1500条日本血吸虫尾蚴,45天后剖杀,迅速取出肝脏,切成1cm~3的块状,10分钟内移入液氮罐中,贮藏备用。用新鲜的兔肝或液氮罐内取出的兔肝做冷冻切     

分泌抗弓形虫GJS株、NT株和RH株McAb杂交瘤细胞株的建立

自Khlor和Milstein 1975年创立淋巴细胞杂交瘤技术后,使在体外产生抗弓形虫特异性McAc及在此基础上分离、提取抗弓形虫保护性抗原和研制弓形虫基因工程苗成为可能,据此我们将SP2/0小鼠骨髓瘤细胞分别与刚地弓形虫GJS珠、NT株和RH株可溶性抗原免疫BALB/C小鼠的脾细胞融合,经IHA检测和克隆化后,获得了4株杂交瘤细胞。该4株杂交瘤细胞所分泌的McAb经鉴定均属IeG_1亚类,4株杂交瘤细胞经连续60代传递和5～23个月冻存复苏     

冷冻蚀刻技术简介

冷冻蚀刻(Freeze Etching)也称冷冻复型(Freeze Replica)技术,是制作透射式电子显微镜生物样品的一项较新的技术方法。于1961年由Moore首先提出,1963年由Moore和M(?)hele thala首次应用。该项技术发展较为缓慢,对于“断裂面”的解释开始时,也不尽一致。近些年     

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其鉴定

将沙丁胺醇 (salbutamol)琥珀酰化后 ,应用混合酸酐法与牛血清白蛋白偶联 ,免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术获得了 1株能稳定分泌抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该单抗为IgG1亚类。经间接ELISA方法测定 ,其细胞上清抗体效价为 1∶3 .2× 10 6,腹水抗体效价为 1∶6.4× 10 8。该抗体与克仑特罗交叉反应率为 5 0 .0 0 % ,与莱克多巴胺交叉反应率为 0 .3 0 %。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。     

减压分馏提纯囊液抗原

为了提高囊虫病猪的诊断符合率和降低错诊率,曾采用硫酸铵盐析法、葡聚糖凝胶过滤法、电泳分离法和液氮冷冻法提纯囊液抗原,但在炭凝诊断上均未取得满意效果。而减压分馏法(真空分馏法)提纯的囊液抗原,其炭凝反应的敏感性、特异性都有显著提高。     

脑多头蚴细胞系细胞超低温冻存与复苏试验

脑多头蚴细胞系细胞超低温冻存与复苏试验谭蓉芳郭中敏玛丽亚木谭立新努苏甫·艾力王光雷郭固（新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐８３００００）脑多头蚴病对新疆养羊业危害很大，每年因该病死亡羊十万余只。我所于１９９３年成功地培育出脑多头蚴细胞系（２６Ｎ），对其...     

传代细胞IB-RS-2的保存试验

IB-RS-2细胞引进我国后,由于其能适应多种病毒的生长,故应用广泛。该细胞分种后,在37℃培养10天左右即脱落。在生产及研究中,经常遇到暂不用细胞的情况,但为了维持细胞种子,最长不超过7、8天就要传代一次。这不但浪费人力物力,而且也增加了其它微生物污染的机会。几年来经我们实际培养发现,随代数增加,细胞形态逐渐变化。为了避免或减缓上述弊病,我们对此细胞在28℃、4℃及液氮中的保存进行了试验。     

鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备

采用差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯鸭肠炎病毒 (DEV)鸭胚成纤维细胞适应毒 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经间接ELISA筛选 ,有限稀释法 3次克隆 ,获得了 2株稳定分泌DEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1B6和 2G8。经鉴定 ,2株单克隆抗体分别为IgM和IgG1 亚类 ,腹水ELISA效价均达到 1∶1 0 7以上。以 2G8单抗腹水为材料 ,采用间接免疫荧光抗体技术对DEV标准毒感染的鸭胚成纤维细胞进行检测 ,结果表明 ,用该抗体可特异性检出接毒后 6h感染细胞中的DEV ,且感染后 4 8h免疫荧光强度最高 ,该单抗与细胞成分和鸭肝炎病毒无交叉反应。将杂交瘤细胞冻存 3和 6个月 ,复苏后仍能稳定分泌单克隆抗体     

超低温保存对姜曲海公猪精子超微结构损伤的研究

猪精子对低温尤为敏感,极易遭受低温损伤。本文旨在探讨冷冻前后猪精子超微结构变化,为改善猪精子冷冻保存方法奠定基础。通过手握法采集姜曲海公猪精液,使用0.25 m L细管对精液进行超低温冷冻保存,用扫描电镜和透射电镜对冷冻前后精子超微结构进行观察。结果显示,冻后姜曲海猪精子活力、质膜完整率、线粒体活性和顶体完整率(分别为38.6%、40.5%、42.7%和43.6%)均显著(P0.05)低于新鲜精子(分别为81.9%、85.7%、89.5%和90.2%)。姜曲海猪精子全长约54.4 m,由头、颈、体和尾4部分组成;冻后正常的精子,表现为质膜、顶体和线粒体结构完整,顶体光滑,线粒体排列整齐,核染色质均匀;冻后异常精子主要表现为颈部断裂或膨胀,顶体表面粗糙或缺失,质膜膨胀或缺失,或线粒体移位。上述研究结果表明,超低温保存对姜曲海猪精子超微结构造成的损伤主要集中于质膜、顶体和线粒体。     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂支瘤细胞（３Ａ＿６、３Ｂ＿８、３Ｄ＿５）。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ＿１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立——体外免疫法制备免疫脾细胞

作者用纯化弓形虫速殖子可溶性抗原体外免疫BALB/C小鼠的正常脾细胞与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ABC—ELISA和IHA筛选和3次克隆化培养后获得了1株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞(E5)。E5杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经琼脂双扩散免疫试验确定为IgGl亚类抗体。单克隆抗体的抗原吸收试验结果证明E5单克隆抗体为抗弓形虫特异性抗体。E5杂交瘤细胞的染色体数目为92～108,经连续30代传递培养和4个月冻存复苏试验证明其分泌特异性单克隆抗体的性能相当稳定。初步证实E5单克隆抗体针对一种弓形虫的共同抗原成份。