PTD-FNK蛋白对水牛精子的冷冻保护作用

PTD-FNK蛋白可以穿透细胞膜进入细胞内发挥抗凋亡作用,抵抗各种不利因素造成的细胞死亡,但国内未见将其加入水牛精液稀释液抑制精子冷冻凋亡的报道。本试验中,在水牛精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、0.1、1、10、100 nmol/L)的PTD-FNK蛋白,冻后检测精子常规质量指标的同时检测精子凋亡相关基因(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因)mRNA表达和Caspase-3蛋白酶的活性;最后以最优PTD-FNK蛋白浓度批量生产冷冻精液,选择50头广西地方母水牛进行人工授精试验。结果显示:①1 nmol/L组精子质膜完整性和10 nmol/L组精子活力显著高于对照组(P<0.05),1 nmol/L组精子活力和1、10 nmol/L组精子活率极显著高于对照组(P<0.01),而100 nmol/L组精子活率却极显著低于对照组(P<0.01);②1 nmol/L PTD-FNK蛋白显著降低冻后精子Caspase-3 mRNA表达(P<0.05);③人工授精后第60天受胎率达60%,略高于其他研究者取得的受胎率(56.25%,P>0.05)。总之,PTD-FNK蛋白可以显著提高水牛精子冻后质量,其机制之一可能是它显著抑制了冻后精子Caspase-3 mRNA的表达;以PTD-FNK蛋白冷冻的水牛精液实施人工授精后可以取得比现有水平更高的受胎率。     

咖啡因对体外保存精子品质和受精力的影响

在概述咖啡因的来源、结构、饮用价值的基础上,简述了关于咖啡因对稀释的非冷冻保存精液和冷冻保存精液中精子活率和受精力影响的研究状况,认为无论在体外非冷冻保存的精液中还是在冷冻保存的精液中添加适量的咖啡因,均有助于提高精子活率、精子体外保存时间、情期受胎率和体外受精力。最后指出,研究人员应继续优化筛选咖啡因在制作冻精时的适宜添加剂量和添加时机。     

黄芪多糖对冷冻前后猪精液中过氧化氢酶活性及其mRNA表达的影响

为了研究黄芪多糖对猪精液冷冻前后过氧化氢酶(CAT)活性及其mRNA表达的影响,用含不同质量浓度(0、0.2、0.4、0.6g/L)黄芪多糖的稀释液稀释美系长白公猪精液,用0.5mL细管分装冷冻,分别检测平衡后及冻融后精液中CAT活性和mRNA表达量的变化。结果显示,0.4g/L黄芪多糖能显著提高冷冻保存的猪精液中CAT活性及平衡后CAT mRNA表达(P0.05),同时冻融后CAT mRNA表达在冷冻组中最高(P0.05)。结果表明,冷冻前后猪精液中CAT活性及平衡后CAT mRNA表达的显著提高是黄芪多糖改善猪精液冻后质量的主要原因之一。     

黑白花公牛精子的免疫原性和精子抗体

本试验对牛精子的免疫原性及相应抗体的特异性等方面作了测试。(一)材料和方法1.供试动物及试剂:①选择大小相近的成年健康雄性家兔6只,补给少量玉米粉进行常规饲养。②黑白花牛精液由成都冻精中心提供,每粒冻精(0.1ml)含精子数为4500万,活力0.4。③冻精稀释液配方为每100ml溶液含柠檬酸钠1.4g,葡萄糖3.0g.     

高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪冻精质量的影响

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、抗氧化指标及DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,经HPH处理能有效提高猪精子冻后质量。精液解冻后精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率分别为84.32%、86.71%、68.92%、59.09%,较对照组分别提高了13.7%、16.58%、6.5%、4.88%(P0.05)。与对照组相比,试验组的MDA和ROS较对照组均有所上升(P0.05),SOD较对照组有所下降(P0.05)。但冻后精子NO和NOS含量显著降低(P0.05)。试验组的精子解冻后DNA片段完整性较对照组明显提高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结果表明,HPH处理鸡蛋卵黄能有效提高猪精液冷冻后质量。     

超低温保存对姜曲海公猪精子超微结构损伤的研究

猪精子对低温尤为敏感,极易遭受低温损伤。本文旨在探讨冷冻前后猪精子超微结构变化,为改善猪精子冷冻保存方法奠定基础。通过手握法采集姜曲海公猪精液,使用0.25 m L细管对精液进行超低温冷冻保存,用扫描电镜和透射电镜对冷冻前后精子超微结构进行观察。结果显示,冻后姜曲海猪精子活力、质膜完整率、线粒体活性和顶体完整率(分别为38.6%、40.5%、42.7%和43.6%)均显著(P0.05)低于新鲜精子(分别为81.9%、85.7%、89.5%和90.2%)。姜曲海猪精子全长约54.4 m,由头、颈、体和尾4部分组成;冻后正常的精子,表现为质膜、顶体和线粒体结构完整,顶体光滑,线粒体排列整齐,核染色质均匀;冻后异常精子主要表现为颈部断裂或膨胀,顶体表面粗糙或缺失,质膜膨胀或缺失,或线粒体移位。上述研究结果表明,超低温保存对姜曲海猪精子超微结构造成的损伤主要集中于质膜、顶体和线粒体。     

牛脊柱畸形综合征HRM-非标记探针检测方法的建立与应用

为建立用于牛脊柱畸形综合征(CVM)检测的高分辨率熔解曲线(HRM)非标记探针法,根据Gen Bank中SLC35A3基因序列设计PCR引物及非标记性探针,构建G/G型、G/T型、T/T型3种标准质粒,利用质粒作为标准品建立HRM特征图谱。采用优化的HRM-非标记探针法对305份荷斯坦奶牛血样及冷冻精液样品中SLC35A3位点的基因型进行检测,同时采用测序法进行验证。结果,305份样本中9份冻精样本为CVM携带者,携带率为2.95%,检测结果与测序法检测结果一致,准确率达100%。上述研究结果表明,本研究建立的针对牛CVM中SLC35A3基因G-T位点突变检测的HRM-非标记探针方法是一种简单快速、灵敏特异、高效准确的牛CVM有害基因分型检测技术。     

浅谈牛毛滴虫病

牛毛滴虫病(Bovinetrichomoniasis)是通过牛性行为传播的一种疾病,可造成牛的不育、早期胚胎死亡、子宫积脓和明显延长产犊间隔。自Kunstle(1888)和Mazzanti(1890)报道牛毛滴虫病以来,到本世纪中叶已有近30个畜牧业发达国家先后发生了牛毛滴虫病(Skirrow,1988)。近几十年来虽然广泛推广应用人工授精技术,但由于感染公牛无任何临床症状,毛滴虫又能存活于新鲜和冷冻精液并经由输精器具传播,故牛毛滴虫病的发病率仍较高。其中澳大利亚北部的某些牛群达40％,美国南部某大型牛场达10％,东欧和苏联等地区的大型集约化牛场的发病率也较高(Williams等,1987)。感染牛群由于产犊率降低、泌乳量下降,造成巨大的经济损失。     

液氮冻疗肿瘤一例

我们于1984年应用液氮冻疗肿瘤1例,效果显著。 病例 1984年7月上旬,临夏县井沟乡一头黑骡,在其阴茎前部长一瘤体。肿瘤麦面光滑,顶部略红,直径约2厘米,高3厘米,基部1厘米,生长迅速。 冻疗方法 将患畜保定于六柱栏内,肌注静松灵5毫升,15分钟后开始冷冻瘤体。将长柄钳浸入盛有     

野血牦犏牛对牛流行热和肝片吸虫病的抗病性能调查

野血牦犏牛对牛流行热和肝片吸虫病的抗病性能调查张友慈李保义石佰平赵建平（甘肃省天水市秦城区畜牧兽医站７４１０００）野血牦犏牛系我区引进的野牦牛冷冻精液授配当地母黄牛的杂交后代，分散饲养于关子、铁炉和杨家寺等乡的部分试验区及示范村中。１９９４～１９９６...     

用电阻测量法确定家畜适宜授精时间

据苏联“饲养业”杂志1970年2,16期报导,应用电阻对母畜阴道前庭粘膜反应的强度确定输精时间,可以有效地提高家畜受胎率和繁殖力,变二次授精为一次授精,从而减少精液消耗,节省劳动力和时间。这种方法简单易行,能够在畜牧业中广泛应用。     

液氮冻存弓形虫的试验观察

我们参照有关资料,探讨观察了长期保存弓形虫的方法,从1983～1986年将弓形虫速殖子用液氮(-196℃)冻存27个月(824天)之久,复苏后其活力和致病性均未改变。收到长期冻存的效果,改变了过去长期通过小鼠继代的繁琐程序,为科研工作提供了方便。 (一)材料和方法 1.虫种:为我们从甘肃省猪体分离出的弓形虫株(GJP株)。 2.冷冻保护剂:RPMI 1640溶液70％,小牛血清20％,3％谷氨酰胺溶液1％,二甲基亚砜(DMSO)10％。前三种溶液分别无菌过滤,临用前按比例混合,并加入二甲基亚砜溶液,用碳酸氢钠溶液调pH7.2。     

硒和维生素E对奶牛胎衣滞留乳腺炎及受胎率的影响

硒与维生素E有保护细胞膜的作用,因此能影响免疫系统机能和子宫肌、乳管口括约肌的生理功能。硒和维生素E缺乏,会导致奶牛胎衣滞留,乳腺炎发病率上升,受胎率下降。Smith报道奶牛在分娩前30天血硒下降到最低点,维生素E也同时下降。国内外一些学者报道奶牛在分娩前补充硒、维生素E能降低胎衣滞留、乳腺炎发病率,提高受胎率。 (一)材料和方法     

细胞冻存时缓慢降温的简易方法

细胞冻存的妥当与否,会直接影响所冻存的细胞的活力,甚至关系到能否将细胞保留下来的问题。当前一般采用液氮冻存细胞,其基本原则是慢冻速融,特别是从0～-20℃间冷冻速度要缓慢,要控制好。我们国内目前还没有生产诸如CRY-MED型那种程序控制的冷冻器,一般采用经验的方法:冻存细胞的安瓿先放入冰箱,再放低温冰箱,再经液氮罐口氮气熏蒸,逐步下降至液氮内。此法虽然可用,只是操作烦琐,不易掌握好。在此,我们介绍一种简易而有效的缓慢降温的方法,便于细胞冻存。(一)方法与结果     

日本血吸虫童虫冷冻保藏方法的改进

研究日本血吸虫童虫保藏技术的目的是为了使经冷冻的童虫直接应用于免疫预防、免疫诊断、药物治疗的感染动物模型及虫种保存。自从James(1981)首先提出冷冻保存曼氏血吸虫以来,Stirewalt等(1984)、许绶泰等(1989,1990)相继进行冷冻保存血吸虫方法的研究。本文是在上述工作的基础上,对许绶泰等的冷冻保存童虫技术进行改进,以找出可以实际应用的方法。 (一)材料和方法 冷冻用日本血吸虫尾蚴由本所钉螺室提供,所用钉螺系湖北钉螺,血吸虫为日本血吸虫中国大陆株安徽贵池品系。冻存剂采用     

高压均质(HPH)大豆卵磷脂替代卵黄在猪精液冷冻保存效果的研究

为探究大豆卵磷脂高压均质(HPH)处理对猪精液冷冻保存的影响,用6个浓度的经高压均质处理的大豆卵磷脂(A1:1%;A2:2%;A3:4%;A4:5%;A5:6%;A6:8%)替代Tris-柠檬酸-葡萄糖基础稀释液(B组)中的卵黄(20%)进行猪精液冷冻保存试验。冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性进行质量检测,同时利用各种试剂盒对解冻后精子的抗氧化指标、DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,当高压均质大豆卵磷脂浓度为5%时,精子活力、活率、质膜完整率和顶体完整率最高,分别为67.15%、62.54%、55.21%和52.96%(P0.05);冻后精子线粒体完整率和DNA完整率最高,为68.61%和64.39%(P0.05);凋亡率最低,为23.31%(P0.05);活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)最低,分别为337.59 U/m L和2.01 nmol/L(P0.05)。当添加6%的大豆卵磷脂时超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平最高,分别为74.65 U/m L和246.92 U/L(P0.05)。结果表明,利用5%高压均质大豆卵磷脂替代鸡蛋卵黄对猪精液冷冻保存具有良好的效果,能提高精子冻后质量、功能完整性和抗氧化性。     

牦牛IBR病毒的分离与鉴定

牛传染性鼻气管炎(IBR)是牛的急性发热性呼吸道接触传染病。1956年首次在美国分离到本病病原——牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),后来分类为牛疱疹病毒1型,此病广泛分布于世界各国。1980年4月我国第一次从新西兰进口奶牛体内分离到IBR病毒,以后又陆续从进口的奶牛、黄牛、水牛以及种公牛的冷冻精液中分离到该病毒。封启民等人对我国部分省区进行的血清学普查结果表明:广东、广西、河南、河北、新疆、山东及四川等地的黑白     

浅析MC-I注射液药骟公畜359例

公畜药物去势术是最近十多年发展起来的一种无血去势术,它通过把某些化学去势液注入睾丸、副睾或精索,使睾丸坏死、萎缩,失去产生精子、睾丸酮及雄性激素的能力,致公畜不育,达到去势的目的。国内外先后有用高锰酸钾、氯化钙、碘酊、普鲁卡因、酸类制剂等进行药骟的报道,具有一定效果。我们应用中国农业科学院中兽医研究所研制的MC-I注射液(兽用消睾液)药骟各种公畜359例,现将结果报告如下。(一)药品和用法1.药品:MC-I注射液,20ml安瓿装,由中国农业科学院中兽医研究所提供。2.注射方法:牛行站立保定,使阴囊充分暴     

关于牛精液中病毒的检查

牛精液中的病毒,可使母牛发病,影响精液的质量和公牛或母牛的繁殖能力以及胎儿的发育。从牛精液中分离的病毒,有口蹄疫、蓝舌病、牛白血病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻、流行热和多瘤皮肤病等的病毒。还分离出肠道病毒、副牛痘病毒(副痘苗病毒),以及若干个尚未确定的病毒。精液中这些病毒是依据各种动物接种试验和细胞培养法来确定的。保持病毒感染性的理想条件是冷冻精液,它的广泛应用成为将病毒传播给未感染牛群和地区的重要媒介物。这就使精液的国际交往受到限制。为了提高认识和研究观实的预防方法及改进精液中病毒的检查方法,就其有关问题介绍如下。     

氦氖激光照射阴蒂治疗马类家畜卵巢机能障碍的研究

卵巢机能障碍是多种卵巢疾病总称,它是导致母畜不孕症的重要原因。为了探讨一种经济、简便、无副作用,同时又适应于治疗多种卵巢疾病的疗法,从1980年起我们在国内首次用小功率氦氖激光照射阴蒂对马类家畜卵巢机能障碍的疗效进行试验研究。试验结果表明,用于治疗发情反常的某些卵巢机能障碍性疾病(多卵泡发育及卵泡发育停滞),平均照射8.1次可促进卵泡发育成熟并排卵,第一情期受胎率为63％;用于治疗不发情的某些卵巢机能障碍性疾病(卵巢静止),平均照射7.8次可活化卵巢功能,恢复其卵泡生成、发育成热并排卵,第一情期受胎率为56％。由此可见,本研究发现的阴蒂穴是激光治疗某些卵巢机能障碍性疾病比较理想的一个穴位,照射次数以7～8次(每次15分钟)为宜。为了进一步验证这