金黄色葡萄球菌Fc段受体结合蛋白A基因的克隆与原核表达

为研制葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)的相关免疫试剂盒,设计了1对引物,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出了876bp的细胞壁结合蛋白SPA基因,该基因编码292个氨基酸,包含了E、D、A、B、C 5个IgG结合结构域。构建了原核表达载体pET28a(+)-SPA,经IPTG诱导,表达出分子质量约35.0ku的SPA蛋白,并应用亲和层析柱纯化了SPA蛋白,Western-blot分析表明纯化的SPA蛋白具有生物学活性。     

葡萄球菌A蛋白对马属动物血清抗体亲和力的研究

葡萄球菌A蛋白(简称SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种主要抗原成分,它能与人和多种哺乳动物血清IgG分子Fc段非特异性结合,而被结合的IgG本身并不丧失抗体活性,因而可作为一种抗IgG的广谱免疫学试剂。但一般认为马IgG不能同SPA反应。驴血清抗体能否与SPA起反应,尚未见有报道。我们采用酶联SPA的ELISA直接法和间接法测定了SPA对健康马、驴血清抗体和马传贫阳性马、驴血清抗体的亲和力。     

毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液免疫功能的变化

将180只14日龄雏鸡随机分为毒害艾美球虫(Eimeria necatrix)初次感染组、二次感染组和对照组,应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对相关免疫学指标进行了检测,以研究毒害艾美球虫二次感染对雏鸡外周血液免疫功能变化的影响。结果显示,毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液T、B淋巴细胞数量及其对ConA或PMA的增殖反应和血清IgG、IgM、IgA免疫球蛋白含量均不同程度地高于未感染毒害艾美球虫的对照组雏鸡。证实毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。     

SPA协同凝集试验快速检测禽霍乱患禽组织中特异性抗原的研究

为了使禽霍乱的诊断方法简便、快速、准确、便于在广大基层兽医单位推广使用,近年来一些学者根据金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白(简称SPA)能和人及某些哺乳动物IgG的Fc段发生非特异性结合,有抗体活性的Fab段暴露于SPA表面,当有特异性抗原存在时,则可发生协同凝集反应的原理,已用于多杀性巴氏杆菌的分型和菌体抗原的检测。如Rimler,(1978)对引起牛出血性败血症的多杀性巴氏杆菌的两个血清型进行了鉴定,并指示协同凝集反应能检测出多杀性巴氏杆菌实验感染小白鼠的肝脏提取物及血浆中的可溶性抗原,     

一种新的IgG结合物——链球菌蛋白G

链球菌蛋白G是A、C、G群链球菌的细胞壁内存在的一种表面蛋白。它具有与哺乳动物IgG结合的能力,由于G群链球菌的这种蛋白与IgG的结合能力最强,因此得名蛋白G。虽然早在1973年Kron-avall用致敏绵羊红细胞检测A、C、G群链球菌与γ球蛋白反应时就发现有26％的菌株能与γ球蛋白反应,但真正系统广泛地研究蛋白G的理化特性及实际应用,还是80年代的事情。现在已基本肯定蛋白G比葡萄球菌A蛋白(SPA)对IgG的结合更为优越,是一种新的更有效的IgG结合物,在免疫学研究方面将有可能取代SPA。     

应用IgG-SPA菌免疫法制备兔抗豚鼠IgG血清

第二抗体是免疫学研究及临床检验工作中经常应用的重要试剂之一,但目前制备第二抗体,仍多用常规的佐剂免疫法进行,既复杂又费时费力。笔者依据金黄色葡萄球菌细胞壁上的A蛋白,能与豚鼠IgG的Fc段结合的特性,将含A蛋白的葡萄球菌(SPA菌)与豚鼠全血清作用,制成IgG-SPA菌液,作为免疫原,给兔静脉注射,制备兔抗豚鼠的IgG血清,获得了较满意的结果。 (一)材料 1.菌种:含A蛋白金黄色葡萄球菌Cowan I,菌种编号26111,购自卫生部药品生物制品检定所。     

应用SPA—扫描免疫电镜技术诊断鸡传染性法氏囊病

目前,免疫电镜技术已广泛用于病毒检测、病毒分型和临床诊断。为了克服免疫电镜技术存在前带效应的影响。Katz等(1980)应用金黄色葡萄球菌作为固相,成功地建立了一种固相免疫电镜技术。此法具有简便、快速、敏感等特点。我们应用此法诊断鸡传染性法氏囊病(IBL),收到了较好的效果。 (一)材料与方法 1.金黄色葡萄球菌Cowan I株:购自中国兽药监察所,固体培养基培养。在制备葡萄球菌A蛋白(SPA)菌体稳定液前,间隔12小时传1代,连传12代。     

禽巴氏杆菌免疫鸡IgG、IgM消长规律的研究

本试验利用鸡血清中主要有IgG、IgM(IgA主要在粘膜),和2-基巯乙醇可破坏IgM的理论,以间接血凝法检测禽霍乱731、GNCoⅡ弱毒苗免疫鸡和C_(48-1)强毒接种后发病治愈鸡(即模拟禽霍乱强毒感染鸡)的IgG、IgM消长规律。结果抗体中主要有IgM;当强毒攻击后,三个组均无回忆反应的迹象,其抗体中仍是IgM占优势。对731、GNCo Ⅱ和C(48-1)的荚膜粗提物中多糖与蛋白成分的分析表明,多糖是蛋白的15.35倍以上。荚膜在菌体外层,与机体紧密接触,又为TI抗原,易刺激机体产生IgM,因此产生IgM占优势是巴氏杆菌本身结构块定的。然而如将荚膜抗原与某蛋白载体结合后转变成TD抗原,即可诱导机体产生IgG和回忆反应,这样免疫期可望能延长。目前研制的多种禽霍乱弱毒苗免疫期较短,本试验人工模拟强毒感染康复鸡的免疫期亦较短,从试验结果看出,由于禽霍乱菌免疫主要产生IgM,很少产生IgG,而IgM比IgG消失快的特点及无回忆反应的特点,初步认为是禽霍乱菌免疫期短的原因。     

一种新型广谱的生物制剂——Ⅲ型细菌性IgG Fc段受体

Ⅲ型细菌性IgG Fc段受体(TypeⅢ bacterialFc receptorof IgG,简称FcR)是存在于链球菌C群和G群某些菌株细胞壁上能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段发生非特异结合的一种蛋白成分。目前已报道的能与人和不同动物IgGFc段发生反应的细菌性受体,除众所周知的葡萄球菌A蛋白(SPA)外,在链球菌属已发现四种类型的Fc受体。一般将SPA称为Ⅰ型FcR,它来自富含A蛋白的金黄色葡萄球菌,国际上以Cow-anⅠ株作为标准菌株;Ⅱ型FcR来源于链球菌属A群的某些菌株;Ⅲ型FcR见于C、G群链球菌的某些菌株;Ⅳ型FcR存在于G群链球菌;V型FcR存在于兽疫链球菌中。最近,Chhotwal等     

猪血清IgG提取方法的比较

目前在兽医研究工作和诊断中,对纯化免疫球蛋白Ig的质量提出了更高的要求,因此寻求一种操作简单、高效、实用的Ig提纯方法是很有必要的。为此,我们用葡萄球菌A蛋白(SPA)菌体法,饱和硫酸铵盐析法、DEAE——纤维素柱层析法纯化猪血清IgG,并加以比较,结果报告如下,供同行借鉴。 (一)材料与方法 1 饱和硫酸铵盐析法:盐析法是根据蛋白质在纯水和各种盐类溶液中的相对溶解度不同而进行的。当介质中盐份增加时,就会影响水分子与蛋白质分子极化部分的相互作用而减     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用SP2／0骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原（SPA）免疫的Balb／c鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得8株分泌抗SPA的杂交瘤细胞株，即3A_4、1IC_2B_3、2C_2、2E_3、3E_6、3F_(10)和3C_2。亚类鉴定为IgG_1（3A_4、3E_6、1C_2、3F_(10)和3C_2）、IgG_2b（2C_2)、IgG_3(2E_3）、IgG总（2B_3）。免疫双扩散法显示2C_2腹水及2B_3、2C_2、2E_3培养上清粗提物与SPA有反应，与细粒棘球蚴囊液（SHF）抗原及细颈囊尾蚴抗原（CtAg）无反应，以WesternBlot证实3A_4、2C_2、3C_2在SPA50KDa处有强反应带，但对SHP和CtAg亦有微弱反应。依赖于补体的杀伤试验及ADCC实验，提示这些单抗在寻求保护性抗原方面具有一定研究价值。     

日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶基因的表达及其免疫保护试验

为研究日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶(SjPP)的免疫功能,构建了原核表达重组质粒pET28a( )-SjPP,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)进行诱导表达,并用重组蛋白进行了小鼠免疫保护试验,免疫剂量为每次20μg/只,共免疫3次。结果表明,pET28a( )-SjPP/BL21(DE3)在0.1 mmol/L IPTG诱导2 h时,每1 g菌体可产生17.8 mg以包涵体形式存在的重组蛋白;重组蛋白免疫小鼠后诱导产生了高效价的血清特异性IgG抗体,并获得了部分减虫率、肝组织减卵率和显著的粪便减卵率,具有一定的免疫保护作用。     

口服牦牛血清IgG对小鼠免疫功能的影响

用环磷酰胺 (Cy)制造小鼠免疫功能抑制模型 ,以口服扶正女贞素片的小鼠为阳性对照组 ,试验组小鼠连续口服牦牛血清IgG ,10d后测定小鼠免疫水平的变化。结果 ,口服牦牛血清IgG的小鼠 ,抗Cy引起的免疫器官萎缩效果极显著(P <0 .0 1) ,抗Cy引起的小鼠血清IgG含量降低 (P <0 .0 5 ) ,能提高小鼠血清IgG水平 (P <0 .0 5 ) ;牦牛血清IgG对小鼠急性毒性试验属无毒级。证明口服牦牛血清IgG能显著提高小鼠的免疫功能。     

酶联葡萄球菌A蛋白检测马传贫抗体的研究

鉴于SPA能与人和多种哺乳动物IgG分子Fc段相结合,故可用一种酶标记物来检测不同种属动物血清中的各种抗体,而无需制备各自相应的标记物,因此酶联SPA的应用有利于ELISA技术的推广应用。目前,国内外尚未见将酶联SPA应用于马传贫抗体检测的报道。我们先通过试验确证了酶联SPA与单独的马、驴血清抗体不能结合,但是它可以与结合了马传贫病毒抗原的抗体发生反应,这就为用酶联SPA检测马传贫抗体的研究提供了理论依据。藉此,试图用酶联SPA代替常规ELISA中的第二抗体,建立检测马、驴血清中马传贫病毒抗体的SPA-ELISA间接法。此研究对建立一种简便、快速、特异、敏感性高,通用于马属动物的马传贫诊断方法具有一定的实用价值。     

ELISA、BA-ELISA和IHA检测抗K88ac抗体的研究

本文报告了用自制IgG型兔抗猪IgG、IgA、IgM型抗体,建立ELISA和BA-ELISA方法检测乳汁和血清中IgG、IgA和IgM型抗K_(88)ac抗体,并和IHA检测抗K_(88)ac抗体的方法进行比较,结果表明:BA-ELISA和ELISA方法不仅灵敏度高、重复性好,而且可区分IgG、IgA、IgM型抗K_(88)ac抗体,可作为评价大肠杆菌苗免疫效果和研究大肠杆菌苗免疫机理的手段之一。     

ABC-Dot-ELISA检测家兔抗华支睾吸虫IgG

免疫酶斑点试验(Do t-ELISA)检测抗体,具有敏感、简便等优点,因此,近年来被用于检测多种寄生虫抗原和抗寄生虫抗体。笔者利用亲和素-生物素(Avidin-Biotin)的生物放大作用,将Avidin Biotin-HRP Complex(ABC)与Dot-ELISA结合,建立了ABC-Dot-ELISA,用于检测人工感染华支睾吸虫家兔血清中的特异性IgG,同时做ABC-RLISA进行比较。(一)材料和方法1.抗原制备:按常规方法进行,蛋白质含量为5 mg/ml。2.生物素化羊抗兔地IgG(b-SARIgG)和     

肠出血性大肠杆菌VT1B亚单位的重组表达及其单克隆抗体的制备

为制备抗肠出血性大肠杆菌(EHEC)VT1B亚单位的单克隆抗体(McAb),以大肠杆菌EDL933的基因组DNA为模板扩增VT1B基因,纯化后经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,连入表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-VT1B,转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,实现了融合蛋白的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的27%。重组蛋白纯化后,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,获得3株融合细胞1G11、2H8、1B10,Western-blotting表明,此3株单抗能与VT1B蛋白特异性结合而与载体蛋白不反应。Ig亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2b,染色体数均大于100,腹水单抗ELISA抗体效价大于1∶256000,亲和常数分别为0.54×108M-1、0.95×108M-1、0.33×107M-1,间接ELISA叠加试验初步鉴定结果表明,这3株单抗针对的是同一抗原表位。此3株特异性单抗的获得为VT1毒素的检测奠定了基础。     

蜱免疫球蛋白结合蛋白的研究进展

从蜱与宿主的相互作用、宿主免疫球蛋白-G(IgG)在蜱体内的代谢过程、免疫球蛋白结合蛋白(IGBP)的发现及其在具尾扇头蜱中的功能等方面阐述了IGBP与抗蜱免疫的关系.认为抗蜱疫苗的成功策略或许是"二次联合疫苗",而IGBP是该策略的关键成分之一.阻断蜱IgG分泌系统的功能和目标关键成分的分泌能快速杀死蜱,因而,利用IGBP研制联合抗蜱疫苗的策略具有现实的可能性.     

禽大肠埃希氏菌O78和巴氏杆菌(5∶A)外膜蛋白的免疫研究

用超声裂解、Sarkosyl处理和超速离心法提取禽大肠埃希氏菌O78强毒株 (简称O78)、O78耐氯霉素弱毒株 (简称O78r)、禽多杀性巴氏杆菌 5∶A强毒株C4 8 1(简称C4 8 1)、O78r 与C4 8 1的融合双价弱毒株F4 (简称F4 )菌体外膜蛋白 (OMP)。经SDS PAGE结果显示 ,O78、O78r、C4 8 1与F4 均有 1条分子质量为 31.0～ 4 3.0ku ,分子质量相近的OMP条带 ;O78与C4 8 1还有 1条分子质量小于31.0ku且相近的OMP条带。用OMP制备的油乳剂疫苗分别免疫小白鼠 15d和岭南黄鸡后 2 2d ,以O78、C4 8 1强毒菌攻击 ,结果表明O78、C4 8 1的OMP不但对同源菌具有免疫作用 ,且具有交叉免疫保护作用 ;用各自的OMP作包被抗原 ,建立的ELISA方法也能交叉检测到 3组OMP免疫鸡产生的抗 2种菌OMP的IgG抗体。     

绵羊肺腺瘤病——人细支气管-肺泡细胞癌的类似物

绵羊肺腺瘤病(Sheep pulmonary adenomatosis, SPA)是一种接触传染性肿瘤病。就其性质来说,用绵羊肺癌(sheep pulmonary carcinoma, SPC)一词也许比SPA更恰当一些。SPA与人的细支气管-肺泡细胞癌(bronchiolo-alveolar cell carcinoma, BAC)在起源、组织学特征和超微结构等方面都相类似,所以受到医学界和兽医界的共同关注,因为SPA的自发性与地方流行性,比起实验动物模型更接近于人的BAC。