用同猪场猪血清粗提IgG防治仔猪下痢

在生产中如何有效地防治仔猪下痢的问题一直未得到有效解决。本试验应用饱和硫酸铵盐析法从同场健康猪的灭能血清中粗提免疫球蛋白(IgG),用于防治同场初生仔猪与哺乳仔猪下痢,通过对比证明,本方法效果明显。     

氯霉素全抗原合成及多克隆抗体的制备

用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白 (BSA)和卵清蛋白 (OVA)偶联 ,制备免疫抗原和包被抗原 ,用ELISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白兔 ,制备多克隆抗体 ,并用硫酸铵沉淀法初步纯化 ,用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于氯霉素检测 ,最低检查限为 0 .3ng/mL。     

减压分馏提纯囊液抗原

为了提高囊虫病猪的诊断符合率和降低错诊率,曾采用硫酸铵盐析法、葡聚糖凝胶过滤法、电泳分离法和液氮冷冻法提纯囊液抗原,但在炭凝诊断上均未取得满意效果。而减压分馏法(真空分馏法)提纯的囊液抗原,其炭凝反应的敏感性、特异性都有显著提高。     

产肠毒素大肠杆菌K_(99)抗原纯化的研究

产肠毒素大肠杆菌K_99阳性菌株,在改良M培养基中于37℃振荡培养18～20小时,离心收集细菌,于4℃搅拌1小时使K_99纤毛(粘附抗原)从菌体上脱落,然后以差速离心去除菌体和大的细胞碎片。再以适当饱和度的硫酸铵沉淀纤毛抗原。最后经A—50离子交换柱层析纯化K-99纤毛蛋白质。纯化的K_99抗原在SDS聚丙酰胺凝胶电泳上呈现出一条蛋白带。以标准蛋白作标准曲线。测出其蛋白质亚单位分子量为18800,这与国外学者报导的18500的结果相符。纯化的K_99抗原在电镜下可见大量均质的柔软丝状的纤毛。K_99抗原是一个等电点为pH9.7的阳离子蛋白质,在我们做的pH8.6的琼脂糖电泳中其缓慢向阴极迁移。     

猪瘟病毒单克隆抗体的研制和应用——抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体的纯化

采用硫酸铵3次沉淀法和辛酸-硫酸铵法对4个IgG亚类(IgG_1,IgG_2a,IgG_2b,IgG_3)单克隆抗体腹水进行了纯化,以间接ELISA检测纯化前后样品的活性,经十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化前后样品的纯度。结果表明,两种方法均可较为有效地去除腹水中的杂蛋白,获得用于诊断目的的单克隆抗体纯品。硫酸铵3次沉淀法适用于纯化所有IgG亚类的单克隆抗体,而辛酸-硫酸铵法不适于IgG_3亚类。     

肠毒性大肠杆菌K_(99)抗原和F_(41)抗原的纯化及特性分析

本文主要介绍了通过硫酸铵沉淀,脱氧胆酸盐处理,Spehadex G200凝胶过滤,SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)等方法分离纯化K_(99)抗原和F_(41)抗原,并对其部分特性予以描述,还制备了特异性抗血清。     

大肠埃希氏菌表达猪瘟病毒E2蛋白的纯化

采用 pPROEX HTB融合蛋白表达系统 ,将猪瘟病毒E2 基因与 6×His的编码序列在大肠埃希氏菌BL2 1(DE3)中进行融合表达 ,表达蛋白质主要以包涵体形式存在。用 8mol/L尿素溶解包涵体后 ,利用镍离子金属螯合亲和层析法纯化蛋白。结果 ,在SDS PAGE上显示出一 17ku的目的蛋白条带 ,纯度达到 90 %以上。纯化后的蛋白变性、复性处理后能与猪瘟阳性血清发生特异性结合     

牦牛血白蛋白的提取试验

我们在进行动物血液综合利用研究开发中,对牦牛血浆白蛋白的提取纯化程序进行了多次试验,研制成功一条简单易行的提取工艺,报道如下。(一)试验材料 ①硫酸铵:分析纯(北京化学试剂厂)、化学纯(兰州化学试剂厂)。②辛酸钠:化学纯(上海化学试剂总厂二分厂)。③透析用玻璃纸。④醋酸纤维薄膜电泳设备及试剂。⑤健康牦牛血浆,来源于甘肃省甘南藏族自治州。(二)试验方法 血提取白蛋白操作如下:     

中国兽医科技1986年(总第101～112期)目录

西北五省(区)家畜内科学第二届学术讨论会论文选辑雏鸭锰缺乏症的调查研究…………………………………………………………………祁周约等(4—3)。宁夏南华山马场家畜黄花棘豆中毒的调查…………………………………………………陶定章等(4—5)低温乙醇法和盐析法提取牛、羊血清Y     

低温乙醇法和盐析法提取牛、羊血清γ-球蛋白的比较试验

γ-球蛋白主要是存在于动物血液里,具有抗菌、抗病毒、中和毒素、刺激动物生长等作用。近年来,国内外的兽医科研工作者,非常注意提取和利用动物血液中的生物活性物质,其中也包括γ-球蛋白的提取和利用。 关于从动物血液里提取γ-球蛋白的方法,国内外多采用盐析法。我们试用低温乙醇法在生产条件下,对牛、牛血清γ-球蛋白作了提取试验,并与盐析法作了对比,其结果报道如下。     

空肠弯杆菌肠毒素的组分及其分子质量测定

经ＳＤＳＰＡＧＥ分析发现,８０％饱和硫酸铵盐析的空肠弯杆菌细胞紧张性肠毒素（ｃｙｔｏｔｏｎｉｃｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ,ＣＥ）粗提物除有６８ｋｕ的１条带外,还有部分未分开的小分子物质,而经神经节苷脂ＧＭ１亲和层析后仅有６８ｋｕ的１条带,表明ＣＥ为６８ｋｕ的蛋白质。     

产气荚膜梭菌α-毒素的提取与鉴定

通过饱和硫酸铵盐析与SephadexG 2 0 0层析纯化 ,从A型产气荚膜梭菌分离菌株的培养物中获得了较纯的α毒素 ,对毒素的生物学特性鉴定结果表明 :该毒素对小白鼠的致死活性为 6 2 40 0 2MLD ,分子质量为 432 45 0 2u ,等电点为5 .3和 5 .5 ,可溶解绵羊红细胞 ,水解卵黄卵磷脂 ,且这种溶血活性与卵磷脂酶活性能被A型产气荚膜梭菌定型血清特异地抑制。     

串联亲和纯化中应用不同标签组合的研究进展

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物。这一优势极大地简化了蛋白质鉴定及其相互作用关系的验证工作。     

油酸人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备

为建立奶牛血清中油酸(OA)含量的免疫学检测方法,将油酸用活泼酯法分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制备人工抗原和包被原;利用薄层色谱法(TLC)和红外光谱法鉴定人工抗原合成是否成功;用OA-BSA常规免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行亚克隆;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Hi Trap Protein G HP纯化柱纯化腹水,并对纯化后的腹水用ELISA检测抗体效价,以及抗体亚型鉴定。结果表明,TLC监测抗原合成过程中有新物质生成,红外图谱显示OA-BSA波谱形态与BSA相似且拥有OA的特征峰;小鼠血清抗体效价为1∶12 800,用ELISA方法筛选出1株细胞G-1,抗体亚型为Ig G1型。为建立油酸的免疫学检测方法奠定了基础。     

抗传染性法氏囊病病毒高免血清的制备纯化及检验

抗传染性法氏囊病病毒高免血清的制备纯化及检验张绍学朱瑞良唐珂心牛钟相柴家前常伟山（山东农业大学动物科技学院泰安２７１０１８）鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）是危害雏鸡的一种病毒性传染病。我们用提纯的ＩＢＤＶ免疫ＳＰＦ鸡制备抗ＩＢＤＶ的高免血清，并通过盐析法...     

金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖偶联抗原的制备及免疫原性分析

为建立金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5)纯化与偶联技术方法,获得具有免疫原性的CP5偶联抗原,采用高压破碎菌体的方法释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白质,通过离子交换层析进一步纯化,得到纯化的CP5,并对其纯度和反应原性进行检测;采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法制备CP5-牛血清白蛋白(CP5-BSA)偶联抗原,加佐剂免疫小鼠,进行抗体水平测定。结果表明,纯化的CP5纯度为675.1g/kg,经用免疫琼脂双扩散试验检测,纯化多糖仅与同型菌株抗血清发生沉淀反应,偶联抗原CP5-BSA可以刺激小鼠产生CP5免疫应答。此研究结果为奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌亚单位疫苗的研制提供了试验依据。     

捕食性真菌Duddingtonia flagrans胞外蛋白质的生化性质研究

为纯化捕食性真菌Duddingtonia flagrans分泌的胞外蛋白酶并研究其生化性质,利用枸橼酸液体培养基对D.flagrans进行培养,以灭菌的马圆线虫进行诱导,之后用盐析法粗提培养液,再使用Sephadex G-100分子筛进行层析纯化,最后对纯化物进行最适pH、温度及蛋白酶抑制剂的抑制试验。结果显示,被纯化出的3种胞外蛋白酶的分子质量分别为38、63、19ku;在pH 6.0~7.0、45~55℃条件下,其活性最高;它们都对酶抑制剂菲罗啉和抑肽素非常敏感,其中38ku的蛋白酶对抑制剂PMSF也很敏感。上述结果为进一步研究捕食性真菌分泌的胞外蛋白酶在杀线虫过程中的作用以及今后在生产中的具体应用提供了重要参考依据。     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗独特型抗体的制备及其免疫原性测试

用抗弓形虫单克隆杂交瘤细胞株(3C_2)扩大培养,于腹腔注射BALB/C小鼠诱生腹水,经3次饱和硫酸铵盐析,透析,DEAE-Sephadex-A_(50)离子交换层析,除菌,制得纯化McAb(Ab_1),蛋白含量2mg/ml,用福氏佐剂乳化后免疫健康家兔4次,放血分离血清,再经盐析和层析处理,制得多克隆抗弓形虫独特型抗体(Ab_2),用佐剂制备疫苗,3次免疫绵羊(5～10mg/只)2只。共采集4次血清,制得抗抗弓形虫独特型抗体(Ab_3),用IHA法检测抗体效价为1:64～1024。证实抗独特型抗体(Ab_2)是特异的,是能模拟弓形虫抗原,具有类似弓形虫免疫原性,并可激发宿主免疫应答产生抗体,进而证实独特型和抗独特型的免疫网络学说在弓形虫病免疫中的应用价值。     

病毒提纯方法的比较试验

病毒提纯方法的比较试验裴天云，侯顺利，赵改敏，刘万恒，臧荣鑫（兰州军区后勤部军事医学研究所７３００２０）目前，用于提纯病毒抗原的方法有差速离心法、葡聚精凝胶层析法、硫酸铵沉淀法等，这些方法为化学提纯法打下了基础。现就常规与化学提纯法的比较试验情况作如...     

小鼠抑制素α亚基在杆状病毒表达系统中的表达和纯化

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf9细胞,获得第一代重组杆状病毒(P1)。然后病毒连续传代2次,用RT-PCR鉴定重组的杆状病毒,用SDS-PAGE验证纯化后蛋白质的表达,并使用BCA蛋白质浓度检测试剂盒检测纯化后的蛋白质样品的质量浓度。结果表明,感染重组杆状病毒后的Sf9细胞能够明显看到细胞皱缩、碎裂等感染症状;RT-PCR能够扩增出1 272bp的条带,证明重组的杆状病毒构建正确;SDS-PAGE结果表明重组的杆状病毒能够表达出45ku的条带,与理论大小一致;利用BCA蛋白质浓度检测试剂盒测得纯化样品中蛋白质的质量浓度为(216.05±10.02)μg/mL。小鼠抑制素α亚基成功地在杆状病毒表达系统中被表达,为今后抑制素的广泛应用奠定了基础。