大肠杆菌K_(88)抗原分子遗传学研究近况

1961年Φrskov等发现在一次猪腹泻流行中所分离的大肠杆菌含有一种新的K抗原,称K_(88)抗原。K_(88)抗原是一种粘附因子,它使K_(88)阳性菌株附着于肠壁上而不被机体清除。已知K_(88)是一种蛋白质,其基因位于质粒上。以往预防大肠杆菌性腹泻大多采用死菌苗,但效果不够满意,随着分子遗传学及DNA重组技术的迅速发展,可望应用基因工程技术来构建高效、稳定和安全的大肠杆菌苗。     

吉林省猪源致病性大肠杆菌K_(88)~+株的检测及两种检测方法的比较

病原性大肠杆菌E.coli K_(88)抗原的发现(φrskoy,1961)大大地推动了大肠杆菌病的研究。近年来,国内外学者就K_(88)抗原的多种特性进行了大量的研究工作。现已查明:凡具有K_(88)抗原的E.coli株均能吸附在小肠粘膜的绒毛上,并产生两种肠毒素,即热稳定肠毒素(ST)和热敏肠毒素(LT)而导致仔猪发生腹泻。因此,检测病源性E.coli的K_(88)抗原无疑对流行病学的调查和免疫学的防治研究起着重要作用。     

产肠毒素大肠杆菌K_(99)抗原纯化的研究

产肠毒素大肠杆菌K_99阳性菌株,在改良M培养基中于37℃振荡培养18～20小时,离心收集细菌,于4℃搅拌1小时使K_99纤毛(粘附抗原)从菌体上脱落,然后以差速离心去除菌体和大的细胞碎片。再以适当饱和度的硫酸铵沉淀纤毛抗原。最后经A—50离子交换柱层析纯化K-99纤毛蛋白质。纯化的K_99抗原在SDS聚丙酰胺凝胶电泳上呈现出一条蛋白带。以标准蛋白作标准曲线。测出其蛋白质亚单位分子量为18800,这与国外学者报导的18500的结果相符。纯化的K_99抗原在电镜下可见大量均质的柔软丝状的纤毛。K_99抗原是一个等电点为pH9.7的阳离子蛋白质,在我们做的pH8.6的琼脂糖电泳中其缓慢向阴极迁移。     

仔猪大肠杆菌纤毛抗原调查

大肠杆菌纤毛抗原与菌株的肠病原性有着密切的关系。目前已经确认,仔猪致病性大肠杆菌纤毛抗原有4种,即K_(88)、K_(99)、987P和F_(41),它们是蛋白质,不耐热,位于菌体表面,作为一种粘着因素在猪体内发挥作用,使大肠杆菌固着于前部肠道的粘膜绒毛上,产生肠毒素,引起发病。 纤毛抗原免疫母猪,所产生的抗体可通过初乳使仔猪得到被动保护,因而研究纤毛抗原     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)LTB遗传工程苗田间试验

从1985～1990年,笔者试用5批仔猪大肠杆菌K_(88)工程菌活苗在河南、陕西等地的12个猪场进行预防仔猪大肠杆菌性腹泻的免疫效力观察,并对其经济效益进行了测算,效果令人满意。     

埃希氏大肠杆菌菌毛吸附因子与仔猪黄白痢的关系

笔者采用玻板凝集试验的方法,对四川荣昌养猪研究所和新疆一四八团猪场的50份仔猪黄、白痢病料的大肠杆菌分离物进行了血清学检查,发现仔猪黄、白痢中均存在K_(88)、K_(99)、987P阳性的埃希氏大肠杆菌(E·coli),认为K_(88)、K_(99)、987P菌毛吸附因子很可能是仔猪黄、白痢的共同致病因子。     

ELISA、BA-ELISA和IHA检测抗K88ac抗体的研究

本文报告了用自制IgG型兔抗猪IgG、IgA、IgM型抗体,建立ELISA和BA-ELISA方法检测乳汁和血清中IgG、IgA和IgM型抗K_(88)ac抗体,并和IHA检测抗K_(88)ac抗体的方法进行比较,结果表明:BA-ELISA和ELISA方法不仅灵敏度高、重复性好,而且可区分IgG、IgA、IgM型抗K_(88)ac抗体,可作为评价大肠杆菌苗免疫效果和研究大肠杆菌苗免疫机理的手段之一。     

应用琼脂双相双扩散法鉴定大肠杆菌菌毛抗原

已知引起仔猪、犊牛、羔羊等幼畜腹泻的肠病原大肠杆菌株,常能产生两种致病因子,即菌毛抗原成分及肠毒素。目前用于临床鉴定分离于这些幼畜腹泻大肠杆菌株是否产生菌毛抗原的方法,主要包括有:抗D-甘露糖血凝反应、直接玻片凝集反应,反向间接血凝反应、酶联免疫吸附试验等。作者本次将琼脂双相双扩散试验用于对K_(88)_、K_(99)、987P、F_(41)菌毛抗原的鉴定,取得了可信性结果,现报告如下:(一)材料1.大肠杆菌株:用于本试验、产生菌毛抗原的4个标准菌株为:①44563,产生菌毛抗原K_(88),血清型分别包括O_8:K_(87),K_(88ac);H_(19),来源于卫生部药品生物制品检定所;②C_(83912),产生菌毛抗原K_(99),血清型别为K_(12),K_(99);③C_(83915),产生菌毛抗原987P,血清型分别为0_9:K_(103),987P:NM;④C_(83919),产生菌毛抗原F_(41),血清型分别为O_(101)∶K_(30),F_(41)∶H~-。后3个标准菌株均来源于中国兽药监察所。用于本试验、从不同动物分离的5株大肠杆菌均不产生K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)菌毛抗原,其编号为No.1、No.2、No.3、No.4、No.5,     

大肠杆菌多价菌苗的研究

根据我国大肠杆菌常见的血清型44563(O_(8:)K_(87)、K_(88)ac:H_(19))、C83903(O_(141:)K_(89)[B]、K_(88)ab[L])、C83907(O_(149:)K_(91)、K_(88)ac)、44820(O_(101:)K_(99:)H~-)菌株研制成多价灭活口服菌苗和提纯K_(38)粘着素抗原、肠毒素与口服菌苗混合制成的注射菌苗。对母猪行两个途径免疫,其所产仔猪经哺乳后用异种血清型的菌株进行强毒攻击。其结果:第一组(口服-肌肉注射组)新生乳猪发病率为2.5％,保护率为97.5％;第二组(后海穴注射组)发病率为10％,两组均无死亡;未进行免疫的对照组发病率为37％。带有K_(88)粘着素和产毒素能力的异种血清型的C83552菌株进行致病力测定,其结果:口服96～120亿活菌量的新生乳猪发病率为100％,死亡率为100％;口服48亿活菌量的发病率为100％,死亡率为25％。我们选定96亿活菌量作为攻毒的活菌数,进一步扩大试验,以期用于生产。     

宁夏羔羊腹泻的产肠毒性大肠杆菌的研究

1985～1988年,本试验从腹泻羔羊分离到大肠杆菌共95株,并对其中54株菌株做血清型鉴定,明确了分离菌株,其血清分属O_8,O_(101),O_(78),O_9四类O类型,其中O_8为主要O类型。采用MRHA反应和K_(99)单抗及F_(41)抗血清的直接凝集反应,鉴定出分离菌株表面携带有K_(99)或K_(99):F_(41)粘着素抗原。由此选出H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)菌株,用乳鼠胃内投服试验和平板免疫溶血试验,测定出该3株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性;且H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)对实验动物和初生羔羊有致病作用。其它分离菌株皆能与6株菌株H_(8720)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8724)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8729)(O_9∶K_(99)∶F_(41))、BH_(871)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))、BH_(872)(O_(78)∶K_(99)∶F_(41))、Bj_(877)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))的抗血清发生强烈的凝集性和交叉性反应。上述结果均表明:自腹泻羔羊分离到的菌株是携带有共同抗原成份,即K_(99)或K_(99)∶F_(41)粘着素抗原的产肠毒素性大肠杆菌。     

抗痢06菌苗治疗仔猪黄白痢的试验

仔猪黄、白痢是由大肠杆菌引起的一种常见多发性传染病,发病率高达90％以上,严重影响仔猪的成活率。虽然预防性药物(大肠杆菌制剂、K_(88)-K_(99)基因工程疫苗等)和治疗性药物(抗菌素、呋喃唑酮、痢菌净等)较多,但药价较高,使用不方便。为了探究治疗仔猪黄、白痢的良药,我们选用抗痢06菌苗进行了试验性治疗,现报告如下。 (一)材料与方法 1.试验药物:①抗痢06菌苗;5ml/支,卫生部武汉生物制品研究所生产,批号8914;②0.5％痢     

K_(88)ITB双价基因工程活疫苗安全量的试验

为了探求用K_(88)-ITB工程菌活疫苗预防仔猪大肠杆菌性腹泻所用剂量的安全范围,特进行了下述试验。     

肠毒性大肠杆菌K_(99)抗原和F_(41)抗原的纯化及特性分析

本文主要介绍了通过硫酸铵沉淀,脱氧胆酸盐处理,Spehadex G200凝胶过滤,SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)等方法分离纯化K_(99)抗原和F_(41)抗原,并对其部分特性予以描述,还制备了特异性抗血清。     

大肠杆菌灭能苗预防仔猪黄痢、白痢试验

(一)免疫苗苗 本试验所用的大肠杆菌(K_(88)~+、K_(99)~+)灭能苗,系由湖北省畜牧兽医研究所提供。常温下,本苗可存放1～5个月。 (二)免疫方法 选择品种相同,胎次和预产期相近的正常母猪,随机分为试验、对照两个组。 1.产前母猪免疫(简称母免):对妊娠母猪分别在分娩前15天、7天,及分娩后5天、12天和19天各肌肉注射大肠杆菌苗10～15ml,使初生仔猪通过母乳获得免疫力。 2.仔猪免疫(简称仔免):对未免疫母猪所生仔猪,在出生后2小时以内,吃初乳之前,每头服菌苗1ml。到5、12、19日龄时,每头仔猪再口服2～3ml菌苗。 3.判断标准:用以上两种方法免疫后,仔猪在30日龄内不发生黄、白痢等拉稀现象者     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻MM-3工程菌苗的免疫效果

用MM-3基因工程活菌苗免疫妊娠后期母猪,待分娩后,用BA-ELISA方法检测初乳与新生仔猪血清中的抗K_(88)ac和LT抗体。结果表明,口服或肌注该菌苗均可大幅度提高乳汁及仔猪血清中抗K_(88)ac、LT抗体水平,并使新生仔猪大肠杆菌性腹泻的发病率、死亡率明显降低。     

仔猪黄痢病防治研究

仔猪黄痢病多发生于1～5日龄初生仔猪,发病率和死亡率均高。其病原是含有K_(88)L型封套抗原和肠毒素(Ent)双重因子的埃希氏大肠杆菌(E.colt)。我们从1979年秋开始对本病进行了防治研究,现报告如下。     

孕母猪初生仔猪口服大肠杆菌K_(88)ITB双价工程疫苗免疫效力对比试验

用K_(88)ITB工程活疫苗(1)给怀孕母猪组于预产期之前3周,每头口服500亿活菌;(2)给初生仔猪组于出生后24小时,每头口服25亿活菌。试验结果:免疫的怀孕母猪组与初生仔猪组的仔猪腹泻发病率分别比对照组的下降了46.5％和40.9％;两免疫组的仔猪死亡率分别下降了29.4％和25.6％。说明K_(88)疫苗给怀孕母猪接种,更实用且免疫效果更佳。     

鉴定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株的三种简便方法

本文报道了我们用玻片凝集、抗甘露糖血凝反应和发酵棉子糖等三种方法,对相同菌株进行试验的结果。证明这三种方法用于签定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株都是简便有效的。它们不但可用于仔猪腹泻病的流行病学调查,而且对这种传染病的免疫预防研究也有一定的意义。 (一)材料和方法 1.菌株:菌株及其来源列在表1。     

仔猪黄痢病防治试验报告

仔猪黄痢亦称新生仔猪大肠杆菌病,是肠道致病性大肠埃希氏菌中某些血清型引起初生仔猪发生的一种急性传染病,对乳猪的危害很大。关于本病的预防,国外许多工作者曾进行过大量的研究。英、美等国工作者曾将肠道病原性大肠埃希氏菌中的K_(88)阳性菌株或K_(88)阴性菌     

仔猪腹泻基因工程双价苗预防仔猪黄痢

免疫母猪通过初乳而使 仔猪获得被动性保护抗体, 给养猪业提高仔猪成活创造 良好的经济效益提供了保障。为了解它们在生产实践中的应用效果,1992年7～12月我们试采用仔猪腹泻基因工程双价疫苗(K_(88)、K_(99)以下简称双价苗)作预防仔猪黄痢试验。