预防犊牛大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究

用大肠杆菌Ｋ_９９、Ｆ_４１基因工程菌毛苗对１５００头怀孕母牛皮下注射菌毛苗５ｍｇ／头，局部和全身均无任何不良反应，未造成母牛流产、早产及犊牛畸形，无任何毒副作用。对菌毛苗主动免疫的怀孕母牛所产犊牛吃初乳后用强毒Ｋ_９９、Ｆ_４１大肠杆菌攻击，保护率达９０％，证明该菌毛苗具有较强的Ｋ_９９和Ｆ_４１免疫原性，可使犊牛获得确实的被动免疫。在５个牛场对１４８０头犊牛进行菌毛苗免疫效果观察，未免疫对照组腹泻发病率为５７．４％～７６．２％，免疫后降至４．２％～５．６５％；未免疫对照组腹泻死亡率为４．３％～４５．２％，免疫后仅为０～１．０４％。试验结果表明，该菌毛苗能有效地预防犊牛大肠杆菌腹泻的发生。     

宁夏羔羊腹泻的产肠毒性大肠杆菌的研究

1985～1988年,本试验从腹泻羔羊分离到大肠杆菌共95株,并对其中54株菌株做血清型鉴定,明确了分离菌株,其血清分属O_8,O_(101),O_(78),O_9四类O类型,其中O_8为主要O类型。采用MRHA反应和K_(99)单抗及F_(41)抗血清的直接凝集反应,鉴定出分离菌株表面携带有K_(99)或K_(99):F_(41)粘着素抗原。由此选出H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)菌株,用乳鼠胃内投服试验和平板免疫溶血试验,测定出该3株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性;且H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)对实验动物和初生羔羊有致病作用。其它分离菌株皆能与6株菌株H_(8720)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8724)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8729)(O_9∶K_(99)∶F_(41))、BH_(871)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))、BH_(872)(O_(78)∶K_(99)∶F_(41))、Bj_(877)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))的抗血清发生强烈的凝集性和交叉性反应。上述结果均表明:自腹泻羔羊分离到的菌株是携带有共同抗原成份,即K_(99)或K_(99)∶F_(41)粘着素抗原的产肠毒素性大肠杆菌。     

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。     

奶牛副伤寒免疫防治的研究

用从奶牛副伤寒疫区分离到的鼠伤寒沙门氏菌株配以标准菌株，制各鼠伤寒沙门氏茵菌笛，在疫区给临产母牛和青年育成牛免疫接种。共免疫牛１０５０头，均无不良反应。通过攻毒保护试验，接种菌苗的犊牛可抵抗３００亿强毒活菌的攻击，免疫牛血清中抗鼠伤寒沙门氏菌抗体的效价达１：２５６．同时，利用自制的抗鼠伤寒沙门氏菌高免血清对未进行免疫接种的一进行紧急预防和治疗，效果显著。由此表明，利用当地菌株制备菌苗，可有效地预防奶牛副伤寒的发生。     

表达CPB-ST融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌β毒素（ＣＰＢ）和大肠埃希氏菌ＳＴ融合蛋白（ＣＰＢＳＴ）的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＣＢＳＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌株中提取的包涵体和经甲醛灭活的工程菌株全菌体制备抗原免疫小白鼠，攻毒试验结果表明，免疫小白鼠能分别抵抗１ＭＬＤ的Ｂ型产气荚膜梭菌强毒株（Ｃ５８－１）和产ＳＴ的大肠埃希氏菌工程菌株ＨＢ１０１（ｐＳＬＭ００４）的攻击。用灭活的全菌体免疫家兔后，其免疫血清能中和产气荚膜梭菌β毒素和大肠埃希氏菌ＳＴ的毒素活性。结果表明，构建的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＣＢＳＴ１）可以作为预防由产气荚膜梭菌β毒素和大肠埃希氏菌ＳＴ引起的幼畜腹泻的基因工程苗侯选菌株。