同源重组技术在拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒中的应用

为探寻猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组的规律和机制,在反向遗传学技术平台基础上,设计了几对作为配体和供体的复制子质粒,相应配对后共转染Mar-c145细胞,经原代或传代培养后拯救出病毒,并对拯救病毒的序列进行了比对分析。结果显示,拯救的病毒为重组子,共含有供体和配体亲本部分序列;在配体和供体的同源序列区发生了分子间同源重组;重组区域存在着一定的随机性,分别依次在ORF1的256～318 nt区域、ORF5的13970～13992 nt、ORF6的14428～14494 nt及ORF7的15135～15161 nt区域发生了重组。本研究利用同源重组技术建立的重组体系,不仅揭示病毒重组区域具有随机性,而且也为其他RNA病毒的感染性cDNA克隆的构建提供了一种方法。     

禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶的表达及其活性分析

为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶基因(Lysin基因),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-LysJS09,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。在37℃IPTG浓度为1.0mmol/L诱导4h表达效果最好。重组融合蛋白LysJS09在BL21(DE3)中获得了高表达,在N端具有His标签,其分子质量约为38.9ku。重组融合蛋白以分泌型方式表达,经His-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后获得的重组蛋白LysJS09的纯度为97%。裂解活性试验表明,该裂解酶单独使用和加入EDTA(0.1mol/L)均无体外酶活性;但菌体内裂解试验表明,表达的裂解酶对宿主菌具有一定的裂解作用。     

广西主动融入粤港澳大湾区的平台构建与政策选择

粤港澳大湾区建设是国家重大发展战略,也给相邻的广西带来重大发展机遇。近年来,广西不断丰富创新粤桂合作特别试验区、广西《内地与港澳关于建立更紧密经贸关系的安排》(CEPA)先行先试示范基地和粤桂黔高铁经济带合作试验区(广西园)等对接粤港澳大湾区的合作平台,但平台硬件建设滞后,政府扶持有待强化、合作平台效果不足、优质项目储备不够等问题仍然存在,未来必须提升合作平台,加快先行先试。广西与粤港澳大湾区合作共赢的多重政策红利逐步释放,但体制机制亟待健全,政策环境亟待改善,政策创新亟待改进,必须完善合作机制,优化营商环境,加大贸易和投资,促进财税、土地、人才等政策扶持,共享粤港澳大湾区优惠政策。     

干事创业 青春无悔——记全国优秀农民工、柳州市万年青职业培训学校校长、万年青家政服务有限公司总经理黄河

正人物简介:黄河,女,柳州市万年青职业培训学校校长、万年青家政服务有限公司总经理,先后获得首届"全国优秀农民工"、首届"广西优秀农民工"、"十佳新柳州人"和"柳州市优秀民间组织工作者"荣誉称号。所创办的万年青职业培训学校先后被认定为"柳州市下岗失业人员免费培训定点机构""柳州市妇女创业就业示范培训基地""城中区家庭教育培训中心""柳州市创业就业技能培训示范基地";并被授予"柳州市家庭服务协会副会长单位""广西家庭服务协会常务理事单     

推进“两学一做”学习教育深入发展

正十九大报告指出,弘扬马克思主义学风,推进"两学一做"学习教育常态化制度化,以县处级以上领导干部为重点,在全党开展"不忘初心、牢记使命"主题教育,用党的创新理论武装头脑,推动全党更加自觉地为实现新时代党的历史使命不懈奋斗。由北京市委宣传部主管、北京市讲师团主办、千龙网协办的宣讲家网站结合自身实际,认真研究、精心策划、及时行动,积极探索推进"两学一做"学习教育常态化制度化的方式方法,在"学"字上狠下功夫,为基层党员"两学一做"学习教育常态化架起了桥梁,探索解决为什么     

办理过户手续应是城市私有房屋买卖合同的生效要件

1983年12月17日国务院颁布的《城市私有房屋管理条例》（下称《条例》）第9条规定：“买卖城市私有房屋，卖方须持房屋所有权证和身份证明，买方须持购买房屋证明和身份证明，到房屋所在地房管机关办理手续。”这一规定说明，产权转移登记应是城市私有房屋买卖合同的生效要件。但在具体施行中，却出现了一些对该规定执行不认真的情况。根本的原因，还是对该规定缺乏正确的认识。因此，我们有必要在登记是否应作为房屋买卖合同的生效要件这个问题上进一步统一认识。笔者认为，把登记作为房屋买卖合同的生效要件，主要有以下几条理由：（一）…     

工作

1997年我大学毕业,因为是委培生不包分配,而原来签字同意委培的工厂又已经不复存在,找份工作的现实就摆在了一家人面前。可对于既无权又无钱且无“关系”的我家来说,找工作是多么的难啊! 我的父母都是清贫的知识分子,为人光明磊落,对溜须拍马之类的事向来很是反感,但在1997年,在我们那个闭     

小鹅瘟病毒与大肠埃希氏菌混合感染的诊治

辽宁省庄河市青堆镇王某饲养本地雏鹅10 0 0只,饲养至2 2日龄时开始发病,每日死亡30～4 0只,1周内死亡2 6 0余只。临床症状　病鹅精神沉郁,缩颈离群,食欲废绝,鼻液增多,严重下痢,排黄白色混有气泡的稀便。个别病鹅出现神经症状,颈部扭转或后仰,全身抽搐或瘫痪,病程2～3d。剖检变化　全身肌肉暗红,胸腔和腹腔积有淡黄色液体;肺发生肝变;肝肿大,表面有灰白色坏死灶,胆囊肿大;肾肿大;肠黏膜肿胀、充血、出血,小肠内形成典型的香肠状凝固物。病原学检查病料采取与处理　无菌采取病、死雏鹅的肝、脾、肾等脏器,加生理盐水制成10 0 g/L的悬浮液,…     

从应然合同的视角解读合同解释的必为性

应然合同是一个利益平衡体,它体现在两个方面:当事人之间的平衡体和当事人与社会之间的平衡体。进入司法过程中的合同是利益失衡的合同,表现为合同中的权利义务失衡和当事人内心的失衡。当事人内心的失衡是其进入司法过程中寻求司法救济的决定性因素,也是合同解释必为性的原因。本文尝试以应然合同,作为探讨和认识合同的一个新的视角,来审视司法过程中合同解释的成因。