斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

十例犬乳腺肿瘤病理组织p53及CD44抗体表达的解析

对通过外科手术摘除的10例疑似犬乳腺肿瘤标本按国际标准进行了病理组织学分类,并采用鼠抗人p53和CD44抗体,用免疫组织化学方法对病料组织中的p53和CD44抗原进行了检测.结果表明,10例犬乳腺肿瘤中恶性肿瘤占50%,其中乳腺浸润性导管癌占30%;良性肿瘤占30%,乳腺非肿瘤性疾病占20%.p53在恶性乳腺肿瘤组织中的表达明显高于良性乳腺肿瘤组织,差异极显著(P＜0.01).CD44在恶性乳腺肿瘤组织、良性乳腺肿瘤组织和非肿瘤组织中均有表达,三者之间CD44的表达无显著差异(P＞0.05).证实,p53在病理组织中表达的强弱可作为动物乳腺肿瘤诊断和预后的判定标准之一,而CD44的表达对于乳腺肿瘤的诊断无临床意义.     

犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法的建立

为快速诊断犬恶丝虫病,建立了犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法,并与阻断试验、交叉反应试验、重复性试验、琼脂扩散试验和平行对照试验进行了比较.结果显示,制备的犬恶丝虫虫体粗制抗原与犬钩虫、犬弓首蛔虫和犬蠕形螨感染犬的阳性血清无交叉反应,检出犬恶丝虫阳性血清的最高抗体效价为11024,重复性好;建立的犬恶丝虫病dot-ELISA诊断方法的灵敏度比琼脂扩散试验和美国IDEXX实验室制备的犬恶丝虫病诊断试剂盒分别高2048倍和48倍.     

集约化猪场猪瘟免疫抗体的监测与防制对策

用正向间接血凝试验对甘肃省部分集约化猪场猪瘟免疫情况进行监测,分析探讨了猪瘟免疫失败和流行的原因,筛选出了合理的免疫程序及有效防制对策.     

关于发布《囊尾蚴病诊断标准》等3项推荐性卫生行业标准的通告

国卫通[2021]11号现发布《囊尾蚴病诊断标准》等3项推荐性卫生行业标准,编号和名称如下:WST381—2021囊尾蚴病诊断标准(代替WS/T381-2012)WST791—2021钩虫检测及虫种鉴定标准钩蚴培养法WST792—2021日本血吸虫抗体检测标准酶联免疫吸附试验法上述标准自2022年5月1日起施行,WS/T381-2012同时废止。     

规模化猪场4种猪瘟免疫程序的免疫效果比较

采用Dot-ELISA检测猪瘟母源抗体消长规律和4种猪瘟免疫程序的免疫效果.结果,在7、14、21、28和35日龄时,猪瘟母源抗体阳性率分别为80.0%、60.0%、33.3%、13.4%和6.7%,其抗体效价几何平均值(GMT)分别为188、169、159、140和135.4种免疫程序的猪瘟抗体检测结果为,超前一次免疫和超前二次免疫2倍量猪瘟单价苗,在6月龄时,其抗体阳性率分别为85%和80%,GMT分别为1105和185.20日龄首免2倍量猪瘟单价苗后,60日龄二免2倍量猪瘟-猪肺疫-猪丹毒三联苗,在60日龄和6月龄时,抗体阳性率分别为90.0%和87.0%,GMT分别为1135和1103.28日龄首免猪瘟单价苗,70日龄加免三联苗,免疫1和2头份组在65日龄时,阳性率分别为78.0%和92.0%,6月龄时分别为73.0%和86.0%.结果表明,免疫2头份比1头份的效果好,4种免疫程序的效果都较理想.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4和Nsp12多克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)两种非结构蛋白Nsp4和Nsp12的多克隆抗体,将Nsp4基因和Nsp12基因分别克隆至pET-32a(+)和pGEX-6P-1,并转化至BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经过Ni-NTA镍离子亲和层析和包涵体洗液纯化,获得纯化的重组蛋白,然后用它们分别免疫BALB/c小鼠制备抗血清。SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示,Nsp4和Nsp12分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,大小分别为42ku和44ku,均具有良好的反应原性。Western-blot和IFA结果显示,制备的抗血清均与PRRSV发生特异性反应,ELISA抗体效价均可达1∶32 000。本研究结果为PRRSV Nsp4和Nsp12的生物学功能研究奠定了基础。     

传染性法氏囊病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究首先将VP2基因分3段(部分序列重叠),分别为VP2(1~600)、VP2(376~975)和VP2(751~1350),并根据大肠杆菌对密码子的偏爱性进行优化,将优化的3个VP2基因片段分别克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot,结果3个重组VP2蛋白均获得了表达。用纯化的3个重组VP2蛋白rVP2(1~600)、rVP2(376~975)和rVP2(751~1350)分别作为包被抗原,建立了IBDV抗体间接ELISA(rVP2-ELISA)。用rVP2-ELISA、IDEXX-ELISA(IBDV)及中和试验对96份临床血清样本进行检测,结果显示,3个重组VP2蛋白建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法、IDEXX-ELISA(IBDV)与中和试验比较,相对敏感性分别为97.1%、61.8%、58.8%和100%;相对特异性分别为85.5%、82.3%、83.9%和25.8%;符合率分别为89.6%、75.0%、75.0%和52.08%。本研究为研制IBDV抗体间接ELISA检测试剂盒(以重组VP2蛋白作为包被抗原)奠定了基础。     

A型塞内卡病毒VP2蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种检测塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA方法,本试验将A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。结果显示,VP2蛋白包被量为2μg/m L(1∶1000稀释);用2%BSA封闭液稀释标准阳性血清为1∶20;二抗做1∶5000稀释;TMB底物显色液室温避光显色反应10 min。特异性试验结果显示,同FMDV、PRRSV、CSFV、PRV和APP阳性血清均无交叉反应。此方法对塞内卡病毒阳性血清的敏感性为1∶160。批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%。对200份猪血清样本分别进行间接荧光抗体免疫方法和间接ELISA方法的检测,结果符合率为95.5%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。     

狂犬病病毒抗体免疫金标检测试纸的制备及其应用

为了建立一种快速检测狂犬病病毒抗体水平的方法,用浓缩提纯的狂犬病病毒CVS11株作为胶体金标记抗原,以金黄色葡萄球菌A蛋白为检测线上的捕获抗原,制备狂犬病病毒抗体水平检测试纸条。应用该试纸条进行临床样品检测,结果表明,以稀释后的犬全血或血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为0.002U/mL,特异性试验证明该试纸条与犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬腺病毒2型犬科疾病阳性血清没有交叉反应,稳定性试验证明该试纸条在室温下保存的有效期为12个月,检测结果与快速荧光抑制试验的符合率为95.12%。证实该狂犬病病毒抗体免疫金标检测试纸可以方便、快速、灵敏、特异地检测狂犬病病毒的抗体水平。