PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法.敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL.表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测.     

新城疫病毒F蛋白免疫活性片段的原核表达

利用已构建的新城疫病毒F基因重组质粒,通过氨基酸序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技术,预测了试验株F蛋白的表面抗原分布位置.设计引物扩增了2段含有多个抗原位点的多肽片段,通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a,获得了重组质粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2个片段串联起来后克隆的重组质粒pET32a-F3.重组质粒经诱导表达并取产物进行分析,结果显示,F1、F2、F3片段均获得了融合表达.Western-blotting证实,表达产物F1、F2和F3与NDV阳性血清均具有免疫反应性.用表达的重组蛋白加免疫佐剂经皮下接种免疫鸡,免疫2次后产生较高的抗体水平,用100 LD50的超强毒株GD-05-2攻击,重组蛋白免疫组鸡可达到约70%的保护率,并可显著抑制排毒.     

鸡传染性支气管炎病毒四川分离株N基因DNA免疫质粒的构建

采用SDS 蛋白酶K法抽提鸡传染性支气管炎病毒(IBV)四川分离株SAIBWJ的基因组RNA,参照基因库中的N基因序列设计了1对引物,扩增出了单一的DNA产物。将该产物插入pUC18载体的HindⅢ和BamHⅠ酶切位点,构建了pUC NWJ质粒。序列测定结果表明,获得的克隆质粒包含了全部N基因。再将N基因亚克隆到pcDNA3.1( )载体的HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,构建了IBVSAIBWJN基因的DNA免疫质粒pcDNA NWJ。     

鸡传染性腔上囊病病毒双夹心ELISA检测方法的建立

通过制备兔抗鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)、小鼠抗IBDV和绵羊抗兔免疫血清,并纯化绵羊抗兔辣根过氧化物酶标记抗体,采用方阵滴定法测定其最佳使用浓度,建立了IBDV双夹心ELISA检测方法.结果显示,包被抗体的最适稀释度为1160,兔抗IBDV的最佳稀释度为1200,酶标记抗体的最佳稀释度为1400.特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性强,重复性好,与鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和鸡减蛋综合征病毒抗原均不发生交叉反应.对人工感染病例的检测结果表明.建立的双夹心ELISA方法可用于临床快速诊断IBDV.     

信息泛滥背景下网络病毒营销

本文主要分析当前信息泛滥现象的影响及网络病毒营销的现状，通过对两者之间关系的论述，力求得出信息泛溢背景下网络病毒营销的解决方案，以获得最大的传播效应。     

鹌鹑减蛋综合征病毒株血细胞凝集特性的研究

鹌鹑源ＱＡＶＣ９４腺病毒株血细胞凝集特性及影响因素的研究结果表明，该病毒能凝集雉鸡、鸡、鹅、鸭、鸽、鹌鹑、火鸡、斑鸠红细胞，不凝集哺乳动物红细胞，为１株减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）。该株病毒最佳的血细胞凝集条件为４℃，体积分数１．０％雉鸡红细胞，０．０１～０．１０ｍｏｌ／ＬｐＨ６．４～７．２的ＰＢＳ。病毒可耐５６℃１ｈ，脂溶剂（乙醚、氯仿）和反复冻融；体积分数０．２％甲醛溶液对病毒的血细胞凝集效价无影响；０．５％甲醛２４ｈ或０．１％甲醛４８ｈ处理后病毒完全失去感染性。用１．２５～１０．００ｇ／Ｌ胰蛋白酶处理病毒，其血细胞凝集性和细胞感染性随着浓度的增加而升高，血细胞凝集性则由作用时间的延长而降低２～８个滴度。当氯化镁浓度为０．０１０～０．０１５ｍｏｌ／Ｌ时病毒的血细胞凝集价最高，浓度为０．０５０ｍｏｌ／Ｌ时血细胞凝集价下降６个滴度，浓度大于０．１００ｍｏｌ／Ｌ时出现自溶现象。     

病毒与纳米技术

在多数人眼中，病毒就是危害人类健康或计算机安全的害群之马。然而，近些年来，伴随纳米技术的出现，己使得上述状况发生了改变，某些病毒已经能够为我所用，并有望在未来的微电子、医学等领域成为人们的得力帮手。     

我国部分地区新城疫病毒分子流行病学研究

将来自江苏、浙江、上海、福建、江西和新疆6省(市、自治区)的10株新城疫病毒(NDV)分离株经克隆纯化,用反转录PCR扩增其F基因9×102bp片段,测定序列,通过与国内外已发表的NDV F基因部分序列进行比较,测定的10个分离株分别属于Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ3个基因型.其中近年流行的基因Ⅲ型病毒与同属于该型的经典强毒F48E8的同源性较低,约为92%;明显小于近年流行的基因Ⅲ型毒株之间的同源性(＞99%);近年分离的NDVⅥ型毒株之间的同源性和Ⅶ型NDV毒株之间的同源性为92%-96%.从各毒株的分离时间来看,新基因型NDV毒株不断出现,而原有的NDV强毒也能分离到.     

贵州省鸡减蛋综合征病毒分离株的生物学特性鉴定

从贵州省出现产蛋下降等症状的鸡群中分离出１株病毒，命名为ＨＳ１。该病毒对鸭胚致死率达５５６％～６６７％；在尿囊液中产生高效价的红细胞凝集素，第７代鸭胚尿囊液的血凝效价达到２１５～１８；在ＤＥＦ单层细胞上生长良好，并引起明显的细胞病变，感染细胞的核内观察到嗜碱性包涵体；将分离毒株回归蛋用鸡复制出与自然病例相类似的临床症状，全部感染鸡都产生ＥＤＳ血清抗体；病毒呈球形粒子，直径７０～８０ｎｍ，无囊膜，对氯仿、乙醚不敏感；能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，不凝集哺乳动物的红细胞；病毒核酸类型是ＤＮＡ，不分节段，分子含有３３６ｋｂ。在交叉血细胞凝集抑制试验中，分离毒株对红细胞的凝集特性能够被ＡＶ１２７超免疫血清所抑制，而不与新城疫阳性血清、正常健康鸡血清发生交叉反应；在病毒中和试验中，ＨＳ１与ＡＶ１２７毒株能够发生交叉中和反应，显示它们具有相同的抗原关系。根据对病毒分离株的致病性、血凝谱、理化特性和血清学关系的鉴定，证明从贵州分离的ＨＳ１与国际标准毒ＡＶ１２７属于同一血清型，是１株ＥＤＳ病毒。