禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H重组亚单位设苗免疫效果的研究

将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H(OmpmH)的重组菌pGEX-ompmH/BL21大量培养,在最佳诱导条件下诱导表达,表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化,得到OmpmH基因的原核表达产物,将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗,用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡,首免后每周采血检测抗体,二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击.结果显示,OmpmH具有良好的免疫原性,能诱导鸡体产生特异性抗体,可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击,免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗.     

加味通腑汤对胃癌术后早期患者胃肠功能和营养状况的影响

目的 观察加味通腑汤联合肠内外营养对胃癌术后早期患者胃肠功能恢复和营养状况的改善作用。方法 将62例胃癌术后患者随机分为对照组与观察组，每组31例。在术后常规处理基础上，对照组给予肠内外营养支持，观察组在肠内外营养支持基础上给予加味通腑汤经鼻空肠营养管滴注。比较两组患者术后首次排气时间和首次排便时间，术前1 d、术后3 d和术后7 d前白蛋白（prealbumin，PA）、白蛋白（albumin，Alb）、血清总蛋白（total serum protein，TP）及血红蛋白（hemoglobin，Hb）水平，同时观察患者术后腹胀、恶心呕吐、肺部感染、腹腔感染、吻合口瘘等并发症发生情况。结果 与对照组比较，观察组患者术后首次排气时间和首次排便时间显著缩短（P＜0.05）；术后3 d，两组患者PA、Alb、TP、Hb均较术前1 d显著降低（P＜0.05）；术后7 d，两组患者PA、Alb、TP、Hb均较术后3 d显著升高（P＜0.05），且观察组患者PA、Alb、TP、Hb均明显高于对照组（P＜0.05）；观察组患者术后并发症的发生率明显低于对照组（P＜0.05）。结论 胃癌术后早期肠内外营养支持联合加味通腑汤小肠内滴注，可以促进胃肠功能恢复，改善营养状况，降低术后并发症的发生率。     

黄芪甲苷通过调控Keap1-Nrf2-ARE信号通路减轻PM2.5诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤

目的 探讨黄芪甲苷减轻细颗粒物2.5(particulate matter 2.5，PM2.5)所致肾小管上皮细胞氧化损伤的作用及分子机制。方法 将HK-2细胞分为5组：对照组（仅磷酸盐缓冲液处理）、模型组（200 μg/mL PM2.5处理24 h）、黄芪甲苷低剂量组（200 μg/mL PM2.5及10 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）、黄芪甲苷中剂量组（200 μg/mL PM2.5及100 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）、黄芪甲苷高剂量组（200 μg/mL PM2.5及200 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）。采用流式细胞术和TUNEL检测不同方法处理的HK-2细胞凋亡情况，采用EdU实验和CCK8实验检测细胞增殖情况，采用Western blot检测不同方法处理的HK-2细胞中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）-核因子红细胞相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)-抗氧化反应元件（antioxident response element, ARE）信号通路相关蛋白的表达水平。结果 流式细胞术和TUNEL染色结果显示，黄芪甲苷显著抑制PM2.5导致的肾小管上皮细胞凋亡，其抑制效果随黄芪甲苷浓度的增加而增加。CCK8检测结果和EdU细胞增殖检测结果显示，黄芪甲苷显著促进肾小管上皮细胞增殖，细胞活力随黄芪甲苷浓度的增加而增加。进一步检测显示，黄芪甲苷显著抑制PM2.5导致的肾小管上皮细胞活性氧和丙二醛水平升高，并显著促进超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平的升高。Western blot结果显示，与模型组比较，黄芪甲苷处理显著提高总Nrf2、核Nrf2、血红素氧化酶-1以及NAD（P）H醌脱氢酶1（NQO1）水平（P＜0.05）。结论 黄芪甲苷通过调控Keap1-Nrf2-ARE信号通路减轻PM2.5导致的肾小管上皮细胞氧化损伤。     

苏子降气汤辅助治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重69例临床观察

目的 观察苏子降气汤辅助治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重（acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD）患者的临床疗效。方法 将138例AECOPD患者随机分为试验组和对照组，每组69例。对照组给予西医常规治疗，试验组在西医常规治疗基础上给予苏子降气汤治疗。观察两组治疗前后中医证候评分、肺功能［1秒用力呼气容积（forced expiratory volume in one second，FEV1），用力肺活量（forced vital capacity，FVC）及FEV1/FVC］、血气分析指标［动脉血氧饱和度（arterial oxygen saturation，SaO2）、动脉血氧分压（arterial PO2，PaO2）、动脉血二氧化碳分压（arterial PCO2，PaCO2）］、血清炎症因子［降钙素原（procalcitonin，PCT）、白细胞介素-38（interleukin，IL-38）及超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）］和D-二聚体（D-Dimer，D-D）水平。结果 治疗后两组患者喘息、咳嗽、哮鸣、纳呆、咳痰及胸膈满闷评分均较治疗前显著降低（P＜0.05）；FEV1、FVC及FEV1/FVC均较治疗前显著增加（P＜0.05）；SaO2、PaO2均显著升高（P＜0.05），PaCO2显著降低（P＜0.05）；PCT、IL-38、hs-CRP、D-D水平均较治疗前显著降低（P＜0.05）。试验组咳嗽、纳呆、咳痰及胸膈满闷评分降低程度均显著大于对照组（P＜0.05）；FEV1、FVC及FEV1/FVC升高程度显著大于对照组（P＜0.05）；PaO2升高程度和PaCO2降低程度显著大于对照组（P＜0.05）；IL-38、hs-CRP水平降低程度均显著大于对照组（P＜0.05）。试验组疗效优于对照组（P＜0.05）。结论 苏子降气汤治疗AECOPD可有效抑制PCT、IL-38、hs-CRP等炎症相关因子生成，降低D-D水平，改善患者肺功能、血气分析指标及中医证候评分。     

寨卡病毒NS1蛋白在杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDSPAGE和Western-blot鉴定蛋白正确表达后,将其感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,将纯化后的ZIKV NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,进行血清特异性抗体效价检测。最终结果显示,获得了纯度较高分泌表达的ZIKV NS1蛋白,并且血清特异性抗体效价实验表明,纯化的ZIKV NS1蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,有很好的免疫原性。本研究为ZIKV疫苗和诊断试剂盒的研发奠定了重要的基础。     

Axonal injury in young pediatric head trauma: a comparison study of β-amyloid precursor protein (β-APP) immunohistochemical staining in traumatic and nontraumatic deaths

We tested the independent utility of β-amyloid precursor protein (β-APP) immunohistochemical staining as evidence of brain trauma in the deaths of young children. Blinded reviewers retrospectively reviewed immunostained brain tissues from homicidal deaths, age-matched control cases without evidence of trauma, as well as cases of sudden infant death syndrome (SIDS). The reviewers correctly identified five of the seven cases with documented inflicted head trauma. However, one of seven age-matched control cases and one of 10 SIDS/sudden unexplained death in infancy (SUDI) cases demonstrated staining patterns similar to those seen in cases of inflicted trauma. We discuss these cases and the circumstances surrounding them with the intent to explain the difficulties associated with immunohistological interpretation of axonal injury. Although the utility of β-APP is quite powerful if not confounded by global hypoxic-ischemic injury, ultimately, β-APP studies should be only one piece of information in the determination of cause and manner of death.     

小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能

采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。     

埃博拉病毒苏丹型核蛋白的原核表达及纯化

将目的基因NP亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建了重组表达载体pET-28(a)-S-NP,然后用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,并利用IPTG诱导蛋白表达。将表达的蛋白利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,重组质粒经双酶切后可得到与目的片段长度相同的特异性条带;测序结果显示此特异性条带与参考序列完全匹配,没有突变。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表达正确。结果表明,成功构建了重组表达质粒,且表达产物正确。     

Determination of an effective housekeeping gene for the quantification of mRNA for forensic applications

The potential application of mRNA for the identification of biological fluids using molecular techniques has been a recent development in forensic serology. Constitutively expressed housekeeping genes can assess the amount of mRNA recovered from a sample, establish its suitability for downstream applications, and provide a reference point to corroborate the identity of the fluid. qPCR was utilized to compare the expression levels of housekeeping genes from forensic-like body fluid stains to establish the most appropriate assessment of human mRNA quantity prior to profiling. Although variability was observed between fluids and individuals, results indicated that beta-2 microglobulin exhibited the highest expression for all body fluids examined and across donors. A one-way analysis of variance was performed for housekeeping gene variability between donors (at the α, 0.05, significance level), and the results indicated significant differences for semen, vaginal secretions, and menstrual blood.     

实验性大鼠脑震荡后C—FOS蛋白表达的研究

目的探讨原癌基因c-fos的表达和脑震荡性损伤的关系,同时寻找脑震荡后法医病理学的诊断依据。方法55只实验大鼠随机分为脑震荡组和对照组。用免疫组织化学SABC法观察大鼠脑震荡后脑内C-FOS蛋白表达的变化规律。结果对照组大鼠未见C-FOS蛋白的表达。然而脑震荡组损伤后15min即可在神经细胞观察到C-FOS蛋白的表达,随着损伤后经过时间的延长,表达C-FOS蛋白的细胞数及范围逐渐扩大,损伤后6h表达达高峰,直至损伤后96h均有大量C-FOS蛋白表达。结论 c-fos原癌基因的检测可成为诊断脑震荡和推断脑震荡后经过时间的一项敏感指标。