犬瘟热病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病毒最低检出量为80copies/μL,是常规RT-PCR的100倍;与其他犬类病毒不发生交叉反应;组内、组间变异系数均小于5%。对收集的67份临床样品进行检测,阳性检出率为64.2%,而常规RT-PCR的阳性检出率为44.8%。研究结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR具有良好的敏感性、特异性和稳定性,为犬瘟热的早期诊断提供了技术手段。     

非洲猪瘟TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的快速诊断方法,本研究根据ASFV SY18株p17蛋白的编码基因D117L的保守序列设计并合成引物和探针,建立了基于ASFV p17蛋白的编码基因D117L的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的C_t值与标准品在1×10^9~1×10^1copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.192,检测下限为10 copies/μL,且与其他能引起相似症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.920 7%,重复性好。此方法可用于ASF的早期诊断和ASFV快速检测。     

人体脑组织RNA表达水平与早期PMI的相关性

目的探讨人体脑组织多种RNA指标的表达水平与早期死亡时间(PMI)的相关性。方法选取12例已知PMI(4.3~22.5 h)的个体,提取脑组织总RNA。选取8种常用RNA指标(β-actin、GAPDH、RPS29、18S rRNA、5S rRNA、U6 snRNA、miRNA-9、miRNA-125b),通过实时荧光定量PCR技术检测其在脑组织中的表达水平。运用geNorm软件筛选早期PMI表达稳定的内参指标,并分析其表达水平与相关因素(年龄、性别、死亡原因)的关系。运用R软件将内参标准化的RNA指标代入前期研究建立的数学模型推断PMI,计算推断PMI的误差率以验证模型精确性。结果 5S rRNA、miRNA-9和miRNA-125b表达稳定,其表达水平与年龄、性别、死亡原因无关。利用β-actin推断PMI的误差率为24.6%,GAPDH为41.0%。结论 5S rRNA、miRNA-9和miRNA-125b在死亡早期表达稳定,适合作为人体脑组织的内参指标。β-actin表达水平与PMI相关性良好,有望成为推测早期PMI的辅助指标。     

犯罪现场调查新利器

影视作品中,刑侦专家到达犯罪现场后,只要掏出一瓶液体喷洒在相应区域,就能轻松发现现场中遗留的血迹。诚然,这种名为鲁米诺的化学试剂是刑侦领域内用以显现犯罪现场中潜在血迹的主要方式之一,但这一技术方法在现实世界中远不如影视作品中描绘的这么神奇。各方因素都可能对刑侦专家在犯罪现场的判断造成干扰与误导。为此,刑侦专家也在不断努力,以寻求一种能够替代鲁米诺的潜在血迹显现技术。目前,一种名为"红外显影技术"的新科技已经问世。     

非常态下疑似血迹的快速定性研究

利用UV-2450型紫外可见分光光度计的积分球附件,对几种非常态下血迹进行检验,纱布上热水浸泡自来水水洗过的血迹光谱有3个波谷分别位于280nm、414nm、540nm^577nm处,4个波峰分别位于250nm、310nm、372nm和510nm处,阳光、紫外光照射的血迹280nm、414nm、540nm^577nm处存在波谷,250nm、310nm、372nm和510nm处存在波峰,亚硝酸钠化的血迹较新鲜血迹在250nm、280nm、310nm和414nm处波峰波谷位置没有差异,560nm处波峰不明显,535nm^570nm处几乎平滑成一处波谷,而在630nm处出现高铁血红蛋白特定波谷。紫外可见分光光度计可以快速无损对非常态血迹进行定性。     

打印机打印法变造文件的检验

打印机打印法变造文件在检验中按照确定变造事实、分析变造方法、确认被变造原文字三个步骤,综合运用透射光或侧光观察、荧光检验、综合评断等方法进行分析检验。现代化办公用品、设备在侦破犯罪案件上的运用,使得实际工作中文件检验的工作对象不断发展、变化,这对文检人员提出了新的要求,即要具备坚实的理论基础,又要在工作中不断积累、不断学习、不断总结,从理论和实践上寻找解决新问题的新方法、新手段,为侦破刑事案件、澄清法律事实,发挥更大作用。     

常见针叶木木屑浸提物的紫外光谱分析

对不同树种及不同产地、同一树种针叶木木屑的浸提物进行了紫外光谱分析。结果表明,不同树种针叶木木屑浸提物的紫外光谱图中,吸收峰的峰数、峰位、峰形有一定的差异,据此可对常见针叶木木屑进行大类的区分;木屑浸提物的一阶导数光谱图中,正、负峰的峰数、峰位、峰形及振幅值的比值差异明显,据此可以对不同树种、同树种不同产地的针叶木木屑样品进一步进行鉴别。     

2021—2022年我国鸡马立克病的流行病学调查

为了解我国规模化养殖场中马立克病病毒（Marek’s disease virus,MDV）的感染和免疫状态,采用四重TaqMan探针荧光定量PCR对采自我国11个省（自治区、直辖市）的19个养殖企业的94个鸡群的羽毛囊和环境样本进行MDV疫苗毒和野毒检测。结果显示,大部分养殖场存在野毒感染,其中山东地区样本平均阳性率较高为13.6%。不同省市白羽肉鸡、黄羽肉鸡和蛋鸡样本的野毒平均阳性率分别为8.3%、3.9%和7.2%。在不同日龄蛋鸡样本中,1～7、8～14和50～80日龄野毒阳性率较高,分别为12.6%、13.8%和14.3%。此外,单独免疫CVI988疫苗或以火鸡疱疹病毒（HVT）为载体的基因工程重组疫苗（rHVT）以及同时免疫这两种疫苗,均能降低MDV野毒的阳性率,且同时免疫两种疫苗鸡群的野毒阳性率最低。对不同免疫方式下疫苗在羽毛囊中复制情况的检测结果显示,在3～4周龄时,单独免疫CVI988疫苗的平均阳性率为91.4%,单独免疫rHVT疫苗的平均阳性率为58.2%,同时免疫两种疫苗时,CVI988疫苗和rHVT疫苗的平均阳性率分别为51.8%和36.9%,提示鸡场应切实做好马立...     

荧光标记STR分型技术检验腐败组织基因型

探讨腐败组织荧光标记STR分型检测技术的应用价值。应用含12个STR基因座及一个性别基因座的2个荧光标记的复合扩增系统,对40例1～6周的腐败肌肉提取的DNA进行扩增,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,PE377测序仪分析基因型。所检测样本在12个STR基因座均扩增出特异性谱带,并可判定其基因型。荧光标记STR检测技术对腐败组织分型可靠,在实际检案中具有较高的应用价值。     

二组分混合DNA样品STR图谱解释

对混合样品STR图谱的结果进行解释。实验模拟二组分DNA混合样品 ,复合扩增荧光检测 10个基因座 ,比较混合样品谱带 ,计算等位基因峰面积比。结果发现 :二组分DNA混合样品的等位基因数增加 ,样品的混合比例不同就出现峰面积的不平衡。在等位基因峰面积比值与样品组分混合比例接近时 ,可由峰面积比值推断混合样品的混合比例。在混合比例为 1∶2 0时 ,基本上检测不到来自少量混合成分的等位基因 ,表现为单一组分图谱 ;在混合比例为 1∶10时 ,含量低的组分的等位基因峰面积接近与主要组分的“Stutter”峰面积 ,与来自主要组分的等位基因峰面积差异很明显。能检出混合样品中少量成分等位基因的最高混合比例为 1∶10