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采用差速离心和蔗糖递度超速离心法提纯了鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)H_(9307)株,并用SDS-PAG电泳技术分析其结构蛋白,该病毒主要由8条多肽组成(VP_1~VP_8),它们的分子量分别是145、130、115、72、70、65、42、39KD。用Westernhlotting免疫印迹技术分析这些多肽的免疫活性,与同源病毒株抗血清出现5条可见的反应带,分别是VP_1、VP_2、VP_4、VP_5和VP_7;与异源病毒抗血清反应只出现两条可见的阳性反应带,分别是VP_1和VP_2。 相似文献
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应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ELISA及变性与非变性SDSPAGE等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含2mol/L尿素,160μmol/LPEG4000,1.0mmol/L0.1mmol/LGSHGSSG的pH9.0的TrisHCl缓冲液,蛋白浓度为2~5mg/mL,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体、多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上述透析液,蛋白浓度0.1mg/mL,以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Sepharose6FF分子筛凝胶层析,出现2个主峰,收集有免疫活性的第1峰进行DEAESepharose离子交换层析,用含50g/LNaCl、pH9.0的TrisHCl缓冲液洗脱,亦出现2个主峰,收集有免疫活性的第1峰。SDSPAGE显示该峰为单一蛋白条带,蛋白纯度大于90%。夹心ELISA检测免疫活性,每1mg蛋白的效价大于6×105。 相似文献
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鸡病毒性关节炎(AVA)临床上主要表现为关节炎、腱鞘炎和生长发育停滞或饲料利用率降低,死亡率为5%~20%。该病最早由Dalton和Henry(1967)在英格兰报道,目前已成为危害全球养鸡业的一种重要传染病。我国是在80年代末发现进口鸡群中存在该病,并从病鸡关节内分离到病毒性关节炎病毒(AVAV)。鉴定AVAV的方法主要是病毒形态、理化特性、中和试验等,这些方法比较可靠,但操作比较复杂,周期也较长。为了寻求快速鉴定AVAV的新途经,本试验应用SDS──PAGE和免疫印迹术分别检测病毒核酸和蛋白多肽,从分子水平对AVAV进行鉴定… 相似文献