应用单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养中的猪瘟兔化弱毒

应用2种针对不同抗原决定簇的抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体建立了检测细胞培养中猪瘟兔化弱毒的ELISA抑制试验。对20份不同批次的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物的测定结果表明,该法可较准确地反映病毒在细胞培养中的产量;将病毒培养物置4℃、25℃和37℃3天、超声裂解、冻融3次和6次等不同方法处理对试验结果无显著影响(P>0.05);通过与兔体接种试验比较,探讨分析了猪瘟兔化弱毒疫苗生产工艺中的问题。     

免疫吸附去除猪瘟免疫血清中非相关抗体

当用聚乙二醇沉淀法从猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物上清液制备部分纯化抗原,进行猪瘟免疫检测时,因免疫血清中存在抗牛睾丸细胞和抗牛血清成分的抗体,会产生非相关性反应而 干扰对抗病毒特异性抗体的检测。在血清稀释液中加入牛睾丸细胞培养物抗原可有效地抑制这种非相关抗体引起的反应,保证猪瘟免疫抗体检测的特异性。     

猪瘟ELISA抗体与免疫保护力的相关性研究

用攻毒试验对猪瘟ELISA抗体与免疫保护力的相关性进行了研究,结果表明,80倍稀释血清ELISA OD值>0.3的疫苗注射猪,攻毒100％保护;0.30≥OD值>0.20的疫苗注射猪,攻毒75％保护;OD值≤0.20时,若为非疫苗注射猪(母源抗体),则攻毒不保护;若为疫苗注射猪,则仍有少数可以保护。从而进一步证实,应用HRP-SPA-ELISA不仅可以评价疫苗免疫效果,而且可以监测群体免疫水平,估测群体保护率。     

猪瘟病毒单克隆抗体的研制和应用——抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体的纯化

采用硫酸铵3次沉淀法和辛酸-硫酸铵法对4个IgG亚类(IgG_1,IgG_2a,IgG_2b,IgG_3)单克隆抗体腹水进行了纯化,以间接ELISA检测纯化前后样品的活性,经十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化前后样品的纯度。结果表明,两种方法均可较为有效地去除腹水中的杂蛋白,获得用于诊断目的的单克隆抗体纯品。硫酸铵3次沉淀法适用于纯化所有IgG亚类的单克隆抗体,而辛酸-硫酸铵法不适于IgG_3亚类。     

牛嗜肝DNA病毒的研究——利用RIA和ELISA在牛奶中检出HBsAg相关抗原

分别利用人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）放射免疫测定（ＲＩＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对某奶牛场４０份牛奶样本进行了测定，结果在样本低稀释时有５份呈现阳性或可疑。肯定了我国牛群中存在新的嗜肝ＤＮＡ病毒种。牛奶中的ＨＢｓＡｇ相关性抗原与人ＨＢｓＡｇ的交叉反应性较低，这同其它哺乳动物嗜肝ＤＮＡ病毒与人乙型肝炎病毒的低同源性相一致。