猪囊虫病基因工程疫苗的生产工艺研究

从重组抗原的表达、复性与纯化、疫苗的配制及疫苗的质量控制等4个方面对猪囊虫病基因工程疫苗的生产工艺进行了探索.确定重组抗原表达的最佳培养液为LB磷酸盐培养液,诱导剂为10g/L乳糖,并根据接种量、溶解氧、罐压、发酵时间等对发酵结果的影响,确定了发酵培养的最佳条件.在重组抗原的复性与纯化方面,工程菌的裂解条件为先用溶菌酶感作再用超声波破菌,超声强度为240W 5次;包涵体的纯化先采用低浓度的尿素洗涤2次,再以5 g/L Triton X-100洗涤1遍,包涵体纯度可达50%以上;重组抗原的复性以静置缓慢透析或分步稀释法为佳,复性液为含2 mol/L尿素、160μmol/L PEG 4000、1.0 mmol/L GSH、0.1 mmol/L GSSG的pH 9.0 50 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA缓冲液;重组抗原的纯化采用分子筛凝胶层析和离子交换凝胶层析的色谱组合,重组抗原的纯度达90%以上.此外对该疫苗进行了中试生产,共生产7批,产品全部合格,表明该生产工艺稳定,可批量化生产.     

一株脑源性鸡呼肠孤病毒的鉴定

一株脑源性鸡呼肠孤病毒的鉴定唐雨德，翟春生，周宗安（南京军区军事医学研究所２１０００２）我们曾从后肢麻痹的患鸡脑组织中分离到一株病毒，根据其理化特性和某些生物学特性，当时疑为环状病毒。为了进一步确定其分类地位，我们又对其核酸电泳型、病原性和免疫学特性...     

牛腹腔丝虫微丝蚴体外保存试验

牛腹腔丝虫微丝蚴分布于牛外周血液中,经蚊虫传播能引起马、绵羊和山羊的脑脊髓丝虫病。为了查明牛腹腔丝虫微丝蚴体外存活的条件,我们做了微丝蚴体外保存试验。 (一)材料和方法 1.带微丝蚴牛(简称带虫牛):为从福建省漳州地区购买的小黄牛,耳静脉血微丝蚴密度为131条/60mm~3。 2.微丝蚴的浓集:以3.8％枸橼酸钠抗凝,无菌采取带虫牛颈静脉血,2000rpm离心20分钟,分离血浆备用。沉淀部分加灭菌蒸馏水至原血量,混合均匀,使其溶血,2000rpm离心10分钟,弃上清,如此反复2～3次,最后加生理盐水离心一次,沉淀物和下部液体即为微丝蚴浓集液。浓集液内加青、链霉素,使每     

人畜共患病(续)

病 名I 易感动物D 传染源Z 临床主要表现 防治措施20.口蹄疫I世界各地。多呈’偶蹄兽,I病畜B可通过直接D病畜表现为发热,口D 无特效疗法 g地方性流行或大 人也能感BD接触问按接1腔粘膜、蹄部和乳房2 注射口蹄疫疫 ]流行,在人多呈Z染发病1 触、消化道B皮肤上形成水泡。幼]茁 Q散发无明显的季7【I呼吸道、损Ik常发生出血性肠炎B人与病畜接触 0节性IQ 伤的粘膜和I和心肌炎,死亡率很9时注意个人防 Ill戌胜。。高。病人表现为发热N Z’IZ—一—Z 口腔、唇、舌和四肢皮】- ISJ 肤上发生水泡和糜烂,【 l:11一般经过良好。lZI.流行性I…     

人畜共患病

兽医学是人类医学与生物学之间的重要桥梁,随着科学的发展,兽医学与人类医学的关系日益密切。两门学科互相渗透,发展出一门边缘学科——兽医公共卫生学。这是利用兽医学的知识、技术和资源直接为保护和增进人类健康服务的一门综合性学科。其中包括兽医食品卫生、环境保护、人畜共患病的防制、比较医学和基础医学研究等项内容。随着畜牧业的迅速发展和人类对畜产品需求量的增加,人畜共患病的防制与研究已成为兽医公共卫生领域的一项重要任务。联合国世界卫生组织( WHO)和粮农组织(FAO)于1950年成     

应用纯化抗原对流免疫电泳技术诊断马脑脊髓丝虫病的研究

马脑脊髓丝虫病是由指状丝虫(Setaria digitata)的童虫引起的疾病。本病对马匹危害严重。关于免疫学诊断方法,国外至今未见报道,国内已报道的方法有皮内试验和直接凝集试验等。但都出现不同程度的假阳性和假阴性结果。许多研究表明,在丝虫科各虫种之间及丝虫与其它线虫之间存在共同抗原成分。Dissanayake等应用牛腹腔指状丝虫成虫冷浸液提取物作为诊断人班氏丝虫病的抗原,高桥顺治等应用犬恶丝虫成虫冷浸液提取诊断人班氏丝虫病的特异抗原,都取得了满意结果。我们在应用对流免疫电泳技术诊断本病的研究中亦发现成虫冷浸抗原(粗抗原)能与许多健马血清发生反应,假阳性率高达     

左旋咪唑擦剂预防马脑脊髓丝虫病

1982～1984年,我们应用左旋咪唑擦剂,进行预防山羊和长爪沙鼠因牛腹腔指状丝虫感染导致脑脊髓丝虫病的实验研究。通过~3H-LMS皮涂大鼠药代动力学研究证实,左旋咪唑擦剂具有抗牛腹腔指状丝虫感染和预防脑脊髓丝虫病的长效作用。1985年5～10月,又应用此法进行对马预防实验观察,取得满意效果。     

马的血型

人类血型的研究开始于1901年,当时正在维也那从事研究工作的Karl、Lansteiner为了诊断肺炎病人,把血液分成红血球和血清,观察其反应,发现有被某一血清凝集的红血球和不被其凝集的红血球,而且有个体间的差异。从此开始了对人血型的研究。第二年开始研究马的血型。以后陆续发表了对其它家畜血型的研究报告。因此,家畜血型的研究已有很长的历史。但是,在1954年以前国际上还没有一个统一的家畜血型学术组织。1954年欧洲一些     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

生产猪囊虫病疫苗用SOA工程菌种的稳定性观察

猪囊虫病基因工程疫苗是预防猪囊虫病的一种新型生物制剂,由猪带绦虫六钩蚴重组抗原与ＩＳＣＯＭ基质结合而成,目前已进入区域性试验阶段,有望进一步推广应用。为了适应该疫中图分类号　Ｓ８５８．２８５．９收稿日期　１９９９－０２－０１苗扩大生产及确保生产用菌种的稳定性,我们对ＳＯＡ工程菌进行５２代人工传代和不同条件的保存试验。１　材料与方法１．１　菌种　ＳＯＡ工程菌由翟春生等（１９９７）构建,含猪带绦虫六钩蚴保护性抗原基因,原核表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ２质粒含氨苄青霉素（Ａｍｐ）抗性和ｔａｃ启动子,宿主菌…