猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。     

马病毒性动脉炎和马鼻肺炎抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

以基因重组抗原包被96孔板,Eu3+标记兔抗马IgG,建立了马病毒性动脉炎和鼻肺炎抗体的时间分辨荧光免疫分析检测方法,对其特异性、灵敏性、稳定性进行了分析,并与进口ELISA试剂盒和微量血清中和试验进行了比较。结果显示,该方法交叉反应不明显,特异性好,灵敏度高于ELISA方法;该方法的批内和批间变异系数分别为2.68%～4.43%和4.21%～7.25%,Eu3+标记物可稳定保存5个月以上。证实,建立的马病毒性动脉炎和马鼻肺炎抗体的时间分辨荧光免疫分析检测技术灵敏度高,特异性和稳定性好,具有很好的应用前景。     

应用多重PCR检测和区分3个型的马疱疹病毒

针对马疱疹病毒(EHV)的EHV-1、EHV-2和EHV-4糖蛋白B基因序列,设计、合成了3对特异性引物进行多重PCR,不仅可以在数小时内分别检测这3个型的EHV,而且在同一反应系统内可以清晰地区分EHV-1、EHV-2和EHV-4,其PCR产物大小分别为226、3335、70bp,符合预期的片段大小,序列分析证实与已发表的序列一致;该检测方法的灵敏度达到103TCID50;分别从血清学阳性但病毒分离为阴性的1匹进口马组织样品和一些出口前检疫马的鼻咽样品检测到EHV-1和EHV-4特异性核酸。