猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。     

基于DNA甲基化推断年龄的建模方法与影响因素

基于人体组织或体液进行年龄推断是法庭科学的一项重要任务。DNA甲基化状态随年龄变化具有一定的规律,可用于推断个体年龄,因此,发现特定的DNA甲基化位点并开发新的年龄推断模型具有重要意义。目前已有研究利用DNA甲基化状态随年龄发生变化的规律开发出用于推断年龄的统计模型,较常使用的有多元线性回归模型、多元分位数回归模型、支持向量机模型、人工神经网络模型和随机森林模型等。此外,影响DNA甲基化水平的因素较多,如甲基化的组织特异性。本文拟对这些基于DNA甲基化推断年龄的建模方法 及影响因素进行综述,以期为建立年龄推断模型提供参考。     

镜下单片状头屑DNA提取分型法与EZ-tape法的比较

目的改进常规头屑类样本的EZ-tape提取分型方法,借助显微镜采集单片状头屑,提高样本利用率、降低漏检率,并减少混合分型结果比例。方法采用EZ-tape脱落细胞粘取器和透明胶带粘取2名志愿者轮流佩戴的帽子内侧,EZ-tape法遵循传统方法直接提取DNA,镜下单片状头屑DNA提取分型法(简称"单片头屑分析法")则借助显微镜分拣出透明胶带中的单片状头屑。两种方法均分别进行持续振荡和静置消化。所有样本均采用Chelex-100法提取DNA,扩增及电泳后获得STR分型。比较EZ-tape法及单片头屑分析法所获的STR分型结果。结果 EZ-tape法所获分型中11份(45.8%)样本发生漏检,仅获得单一来源的分型结果,10份(41.7%)样本为混合分型结果,其中6份样本有等位基因插入或丢失。单片头屑分析法有12份样本获得了与志愿者一致的单一来源分型结果,仅2份样本获得混合分型结果。振荡处理的分型准确数高于静置消化(P0.05)。结论 DNA提取过程中进行振荡有利于DNA的释放。单片头屑分析法获得单一来源STR分型成功率较高,样本漏检率低,可作为法医临案工作中头屑类特殊检材的特定样本采集方式。