桃红四物汤多糖的结构分析及对缺血性脑卒中大鼠的抗炎作用

目的 探究桃红四物汤多糖的结构特征以及其对缺血性脑卒中大鼠的抗炎作用，为后续药效学研究提供基础。方法 采用水提醇沉法提取桃红四物汤多糖，苯酚—硫酸法测定多糖的总糖含量，凝胶渗透色谱测定桃红四物汤多糖的分子量，分析其单糖组成及红外吸收特征。采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型，24 h后进行神经功能评分，将大鼠随机分为7组：假手术组，模型组，桃红四物汤多糖低、中、高剂量组，桃红四物汤组和尼莫地平组。给药7 d后采用Berderson评分进行神经功能评分；TTC染色法检测脑梗死率，ELISA法检测血清白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平，苏木精—伊红染色观察脑组织病理损伤情况；免疫组织化学法和Western blot检测脑组织中炎症因子的表达水平。结果 桃红四物汤多糖中总糖的含量为75.25%，分子量为2.47×104Da，是由甘露糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成的杂多糖。红外光谱结果显示,桃红四物汤多糖的结构中有多糖的特征吸收。动物实验结果表明，桃红四物汤多糖干预后，大鼠脑组织损伤得到改善，神经功能评分和脑梗死率有不同程度的下降，血清和脑组织中IL-6、IL-1β和TNF-α的水平也明显降低。结论 桃红四物汤多糖通过抑制炎症反应发挥对缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用。     

桃红四物汤中5种主要成分在脑缺血再灌注模型大鼠体内组织分布的研究

目的 研究脑缺血再灌注模型大鼠在灌胃桃红四物汤 （Taohong Siwu Decoction，THSWD）后，5种主要活性成分（藁本内酯、苦杏仁苷、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸）在体内组织分布的差异和规律。方法 采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，然后再灌注24 h建立脑缺血再灌注大鼠模型；将模型复制成功的大鼠灌胃THSWD（50 g/kg）后，于不同时间点采集组织（心、肝、脾、肺、肾、脑），样品处理后采用UPLC-MS技术检测各组织中待测成分的含量。结果 各成分在模型大鼠各组织中分布广泛，在肝、肾组织中浓度较高，其中藁本内酯在脑组织中有较高浓度；苦杏仁苷在肺部具有组织分布特异性；芍药苷、羟基红花黄色素A在大鼠肝、脾、肺组织具有较高分布比例，阿魏酸在脑组织中未检出。结论 THSWD中5种主要活性成分在各组织中分布广泛，各组织不同时间点的分布趋势也存在较大差异。     

桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的保护作用及机制

目的 观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用，以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法 建立左侧大脑中动脉阻塞模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度，行为学实验观察大鼠的运动神经功能，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色法观察大鼠脑梗死面积，苏木精—伊红染色观察大鼠缺血侧脑部皮质组织病理变化，干湿法测定脑含水率，伊文思蓝（Evans blue,EB）灌注染色法检测血脑屏障通透性，透射电子显微镜观察血脑屏障紧密连接超微结构，免疫组织化学法检测脑组织紧密连接蛋白occludin、胞质附着蛋白-1(zona occludens-1, ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9, MMP-9)表达水平。结果 大鼠神经功能损伤程度与运动神经功能经桃红四物汤给药后呈现改善的趋势。TTC结果显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑梗死面积明显减少（P＜0.05）。苏木精—伊红染色显示，与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑皮质组织神经元细胞质浓缩，核固缩、分裂或溶解，细胞排列紊乱，层次不清晰的情况得到改善。与模型组比较，桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑含水率、脑出血性转化程度以及EB渗出量显著降低（P＜0.05）。免疫组织化学检测结果显示，与模型组比较，桃红四物汤组大鼠脑梗死区occludin、ZO-1蛋白表达水平显著升高，MMP-9表达水平显著降低（P＜0.05）。透射电子显微镜观察发现，模型组大鼠血脑屏障紧密连接明显受损，桃红四物汤组和尼莫地平组大鼠血脑屏障紧密连接损伤明显改善。结论 桃红四物汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能，缩小梗死面积及减轻脑水肿。其作用机制可能与改善血脑屏障紧密连接超微结构，减少紧密连接相关蛋白表达，进而降低血脑屏障通透性有关。     

桃红四物汤干预后的血小板外泌体对脑缺血再灌注模型大鼠的血管新生作用

目的 探究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)干预后的血小板外泌体（platelet-derived exosomes，PLT-Exos）对脑缺血再灌注大鼠的血管新生作用。方法 采用超高速差速离心法提取PLT-Exos，透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米微粒示踪分析检测外泌体粒径分布,蛋白质免疫印迹法检测外泌体标志蛋白表达水平；建立大鼠脑缺血再灌注模型，将所提取的经THSWD干预后的PLT-Exos通过尾静脉注射到模型大鼠体内，再通过脑血流量测定、苏木精－伊红染色、免疫荧光染色，验证THSWD-PLT-Exos对大鼠脑缺血再灌注模型血管新生的治疗作用。结果 提取的PLT-Exos表征符合典型。THSWD-PLT-Exos可显著提升脑缺血大鼠脑部的血流量，改善海马区损伤，具有良好的血管生成和神经保护作用。结论 THSWD-PLT-Exos对脑缺血再灌注大鼠损伤有良好的血管新生作用。