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为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以四种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示,当标准品稀释度为1×102~1×1010 copies/μL时,四种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.985。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对堆型艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA-Ea3-1E免疫的SPF雏鸡脾中ChIL-12mRNA和ChIL-18 mRNA的相对表达量进行检测,免疫组ChIL-12mRNA和ChIL-18mRNA的相对表达量均极显著高于空白对照组(P<0.01)。研究结果为ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的定量分析提供了技术平台。 相似文献
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加盟被骗
张英(化名)怎么也没想到,自己第一次做生意就被骗了.
张英是吉林省吉林市的一位普通家庭妇女,因无业在家,一心想做点生意贴补家用.她是在电视里知道北京精英科技公司(化名,以下简称精英公司)的,这是一家从事加盟连锁业务的公司,其在广告中大肆宣传自己经销的"精英"品牌拥有者美国精英国际企业集团已经经过几十年国际市场的探索与发展,已经成为世界三大玻璃功能膜核心制造厂商,其"精英"系列玻璃功能膜年产量及销量占据着全球玻璃贴膜年总产量42%的份额,产品行销美洲、欧洲、亚洲等数十个发达国家,"精英"系列玻璃膜堪称目前世界上工艺最先进、科技含量最高的产品.凡是加盟精英公司的加盟商每年纯利润都在十万元以上,等等. 相似文献
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为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交(SSH)法,以APP血清7型DNA作为测试方(Tester)、APP血清1型DNA作为驱动方(Driver),进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对。结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%~100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究。首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础。 相似文献
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