黄羽肉鸡胰蛋白酶原的原核表达及其在体内分布的研究

本试验对胰蛋白酶原(trypsinogen,TRY)进行原核表达并对其诱导条件、纯化条件进行优化,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗TRY多克隆抗体。利用免疫组织化学法、PCR技术和荧光定量PCR技术分析TRY在不同日龄雌雄黄羽肉鸡体内的分布情况。结果显示,诱导表达重组蛋白的最佳诱导条件为37℃200 r/min,0.8 mmol/L IPTG,诱导时间为24 h;亲和层析法纯化蛋白以160 mmol/L的咪唑洗脱效果最好;TRY基因在黄羽肉鸡体内的组织分布具有广泛性,但雌雄黄羽肉鸡各组织的TRY表达量存在差异;TRY基因从1日龄即随着黄羽肉鸡的生长发育表达量也随之增加,在14日龄时,其表达量极显著提高;胰腺组织TRY基因具有性别差异性,在14、35和56日龄,雄性黄羽肉鸡的表达量高于雌性的表达量,差异显著(P0.05)。上述研究结果可为进一步研究肉鸡胰蛋白酶原结构与功能、肠道消化功能的早期发育过程提供参考。     

番鸭呼肠孤病毒乳胶凝集试验检测方法的建立

建立了用纯化的抗番鸭呼肠孤病毒(DRV)抗体致敏乳胶检测DRV抗原的方法。通过试验,确定抗体致敏乳胶的最佳浓度为1∶10(IgG蛋白浓度为0.424 2 mg/mL),最佳致敏温度为37℃,最佳致敏时间为120 min。用所建立的方法对人工感染的1 日龄雏番鸭30 只进行粪便检测,结果表明,感染后第3 d粪便中即可检测到病毒,直至人工感染鸭全部死亡都可从粪便中检出病毒抗原;对同样人工感染的30只1日龄雏番鸭的心、肝、脾病料用所建立的方法检测,结果表明,感染后第4 d,2/3番鸭脾病料检出阳性;感染后第5 d,2 只死亡鸭中有1 只肝病料检出阳性,脾病料2只都呈阳性;此后的病死鸭脾和肝病料均为阳性,而心则未检出阳性。     

番鸭呼肠孤病毒诱导免疫抑制机制的初步研究

以5日龄健康番鸭为研究对象,人工感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV),采用组织化学和免疫学技术检测外周血淋巴细胞转化率,T淋巴细胞ANAE阳性率,IL-2和IL-6含量,脾和腔上囊中浆细胞数量的变化.结果显示,MDRV感染组番鸭外周血淋巴细胞转化率和T淋巴细胞ANAE阳性率均极显著低于对照组(P<0.01),腔上囊和脾中浆细胞数量在攻毒后第10～20 d显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),血清中IL-2和IL-6含量在攻毒后第10 d均极显著低于对照组(P<0.01).结果表明,MDRV感染能较快且持久地降低机体细胞的免疫功能,破坏免疫器官中的浆细胞,影响体液免疫功能,还影响免疫分子IL-2和IL-6的形成,进一步干扰机体免疫功能的发挥,从而容易诱发继发感染,增加死亡率.