口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。     

乳杆菌XF-9301生长特性研究

乳杆菌ＸＦ┐９３０１生长特性研究１）伏小平（甘肃农业大学动物医学系兰州７３００７０）乳杆菌是健康动物肠道的正常菌群之一，对动物宿主有益无害，且对致病性大肠杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌等均有抑制作用，并有促进动物生长，提高增重的作用。笔者...     

鸡源肠道乳杆菌的分离与鉴定

鸡源肠道乳杆菌的分离与鉴定１）伏小平（甘肃农业大学兰州７３００７０）乳杆菌是革兰氏阳性无芽胞厌氧杆菌，是动物肠道内的一种重要生理性细菌。其作用是在肠道内产生嗜酸菌素、乳杆菌素、过氧化氢等，对致病菌有杀灭和抑制作用；并生成乳酸，防止肠道内有毒胺和氨的生...     

口蹄疫病毒的纯化及鉴定

通过PEG 6 0 0 0沉淀 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法提取纯化了口蹄疫完整病毒粒子 (FMDV ) ,经 30g/L磷钨酸负染后电镜观察 ,FMDV 14 6S为中心黑染的圆形颗粒 ,与中心透亮的FMDV空衣壳有明显区别 ,SDS PAGE和Western blotting试验结果表明 ,FMDV 14 6S电泳出现VP1、VP2、VP3三条结构蛋白带 ,其中VP1和VP3与阳性血清发生反应出现 2条明显的条带。     

一株鸵鸟源新城疫病毒的分离及其分子生物学特性

从2005年山东省某鸵鸟饲养场发病鸵鸟分离出1株新城疫病毒,命名为SD01,采用一步法RT-PCR扩增了该分离株F基因的重要功能区片段(535 bp),并将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列测定,研究了其分子生物学特性。序列分析结果表明,该分离株F基因裂解位点的氨基酸组成与NDV强毒株的特征性结构一致(112R-R-Q-K-R-F117);遗传进化分析表明,该分离株在分类地位上属于基因Ⅶd型,与目前报道的鸵鸟源和其他禽类NDV毒株基因型一样,说明目前我国流行的仍然是NDV基因Ⅶ型。提示,对于鸵鸟新城疫的防治,除进行疫苗免疫之外,采取生物安全措施也是非常重要的。     

应用肠道微环境重组技术提高家禽抗病力的研究——乳杆菌对致病性大肠杆菌的体外拮抗作用

应用肠道微环境重组技术提高家禽抗病力的研究１）——乳杆菌对致病性大肠杆菌的体外拮抗作用项光华伏小平胡永浩（甘肃农业大学动物医学系兰州７３００７０）在我国养鸡业中，致病性大肠杆菌所致的雏鸡消化道疾病屡见不鲜，严重威胁着养鸡业的发展，目前多用抗生素对其进...     

肠道微环境重组技术对提高家禽抗病力的研究─—乳杆菌XF－9301体外拮抗试验

从健康成年母鸡肠道中分得乳杆菌若干株，选典型的一株（ＸＦ－９３０１）在试管内进行了对鸡白痢沙门氏菌的体外拮抗试验。结果表明，此株乳杆菌对鸡白痢沙门氏菌在体外有极强的拮抗作用，共同培养９小时内，即可完全抑制其生长繁殖。     

O157:H7型大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的肠出血性大肠杆菌保守基因序列Stx1、Stx2设计合成荧光定量PCR引物和探针,对荧光定量PCR的反应条件进行优化,建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法.用建立的检测方法对临床分离病料进行了检测,并与常规PCR方法的检测结果做了对比.结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR方法的灵敏度达7.06×103CFU/mL,比常规PCR方法的灵敏度高106倍.用该方法和常规PCR对8种样品进行了检测,证实,该方法与常规PCR的阳性符合率为100%,具有较好的重复性.     

亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其免疫活性的初步分析

提取亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒总RNA,用特异性引物通过RTPCR反应获得了约750bp的核酸片段,将其与pGEMTEasy载体连接,并转化大肠埃希氏菌JM109。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序,证明所克隆的片段含有完整的VP1基因;将重组质粒与表达载体pcDNA3.1( )分别用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建成重组表达质粒,转化宿主菌DH5α,筛选阳性克隆。测序结果证明,目的基因正确插入到表达载体中,命名为pcDNAV;用同样方法将IL18基因插入pcDNAV中,命名为pcDNAVI。用pcDNAVI免疫豚鼠,2周后加强免疫1次,每周用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平。结果表明,pcDNAVI可引发机体产生体液免疫。     

应用肠道微环境重组技术提高家禽抗病力的研究──雏鸡口服乳杆菌XF－9301制剂的安全性和效力试验

应用自制的ＸＦ－９３０１乳杆菌制剂给清净雏鸡群和染疫雏鸡群口服，进行安全试验和效力试验，证实ＸＦ－９３０１制剂是一种安全、有效的微生态制剂。染疫雏鸡群口服ＸＦ－９３０１组与未经处置组１月龄雏鸡存活率及雏鸡白痢等腹泻性疾病发病率间存在着显著差异（Ｐ＜０．０５）。