山羊痘DNA疫苗pVAX1-P32的构建及其安全性评估

为了构建山羊痘病毒(GPV)P32基因真核表达质粒pVAXl-P32,探讨pVAXl-P32重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。以pMD18-T-P32/LD为模板,通过PCR扩增GPVP32基因片段,并定向插入真核表达载体pVAX1中,构建重组表达质粒pVAX1-P32,将其转入大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆进行双酶切与PCR鉴定。大量提取纯化重组质粒pVAX1-P32,经肌肉注射免疫小鼠,于免疫后不同时间剖杀小鼠,分别采集心肌、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、腿肌、血液等组织样品,抽提总DNA,利用PCR分析pVAX1-P32在小鼠组织内的动态分布及其与宿主细胞染色体的整合情况;同时,以PCR技术检测免疫小鼠粪便,分析pVAX1-P32重组表达质粒在外界环境中的释放情况。结果表明,真核表达重组质粒pVAX1-P32的双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符;肌肉注射小鼠后,pVAX1-P32迅速分布到小鼠其他组织器官中,同时,未发现pVAX1-P32与宿主细胞染色体有整合现象;粪便中也均未检测到目的基因。表明,成功构建了真核表达重组质粒pVAX1-P32,且其作为疫苗对动物和环境是安全的。