流产布鲁氏菌1型Bb1-PCR检测方法的建立

根据GenBank中已登录序列,针对流产布鲁氏菌1型特异的保守序列设计了1对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可以快速鉴别流产布鲁氏菌1型的Bb1-PCR方法,并验证了其特异性和敏感性。应用该方法对牦牛流产胎盘组织的临床检样进行诊断,验证其临床适用性和准确性。结果显示,Bb1-PCR(25μL)的最佳扩增条件为:退火温度68.5℃,引物浓度15pmol/μL,Premix Taq12.5μL,35次循环。在该条件下,仅流产布鲁氏菌1型标准菌株(B.abortus 2308)扩增出784bp的目的条带,而马耳他布鲁氏菌,绵羊附睾种布鲁氏菌,猪种布鲁氏菌,犬种布鲁氏菌,沙林鼠种布鲁氏菌,流产布鲁氏菌2~6、9型,大肠杆菌O157:H7和耶尔森菌O:91均无条带出现。敏感性为1CFU/mL。用建立的Bb1-PCR方法能直接从流产胎盘检样中检测流产布鲁氏菌1型,其诊断结果和细菌学表型鉴定结果完全一致。本研究建立的Bb1-PCR方法能够准确检测流产布鲁氏菌1型,其高度特异、敏感、可靠、稳定,适用于布鲁氏菌病的流行病学快速诊断。     

链球菌猪主要致病种和型多重PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种、型3个水平上检测链球菌猪主要致病种和型(C群马链球菌兽疫亚种和猪链球菌1、2、7、9型)的多重PCR方法。结果显示,该多重PCR在退火温度为61℃时可一次性扩增出7条符合预期大小、序列正确的基因条带;特异性试验和准确性试验结果均符合预期,无非特异性、交叉反应、假阳性、假阴性条带出现;对16株临床分离鉴定链球菌的检测结果与细菌学鉴定及单纯PCR鉴定的符合率均为100%;敏感性为0.08ng/μL;5次重复试验的结果也完全一致。结果表明,建立的多重PCR方法具有高度特异性、准确性、敏感性和稳定性,适用于猪场链球菌病的监控和流行病学快速诊断。     

血凝抑制法和琼扩法检测减蛋综合征的比较

血凝抑制法和琼扩法检测减蛋综合征的比较李刚，范伟兴，郑明球（南京农业大学动物医学院２１００９５）血凝抑制试验（ＨＩ）和琼脂扩散试验（ＡＧＮ）是诊断减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）的两种常用方法，为比较这两种方法的相关性和特异性，进行了以下的研究。１材料和方...     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定范伟兴袁秀芳王树迎胡敬东肖传发（山东农业大学动物科技学院泰安２７１０２８）吴延功王永玲蒋贻海（农业部动物检疫所）本研究对来自山东夏津和泰安的２株分离毒ＸＪ株和ＣＡ株进行了鸡胚传代、电镜观察、血凝试验、干扰试验、鸡胚...     

一猪场爆发猪伪狂犬病的诊断

一猪场爆发猪伪狂犬病的诊断一大约克和长白猪的保种场，１９９６年曾出现１１头母猪空怀，１９９７年２月２２～２８日妊娠母猪连续发生５窝早产１～２周，共产仔猪４８头中死胎４０头，其中１０头已自溶变黑，另８头弱仔３天内死亡。另有４头母猪多次返情，配种后１～２...     

山东省鸡源强致病性大肠杆菌体外药物敏感性试验

山东省鸡源强致病性大肠杆菌体外药物敏感性试验张万福，肖传发，范伟兴，徐海花，陈官营（山东农业大学泰安２７１０１８）随着养鸡业的迅速发展，鸡大肠杆菌病越来越多，特别是肉仔鸡大肠杆菌病危害极为严重，给养鸡业造成的损失日趋严重。为给药物防治提供科学依据，避...     

牛结核病PPD_B-P_(E-C)-IFN-γ诊断方法的建立

对结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原ESAT-6(PE)和CFP-10(PC)分别进行原核表达并纯化。用PPDB、PE、PC和PE-C(PE、PC等量混合)作为4种刺激抗原(以PPDB作为参照),分别体外平行刺激56份已知的牛结核病阳性牛全血和460份阴性牛全血,孵育、收获血浆,采用间接ELISA检测产生的IFN-γ水平。经统计学分析,绘制ROC曲线,分别确定PPDB-IFN-γ、PE-IFN-γ、PC-IFN-γ和PE-C-IFN-γ的阳性判定最佳临界点及其敏感性和特异性;并据此进一步分析PPDB分别与PE、PC或PE-C联用(PPDB-PEIFN-γ、PPDB-PC-IFN-γ、PPDB-PE-C-IFN-γ,串联和并联)的敏感性和特异性。结果显示,PE、PC的分子质量分别为27.8ku和16.4ku;PPDB-IFN-γ的最佳临界点为0.02,其敏感性和特异性分别为94.6%和92.2%,PE、PC、PE-C的最佳临界点相同,均为0.01,其中PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,分别为92.9%和95.7%;联用时,PPDB-PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,其串联时敏感性和特异性分别为89.3%和96.5%,并联时分别为98.2%和91.3%。PE-C-IFN-γ的敏感性比PPDB-IFN-γ低1.7%,但特异性高3.5%;PPDB-PE-C-IFN-γ并联时,敏感性比PPDB-IFN-γ高3.6%,串联时特异性比PPDB-IFN-γ高4.3%。结果表明,本试验建立的PPDB-PE-C-IFN-γ诊断方法具有高敏感性和高特异性,具有极大的应用价值。     

奶牛分枝杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为优化分枝杆菌PCR诊断方法并监测牛分枝杆菌耐药性,本研究采用罗氏培养基自奶牛淋巴结和肺中分离分枝杆菌,优化本课题组建立的两级多重PCR方法用于分离菌株的分子诊断。一级PCR为两重PCR,靶标16SrRNA进行属和群的鉴定;二级PCR为七重PCR,根据结核分枝杆菌复合群(Mycobacte-rium tuberculosis complex,MTBC)成员染色体缺失区域的差异,设计了7对引物,依据群内不同种各自呈现特定的扩增谱型进行种的鉴定。对MTBC分离株,全菌水平用绝对浓度法对4种抗结核一线药物(RFP、INH、EMB、SM)进行药敏试验;分子水平用PCR扩增耐药基因rpoB、katG、inhA、embB、rrs,并测序分析。结果显示,本试验共分离出14株分枝杆菌,一级PCR鉴定均为分枝杆菌属成员,其中8株为MTBC成员。二级PCR中,这8株均呈现相同的扩增谱型,均为牛分枝杆菌谱型。药敏试验和耐药基因检测结果一致,8株牛分枝杆菌分离株对4种抗结核病一线药物全部敏感,基因序列分析未见突变。结果表明,本研究优化的两级多重PCR方法具有快速可靠和低成本的优势,是目前国内最新的分子诊断方法。     

肾型传染性支气管炎病毒的致病性研究

欧美等发达国家,由于饲养环境控制规范,传染性支气管炎（ＩＢ）仍以传统的呼吸型为主;在我国以专业户散养为主,由于禽舍温度、饲料配方、细菌性疾病的控制均不能达到最适条件,秋冬季节常出现以肾肿胀、尿酸盐结晶以至死亡为主要表现的肾型ＩＢ。本试验观察了从典型肾...