耐氟喹诺酮类病原菌gyrA基因突变的寡核苷酸芯片检测

根据大肠杆菌、沙门菌、无乳链球菌和鸡毒霉形体的gyrA基因序列,设计了通用引物和11条寡核苷酸探针;利用点样仪将探针点在基片上,制成寡核苷酸芯片;采用PCR荧光标记靶基因,与芯片杂交,用荧光扫描仪检测信号;同时以PCR-测序法进行gyrA基因突变的检测。结果,PCR反应体系能特异性地扩增出靶基因;寡核苷酸芯片能同时检测不同病原菌GyrA第83、87位发生的突变,芯片检测结果与测序结果较为一致。结果表明,使用寡核苷酸芯片技术检测病原菌耐氟喹诺酮类基因突变是可行的;研究结果为基因芯片技术应用于兽医临床耐药性检测提供了基础。     

主席讲话稿是这样改成的

在人们的理念中．领导的讲话稿都是单位的“秀才”写成的．领导在会上只是照本宣科罢了。我们辛集市政协主席刘存柱从不这样。他的讲话稿多是他自己写:有时别人替他写了也必定大删大改。我在辛集市政协办公室多年从事文字材料工作．对此体会尤深。     

体外耐氟喹诺酮类鸡毒霉形体gyrA基因的突变特征分析

按常规方法提取了鸡毒霉形体参考株S6 10 、疫苗株F14 8及在氟喹诺酮类药物压力下筛选出来的耐药株的基因组DNA ,扩增了各菌株DNA旋转酶 gyrA基因片段 ,并进行了克隆、测序 ,利用DNAsis软件对测序结果进行分析。结果表明 ,S6 10 和F14 8在恩诺沙星或环丙沙星压力下均筛选出不同程度的耐药菌 ,而且恩诺沙星致鸡毒霉形体发生耐药性突变的几率高于环丙沙星 ,S6 10株耐药突变频率高于F14 8;S6 10 筛选出来的耐药菌株发生突变的位置在DNA旋转酶GyrA亚基的第 83位 (相对于大肠埃希氏菌GyrA亚基中的位置 ,以下同 )和第 87位上 ,取代模式分别为Ser→Ile、Glu→Gln ,另外 1株高水平耐药株 (Se10 ,MIC≥ 12 8)在第 10 3位也发生了氨基酸取代 (Ile→Val) ;F14 8筛选出来的耐药菌株只在DNA旋转酶GyrA亚基的第 87位发生了突变 (Glu→Gly/Gln)。     

鸡毒霉形体耐氟喹诺酮类gyrA基因的突变特征

按常规方法提取鸡毒霉形体 3株临床分离株和参考株 (S6 - 10 )的基因组DNA ,扩增各菌株DNA旋转酶gyrA基因片段 ,并克隆、测序 ,用DNAsis软件对测序结果进行分析。结果表明 ,HS1、HS2株均在GyrA亚基第 87位发生了Glu87→Gly氨基酸取代 ,除此之外 ,耐药水平较高的HS2株还在第 83位发生了Ser83→Ile氨基酸取代 ,而FL分离株虽对氟喹诺酮类药物产生了低水平耐药 ,但在GyrA亚基未发生任何氨基酸突变。     

耐环丙沙星患病动物源沙门菌的多重耐药分子特征

采用13株耐环丙沙星食品动物源沙门菌进行喹诺酮类作用靶位基因及质粒介导耐药基因的扩增测序、有机溶剂耐受试验、HeLa细胞侵袭试验,探讨其多重耐药的分子特征。结果显示,菌株均携带质粒介导的喹诺酮耐药基因,7株对环丙沙星敏感性降低或低水平耐药(最小抑菌浓度0.125～4μg/mL),靶位基因无突变或gyrA单位点突变及外排泵活性增强;5株对环丙沙星高水平耐药(最小抑菌浓度32～128μg/mL),均在gyrA和parC发生双位点突变及外排泵活性增强,其中4株携带β内酰胺酶blaCTX-M基因。对环丙沙星高水平耐药的沙门菌的侵袭力显著高于敏感菌株。表明患病食品动物源沙门菌中,无论外排能力增强与否,gyrA单位点突变或质粒介导的喹诺酮耐药基因阳性,仅导致沙门菌对环丙沙星的低水平耐药;而外排泵机制联同染色体靶位基因突变可导致菌株对环丙沙星的高水平耐药,往往同时携带blaCTX-M基因;临床分离沙门菌随着对环丙沙星耐药程度的增加侵袭力增强。     

试论WTO协议中的环境条款及其对贸易的影响

随着经济的全球化,环境保护和贸易自由日益成为我们面临的两大重要问题,我们既要促进贸易自由化,又要保护我们生存的自然环境,因此,环境保护和贸易自由的协调问题成为了国际法领域亟需解决的问题。本文试着从WTO协议的环境条款和我国国内法的层面来阐释二者的关系及协调的方式。