SELEX技术筛选甲基苯丙胺适配子

目的利用SELEX筛选甲基苯丙胺适配子,并初步鉴定获得甲基苯丙胺的适配子。方法体外合成全长为76 bp的随机ssDNA文库,以甲基苯丙胺完全抗原偶联到溴化氰活化琼脂糖上,作为固相靶分子对随机ssDNA文库进行SELEX筛选。利用SPR测定适配子和甲基苯丙胺的结合率和特异性,通过MFOLD分析软件对适配子进行二级结构预测和结合位点分析。结果经过10轮筛选后,甲基苯丙胺适配子的结合率由88.3 RU上升到113.7 RU,表明特异性适配子得到逐步富集。获得的适配子进行测序,得10个序列,二级结构均为茎-环结构,可能是适配子和甲基苯丙胺结合的结构基础。结论本研究使用SELEX技术筛选小分子毒品甲基苯丙胺适配子的方法,获得与甲基苯丙胺特异性结合的适配子序列,揭示了适配子与甲基苯丙胺结合的基本结构,为制备特异性甲基苯丙胺检测试剂盒奠定了基础。     

FluMag-SELEX技术体外筛选识别氯胺酮的DNA适体

目的 利用FluMag-SELEX技术筛选出能特异性识别氯胺酮的DNA适体. 方法 体外合成78 bp的随机ssDNA文库,氯胺酮作为靶分子,表面修饰甲苯磺酰基的磁珠作为固相载体筛选特异性识别氯胺酮的适体.经过13轮筛选后进行DNA克隆测序,并进行一、二级结构分析.通过对荧光强度的分析检测适体的亲和性、特异性和Kd值. 结果 获得2条ssDNA适体Apt#4和Apt#8,能够特异性地与靶分子氯胺酮结合,Kd值分别为0.59和0.66 μmol/L.二级结构预测以茎环和G-四聚体为主,茎结构可能是适体结构稳定的基础,环和G-四聚体结构可能是与氯胺酮特异性结合的关键. 结论 FluMag-SELEX技术可以较好地提高适体的筛选效率,得到能特异性识别氯胺酮的DNA适体,有望用于氯胺酮的快速检测.     

适配体在毒品毒物分析中的应用

适配体是体外合成的能与蛋白质、其他小分子物质、有机离子等等各种配体特异结合单链DNA/RNA,是由SELEX(体外指数富集配体系统进化技术)技术筛选得到,适配体具有对靶标的高特异性和亲和性、合适的化学稳定性、无免疫原性和毒副作用的优点。利用适配体的这些优越性是得适配体可以作为生物识别分子元件应用于传感器及分析试纸中,进而可以快速高效的检测毒物毒品。为了大大提高办案的效率,为维护法治、打击犯罪提供更好的技术支持,通过介绍了一种基于适配体(aptamer)为识别元件的高选择、高灵敏、快速的毒物毒品检验方法。