荧光标记复合扩增检测4个STR基因座多态性

目的建立荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座检测分型方法,并对成都汉族群体4个基因座的遗传多态性进行调查。方法用6-FAM标记D1S2142和D15S659引物,HEX、TMR分别标记D14S306和D13S1492引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScan Analysis Software3.7NT软件计算扩增产物片段相对大小,Genotyper(3.7NT软件进行样本基因型分型,建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,对145名成都汉族无关个体样本进行分型。结果荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座,每个STR基因座都获得了清晰的基因型分型结果。145份样本,4个STR基因座分别检出10,14,7,12个等位基因和22,54,21,39种基因型,其基因型分布均符合Hardy-W e inberg平衡。4个基因座在成都汉族群体的杂合度分别依次为0.7793,0.8345,0.7793和0.8345;多态信息含量分别依次为:0.7656,0.8730,0.7470和0.8312。累计非父排除率为0.9783,累计个人识别机率为0.9999 917。结论荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座,可实现对每个基因座准确分型;成都汉族群体该4个基因座的遗传学数据,可为群体遗传学和法医学研究与应用提供基础资料。     

6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析体系的构建

目的为在310基因分析仪上进行6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光STR复合扩增分型建立基础条件。方法以pGEM载体作为靶DNA,设计引物扩增获得500~80bp的13个长度不等DNA片段,以这些片段纯化物作为模板DNA,分别扩增获得6FAM、HEX、TMR和ROX标记的M atrix标准物,用4种M atrix标准物在310基因分析仪上构建可用于6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析的M atrix文件。结果扩增所得的13个非标记片段,长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、260、300、340、400、500bp,在非变性聚丙烯酰胺凝胶连续电泳-银染凝胶上均表现为单条带,6FAM、HEX、TMR、ROX分别标记的片段通过310基因分析仪检测均为单峰。混合ROX标记的80、120、180、220、260、300bp的6个片段获得的内标,显示出良好的线性关系。结论建立了有效的6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析M atrix,为进行多个STR基因座荧光标记复合扩增检测奠定了基础。     

短串联重复序列在法医学中的应用

１ＳＴＲ的概念短串联重复序列（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ,简称ＳＴＲ),也叫微卫星ＤＮＡ（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ） ,或简单重复序列（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ,简称ＳＳＲ） ,是一类广泛存在于真核生物基因组中的ＤＮＡ串联重复序列。其核心序列为２～６ｂｐ［１］ ,重复次数通常在１５～３０次。少数学者倾向于称核心序列２ｂｐ的为微卫星ＤＮＡ ,３～５ｂｐ的为ＳＴＲ［２］,本文以前一种认识为基础。ＤＮＡ重复序列家族成员之间的关系见表１。最早发现ＳＴＲ是由于在真核生物基因组中发现了由ｄ…     

线粒体16SrRNA和Cytb基因复合扩增进行种属鉴定

目的建立一种用于种属鉴定的线粒体DNA16SrRNA基因和细胞色素b基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件Primer5.0对mtDNA序列的16SrRNA基因和细胞色素b基因各设计一对引物,建立复合扩增体系,分别扩增人和牛、猪、狗、鸡、草鱼5种常见动物,用310遗传分析仪对产物进行分析。结果人和5种动物DNA扩增产物均出现两个峰,Cytb通用引物的扩增产物为人与动物的共有峰,为358bp;16SrRNA基因的扩增产物为人与动物间存在位置差异的特异峰,位于231～256bp之间。结论该复合扩增体系可以明确区分人和5种动物样本,可用于种属鉴定。     

线粒体DNA异质性在法医遗传学中的研究进展及存在的问题探讨

1 概述 人类mtDNA 1981年在英国剑桥Sanger实验室首次完成全序列测定,这个最初测定的序列(基因库编码:M63933)作为对比的参考序列,通常被称为Anderson序列或剑桥序列[1].线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)为环状DNA,有16569碱基对,含37个编码氧化磷酸化过程相关物质的基因,还有一个复制控制区称为D-环区.该区在个体间呈现多态性,可用于人类个体识别和亲子鉴定.D-环区包括三个高变区(hypervariable region,HV)目前已有人提出高变区Ⅳ的概念,但文献报道较少.无血缘关系个体中mtDNA的HVⅠ和HVⅡ区域变化率大约在1%～3%[2].     

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA(m tDNA)16 srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件(Prim er 5)对两个m tDNA序列ND4基因和16 srRNA基因设计两对引物,每对引物中的一条在5’端标记荧光素(6-FAM)。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系,用AB I PR ISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果人类DNA扩增产物出现两个峰,片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段,而动物DNA扩增产物出现一个峰,片段大小为149bp。对30个实验室存放5~15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本,对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。