水貂出血性肺炎病原铜绿假单胞菌的分子特征

为了解水貂出血性肺炎病原铜绿假单胞菌的流行特点,对来自水貂出血性肺炎和貂场环境经生化培养鉴定的41株疑似铜绿假单胞菌分离株,用PCR快速鉴定;对鉴定的菌株以纤毛、鞭毛结构蛋白基因的核苷酸序列进行分型,并进行LPS血清分型。结果显示,建立了快速鉴定铜绿假单胞菌的二重PCR方法和纤毛、鞭毛结构蛋白基因序列的分型方法。菌株分型结果显示,分离的铜绿假单胞菌株被分为6种核酸分子型和6种血清型(G、B、I、C、D、F)。分型结果表明,水貂出血性肺炎的主要流行株属于LPS血清型G、核酸分子型4f4p或4f5p;另外,少数其他分子型铜绿假单胞菌也可对水貂致病。     

犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒F基因序列设计了1对引物,以从水貂犬瘟热病毒中提取的RNA为模板,扩增出一约1 000 bp的F基因片段。将PCR产物按相应的阅读框架克隆到原核表达载体pET-32a中,并将重组质粒转化E.coliBL21(DE3),用1.0 mmol/L IPTG在30℃下诱导表达。结果显示,F基因的表达量约占细菌总蛋白的35%。SDS-PAGE电泳显示,表达产物的分子质量约为55 ku,与预计大小相符;经Western-blotting试验进一步证实,该基因获得了正确表达。     

安徽省人民政府关于发布安徽省社会资本和外资投资文化产业指导目录的通告

皖政[2007]108号《安徽省社会资本和外资投资文化产业指导目录》已经省政府同意,现予发布。安徽省人民政府二○○七年十一月二日     

貂传染性肠炎的研究——细胞培养灭活疫苗研制

利用NLFK细胞增殖培养MEV-S_1株病毒,无论静置培养或转瓶培养均可在接毒后72～96小时产生50％～75％CPE时收毒,对50％CPE的培养瓶在换液后继续培养至120～148小时时可收2次毒。然而,转瓶培养毒液的HA价要比静置培养的高。利用NLFK细胞增殖的MEV-S_1株毒制备的BEI灭活苗,对动物安全,免疫水貂30～60天后血清HI抗体滴度增加1～8个滴度,油乳剂苗增长的幅度更大,最高HI抗体价可达2~(10)以上。同时对NLFK细胞在MEV-S_1株增殖培养上的优点作了评论。     

抗水貂肠炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

将水貂肠炎病毒SMPV-11株纯化后免疫4～6周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,获得了8株稳定分泌抗水貂肠炎病毒SMPV-11株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、H5、F5、F4、A9、B7、H11和H8.经过鉴定:其腹水ELISA效价分别在1:6.4×103和1:2.56×104之间;且与犬瘟热病毒、阿留申病病毒、犬腺病毒不发生交叉反应;而与水貂肠炎病毒、犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒呈特异性反应;这8株单克隆抗体均为IgG类型.     

宁夏水貂阿留申病流行病学调查

水貂阿留申病血检结果表明,宁夏水貂存在本病,感染率为41.73％。本病感染率与水貂性别和年龄有关;亲代感染情况对子代有影响。本病死亡高峰期在夏、秋季节,能使母貂配种率和仔貂成活率降低。     

水貂肠炎病毒疫苗株和野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立

为了建立水貂肠炎病毒(MEV)疫苗株与野毒株的鉴别检测方法,根据GenBank中的水貂肠炎病毒序列设计了1对引物,用来扩增包含水貂肠炎病毒NS1基因在内的2 013bp大小的片段。通过对国内疫苗毒MEVB株及其他细小病毒参考株的NS1基因序列比较发现,疫苗毒MEVB株NS1基因核苷酸1401位的碱基由T变为C,致使1399位～1404位的核苷酸构成由ATTGAT变异为ATCGAT,多了1个限制性内切酶ClaⅠ酶切位点,其他MEV分离毒株中均未出现此酶切位点。用特异性引物扩增出2 013bp的目的片段后,再用限制性内切酶ClaⅠ进行酶切分析,疫苗毒MEVB株被切割成1 404bp和609bp的2个片段,国内其他分离株均未出现上述片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗毒MEVB株和野毒株。     

水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。