胶体金标记苯丙胺单克隆抗体免疫试剂盒研究

目的建立一种准确、快速、简便的检测尿液中苯丙胺(AMP)的胶体金免疫层析技术。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗AMP单抗,将AMP—BSA抗原固相于硝酸纤维素膜上,制备胶体金免疫层析测试条。通过尿液、血液和唾液中的可能存在的苯丙胺成分与测试条上的苯丙胺-BSA完全抗原竞争结合有限的单抗结合位点,来判定检测结果。结果用ICT法和GC/MS检测217份尿样,本法检测阈值为1000ng/mL,特异性为99.17%,准确性为99.54%。结论ICT法检测尿液中的AMP特异性强,灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备,具有广泛应用价值。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（ＤｏｔＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１∶４００,ＳＰＡ胶体金探针的工作浓度为１∶８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点。用ＤｏｔＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（ＤｏｔＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管、肺、肾病料,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％;对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,ＩＢＶ阳性检出率分别为３４．５％和３１．０％,阳性符合率为９３．３％（Ｐ＞０．０５）。     

A群猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为建立一种快速、简便的猪轮状病毒检测方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上喷加纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白多克隆抗体和羊抗鼠IgG,制成检测猪轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条用于检测猪轮状病毒感染的MA104细胞培养物,在检测线处出现红色反应带,未感染病毒的细胞培养物在检测线处未出现反应条带,上述培养物在质控线处均出现红色反应条带;进一步试验表明,试纸条检出病毒培养液(TCID50是10-6.25/0.1 mL)的最低限为1∶32稀释;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与相关的腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒发生反应,所制备的试纸条具有一定的敏感性和特异性,重复性良好。     

Fn-EⅢA金标试纸条进行损伤时间推断的效果评价

目的评价Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条在人体皮肤组织损伤时间推断中的有效性和灵敏度.方法提取不同损伤时间人体皮肤组织,匀浆,用Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条检测其Fn-EⅢA的表达,对其结果进行评价;同时,将大鼠挫伤皮肤组织置于自然环境中,分别提取不同自溶时间段的皮肤样本进行检测,对自溶变化对检测结果的影响进行观察.结果正常皮肤组织样本中试纸条检测线不显色,损伤1h后即显色,随损伤时间延长,试纸条检测线有显色逐渐加深的趋势;在观察时间段内,组织自溶对检测结果无显著影响.结论Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条可作为法医学损伤时间推断敏感、稳定的检测手段.     

抗人SMCY抗原胶体金试纸条的研制

目的建立一种快速检测SMCY抗原的方法。方法采用胶体金免疫层析技术双抗体夹心检测法,在金标垫上包被胶体金标记的SMCY兔多抗,制成胶体金试纸条,用于检测12份猪、牛、狗、鸡和小鼠等动物血清以及50份人血清。结果制作的胶体金试纸条检测人和常见动物血清具有明显的种属特异性,能够区分男女血清。结论该方法可尝试用于鉴别男女血清,并具有一定种属特异性,其为法医学快速鉴别人类样本性别提供了研究方向。     

重组酶聚合酶扩增技术结合胶体金试纸条检测新城疫病毒方法的建立及应用

本研究旨在根据鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus）F基因序列,利用Oligo 7设计RPA引物以及nfo探针,建立快速检测新城疫病毒的结合胶体金试纸条的RPA检测方法。在试验中,对探针浓度、引物浓度、反应温度、反应时间进行了优化;并将检测结果与荧光RT-PCR商品化试剂盒的检测结果进行了比较。结果显示,本方法采用50μL体系,37℃20 min即可对新城疫病毒F基因进行快速检测。该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,检测结果与荧光RT-PCR商品化检测试剂盒检测结果一致,为养殖场检测新城疫病毒提供了一种简便可靠的检测方法。     

胶体金免疫渗滤技术检测棘球蚴病抗体试剂盒的研究

应用胶体金免疫渗滤技术检测已确诊的棘球蚴病患者血清抗体,从65例患者中检出阳性53例,阴性12例,阳性符合率为81.5%,敏感性为84.4%;用该技术对107例非棘球蚴病对照血清检测,特异性达93.0%,诊断效率达78.5%.认为胶体金免疫渗滤技术为一种较好的棘球蚴病抗体检测方法.     

抗人血红蛋白胶体金检测试剂条的研制

目的制备法医学检验所用的确定人血的免疫胶体金层析试剂条。方法选取抗人血红蛋白单克隆细胞株,制备其小鼠腹水,从腹水中纯化出单克隆抗体。制备胶体金并用一纯化的单克隆抗体包被,制成免疫胶体金。取玻璃纤维以免疫胶体金浸泡,烘干。在一硝酸纤维素膜上两个不同位置分别点加另一抗人血红蛋白抗体和羊抗鼠IgG。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果制成的免疫胶体金试剂条可对稀释至20万倍的人血红蛋白溶液显示阳性,对法医学检验常见8种动物的血溶液显示阴性。结论所制备抗人血红蛋白胶体金试剂条可以应用于法医学检验。     

胶体金标记检测大麻单克隆抗体免疫试剂盒研制

目的 建立准确、快速、简便的检测尿液中大麻的胶体金免疫层析技术(ICT)。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗主要代谢物四氢大麻酚-9-羧酸,THC与GC/MS检测方法相比,用ICT法的216份尿样,其检测限为50 ng/ml,灵敏度为96.67％,准确性为98.61％。结论 ICT法检测尿液中THC,其特异性强,对确定大麻的存在具有广泛的应用价值。     

狂犬病病毒抗体免疫金标检测试纸的制备及其应用

为了建立一种快速检测狂犬病病毒抗体水平的方法,用浓缩提纯的狂犬病病毒CVS11株作为胶体金标记抗原,以金黄色葡萄球菌A蛋白为检测线上的捕获抗原,制备狂犬病病毒抗体水平检测试纸条。应用该试纸条进行临床样品检测,结果表明,以稀释后的犬全血或血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为0.002U/mL,特异性试验证明该试纸条与犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬腺病毒2型犬科疾病阳性血清没有交叉反应,稳定性试验证明该试纸条在室温下保存的有效期为12个月,检测结果与快速荧光抑制试验的符合率为95.12%。证实该狂犬病病毒抗体免疫金标检测试纸可以方便、快速、灵敏、特异地检测狂犬病病毒的抗体水平。