鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株S2基因的序列分析及其表达

采用RT-PCR方法从鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株中扩增出了S2基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a( )中,测序验证后转化入表达宿主茵RosettaTM2(DE3)plysS,进行IPTG诱导表达.结果表明,重组菌可表达出相对分子质量约为50000的重组融合蛋白,在浓度为0.6 mmol/L的IPTG诱导4 h的情况下表达效果最好.表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中.表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白.经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与抗呼肠孤病毒DRV-GZ株阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证实表达的蛋白具有较好的反应原性.     

256株鸭源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及病原特性研究

从四川省不同地区分离到２５６株鸭源多杀性巴氏杆菌，采用Ｃａｒｔｅｒ荚膜群鉴定法和Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ热稳定抗原鉴定法对其进行了血清学鉴定，并对病原的部分特性进行了研究。结果表明，有２５４株为荚膜Ａ群菌，占９９．２２％（２５４／２５６），其中５Ａ型占９５．７％（２４５／２５６），８Ａ型占１．９５％（５／２５６），９Ａ型占１．５６％（４／２５６），未定型占０．７８％（２／２５６）。测定了鸭巴氏杆菌对药物的敏感性。分离鉴定的鸭巴氏杆菌具有良好的免疫原性     

鸭肝炎病毒Ⅰ型VP3基因的克隆及原核表达

参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物.通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/Ⅴ结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS.SDS-PAGE分析表明,经用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导表达后,菌体裂解产物有特异的、分子质量约52 ku的目的蛋白条带.Western-blotting检测表明,表达产物与DHV-Ⅰ阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.     

高度特异的李斯特菌单抗试剂的研制及鉴定

以单核细胞增生李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，ＬＭ）制备免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了３株能稳定分泌抗单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌和格氏李斯特菌的单克隆抗体的细胞系，分别是ＬＪ１０Ａ，ＬＭ１１和ＬＢ５，而与其余种的李斯特菌和属外细菌不发生交叉反应。３株单抗均为ＩｇＭ，所识别的抗原为菌体表面蛋白