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α2-HS-糖蛋白(α2-HS-glycoprotein,简称AHSG),是存在于正常人血清中的一种电泳迁移率为α2,具有高度遗传多态性的糖蛋白.1979年Anderson等应用双向电泳的方法首先发现了AHSG的遗传多态性,1983年Cox等将等电聚焦技术成功地应用于AHSG分型[1,2].到目前为止,在已调查过的群体中,AHSG均具有遗传多态性,三种常表现型(AHSG 1型、AHSG 2型和AHSG 2-1型)分别由一对共显性等位基因AHSG*1和AHSG*2所编码.此外,在对AHSG型进行深入研究的过程中,有20余种AHSG变异型相继被发现[3],但国内尚无有关AHSG变异型的报道.本文报道了在辽宁汉族人群AHSG型频率分布调查中发现的一种AHSG变异型及其家系调查的结果. 相似文献
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为构建以伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株为载体的反向表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(rgp)的重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Sph Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为反向连接,阳性重组子命名为p8AA-EGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/EGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的效价(TCID50)为108.25/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性. 相似文献
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通过PCR方法扩增了马立克氏病病毒 (MDV) 2 .8kbgB基因 ,并且在其两端加上PstⅠ和NotⅠ酶切位点。然后用PstⅠ /NotⅠ酶切回收 gB片段 ,插入到转移载体 pEFgpt12s复合启动子Spromoter的下游的PstⅠ /NotⅠ酶切位点处 ,构建了转移质粒pEFgpt12s gB。将该质粒与鸡痘病毒 (FPV)野毒 2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过MXHAT选择培养基进行筛选 ,蚀斑纯化 ,经PCR扩增证实重组病毒中含有 gB基因。重组病毒和FPV野毒在CEF上形成空斑大小无明显差别 ,病毒效价分别为 10 -5.43 TCID50 /mL和 10 -6TCID50 /mL ,表明外源基因的插入不影响所构建的重组病毒的生物学特性 相似文献
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以PUC19质粒为载体构建了鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)EcoRIDNA文库。根据已经发表的澳大利亚ILTV-SA2株和英国ILTV-V822株的糖蛋白gB基因的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,以ILTV中国王岗株DNA为模板,扩增出1.338kb的糖蛋白gB基因片段,用DIG标记制备成核酸探针,从ILTVEcoRIDNA文库中筛选出阳性重组子,得到一个EcoRI3.0kb的ILTVDNA片段。经酶切分析表明,该3.0kbILTVDNAEcoRI片段含有完整的糖蛋白gB基因,经PCR和核酸杂交表明所克隆的糖蛋白gB基因是特异的。 相似文献
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为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256~405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化E.coli BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。 相似文献
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为了解P-糖蛋白基因在捻转血矛线虫伊维菌素耐药株和敏感株间的差异,进一步弄清该基因与伊维菌素耐药性产生的关系,用PCR-RFLP方法分析了捻转血矛线虫伊维菌素耐药株P-糖蛋白基因hcpgp-1的多态性,并对所得序列进行测序。结果表明:捻转血矛线虫伊维菌素敏感株虫体的PCR产物不能被内切酶KpnⅠ切开,而伊维菌素耐药株虫体的PCR产物可被内切酶切开;酶切后统计数据显示,10条敏感虫株全部为敏感纯合子(BB);在所检测的20条伊维菌素耐药性虫株中,抗性纯合子(AA)6个(30%),杂合子(AB)13个(65%),敏感性纯合子(BB)1个(5%)。其中,AB基因型频率最大,为优势基因型,其次为AA型,BB型比例最低。抗性等位基因A为优势基因,其频率为62.5%,敏感等位基因B的频率为37.5%。同源性分析发现,具有抗性的糖蛋白基因hcpgp-1与敏感株的同源性较低,在80.2%~89.3%之间。且发现伊维菌素耐药株hcpgp-1基因序列中,有多处碱基发生了突变。本研究结果为进一步了解P-糖蛋白在捻转血矛线虫伊维菌素耐药性产生中的作用,提供了参考数据。 相似文献
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目的 建立体外模拟体内肠道细胞——人结肠癌上皮细胞(the human colon adenocarcinoma cell line,Caco-2)的Transwell模型,以此研究钩藤碱在Caco-2细胞模型上的跨膜转运特征。方法 采用聚酯碳酸酯膜连续培养Caco-2细胞21 d,形成致密的单层细胞模型。然后对影响钩藤碱在Caco-2细胞模型上转运特征的因素(包括浓度、时间及跨膜转运蛋白P-糖蛋白)进行考察;同时采用液相色谱-质谱法对溶液中钩藤碱的含量进行测定。结果 钩藤碱在Millicell系统上的转运量具有一定的浓度-时间依赖性,主要以主动转运的方式进行吸收,且随着时间和药物浓度的增加,转运量明显增加。不同浓度钩藤碱从细胞基底侧(basolateral, BL)到细胞刷状缘侧(apical,AP)的表观渗透系数(apparent permeability coefficient, Papp)与AP侧到BL侧的Papp比值均在1.5以上,且钩藤碱从BL侧到AP侧的外排速率明显高于从AP侧到BL侧的吸收速率。当加入P-糖蛋白抑制剂后,药物由BL侧向AP侧的转运量显著减少,而由AP侧到BL侧的转运量显著增加。结论 钩藤碱在Caco-2细胞上转运存在一定的浓度及时间依赖性,且P-糖蛋白介导钩藤碱在Caco-2细胞上转运。 相似文献