猪瘟的分子生物学诊断

采用RT PCR方法 ,从经临床和血清学初步诊断为猪瘟的病料中扩增了猪瘟病毒 (CSFV)的E2基因某一片段 ;对扩增片段进行序列测定 ,通过DNAsis软件构建了系统发生树 ,确定了这一流行株 (IPI株 )在系统发生树中的位置。结果表明 ,从IPI株和石门株 (Shimen)中均扩增出 2 71bp目标片段 ,这一流行株与我国 2 0世纪 90年代以来流行的绝大多数CSFV毒株同属于基因 2群中的 2 .1基因亚群 ,与YN1、YN2、GX4、GZ1的关系较近 ,而与Shimen株、兔化弱毒株 (HCLV)等我国传统的标准毒株相距较远。这一结果为猪瘟的诊断和检疫提供了一种特异、可靠的方法     

广西猪瘟流行现状的调查分析

据对广西 13个发病猪场 (疫点 )猪瘟 (CSF)的流行病学调查分析 ,发现当地CSF流行以非典型为主 ,典型CSF同时存在 ,发病猪多在 3月龄以下且病程较长。母猪存在隐性感染 ,部分表现为繁殖障碍 ,一些临床健康猪存在着带毒问题。此外 ,从疑似CSF病料中扩增出牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) ,表明广西猪群中存在着BVDV的感染。分子流行病学调查结果表明 ,猪瘟病毒 (CSFV )广西流行株的基因型较复杂 ,分布 2个基因群的 4个亚群 ,其亲缘关系与 2个传统毒株石门株 (Shimen)和兔化弱毒株 (HCLV)相距甚远 ,最高可达 2 0 .0 %,说明广西CSFV流行株存在着遗传多样性。     

猪瘟病毒E_2基因疫苗表达抗原在小白鼠胫前肌的分布及消长

用免疫组化法检测了猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ｅ２囊膜糖蛋白基因疫苗表达的抗原在小白鼠胫前肌中的分布及消长。结果：ＨＣＶＥ２基因疫苗ｐＣＤＳＴ接种小白鼠胫前肌后,表达的Ｅ２抗原主要分布于肌纤维膜上,少量分布于肌纤维间,在细胞浆中很难检测到Ｅ２抗原;用ＨＣＶ基因疫苗免疫后１ｄ,Ｅ２抗原已有表达,１３ｄ抗原达高峰,以后逐渐减少,３０ｄ仅检测到少量抗原。     

化学佐剂对猪瘟病毒E_2基因疫苗免疫增强作用的研究

以昆明小白鼠为试验动物,研究了化学佐剂对猪瘟病毒E2 囊膜糖蛋白( HCV E2) 基因疫苗的免疫增强作用;用印度墨水活体染色法筛选促进印度墨水在肌肉中扩散的化学试剂,并用筛选到的化学试剂与pCDLacZ 混合肌肉注射小白鼠。结果表明,斯苯和甘油能较好的促进LacZ 基因在小白鼠胫前肌中表达,提示斯苯和甘油可作为基因疫苗的化学佐剂;用斯苯和甘油按比例混合配制HCV E2 基因疫苗质粒pCDST 免疫小白鼠,其抗体效价显著高于蔗糖、甘油、斯苯单一佐剂。     

猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化

为了解猪瘟病毒(CSFV)石门株强毒感染对免疫细胞的影响以及免疫细胞的变化动力学,用流式细胞仪对人工感染猪的白细胞凋亡以及CD4 和CD8 T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行了检测.结果表明,攻毒后CD4 和CD8 T淋巴细胞比例急剧下降,CD4 T淋巴细胞比例在攻毒后第4 d和第7 d分别由攻毒前的26.87%下降到8.83%和13.86%,CD8 T淋巴细胞比例由攻毒前的28.17%分别下降到14.19%和17.55%.外周血白细胞凋亡的检测结果显示,发病初期感染组凋亡细胞和早期凋亡细胞均显著高于对照组,表明CSFV诱导细胞凋亡是导致免疫细胞减少和免疫抑制的主要原因.     

中国猪瘟兔化弱毒兔脾组织毒部分基因序列分析

利用反转录（ＲＴ）及套式ＰＣＲ（ＮＰＣＲ）方法，获得了中国猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）兔脾组织毒５１１０个碱基（２２４０～７３５０）的扩增片段，包括其结构蛋白基因ｇｐ５５和非结构蛋白基因ｐ５４及ｐ８０，将其克隆于测序载体中，通过测序确定了这些基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列。     

猪白细胞介素-6基因在大肠杆菌中的表达及其产物的促淋巴细胞增殖活性

为研究猪白细胞介素-6(IL-6)作为免疫佐剂的可行性,用IPTG诱导含有猪IL-6基因的BL21(DE3)LysS工程菌,表达的目的蛋白经超声波破碎,洗涤,8mol/L尿素变性溶解后,用固化金属亲和层析法纯化后用谷胱甘肽再氧化还原法进行复性,并用MTT法对复性的重组蛋白的生物学活性进行分析.结果显示,复性的重组猪IL-6具有良好的刺激淋巴细胞体外增殖的活性.说明重组猪IL-6在作为免疫佐剂方面有一定的应用价值.     

旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE及EITB分析

本文应用SDS-PAGE及酶联免疫电转移印迹(EITB)技术对旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行了初步分析。结果SDS-PAGE可显示15条多肽带。感染旋毛虫猪血清可特异性地识别6种多肽抗原。本项研究为进一步分析、分离旋毛虫功能性抗原打下了基础。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针,建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来,而不与其他猪源病毒发生非特异反应,分别可检测到初始模板中41.8和81.5个拷贝的病毒RNA,与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近,两种方法对152份样品检测的符合率达96.9%~100%。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测,证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性,可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

免疫印迹技术在寄生虫学上的应用

免疫印迹(Immunoblotting),又称Wes-tern Blotting,亦称蛋白质印迹(Protein Blot-ting),是继Southerm Blotting和NorthernBlotting之后所建立的一种专门用于蛋白质的分析方法。由于该法结合了凝胶电泳的高分辨率及免疫检测方法的高敏感性和特异性,因而已成为生物化学、免疫化学及分子生物学等研究领域中的一项十